人參不同部位超氧化物歧化酶活力比較

1、人參不同部位超氧化物歧化酶活力比較李紅艷，趙雨，楊士慧，張鑫，牛放，趙大慶【摘要】目的比較人參不同部位-蘆頭、主根及須根SOD活力， 為探討SOD在人參藥材中的散布及人參各部位的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方式樣品采納中性緩沖液4 浸提24 h,采納改良的鄰苯三酚自氧化 法測定SOD活力，采納考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白含量。結(jié)果人參蘆頭SOD 活力為U/mg,主根SOD活力為U/mg,須根SOD活力為U/mgo結(jié)論人 參SOD活力以蘆頭最高、主根次之，須根最低。【關(guān)鍵詞】人參；蘆頭；主根；須根；超氧化物歧化酶Abstract： ObjectiveTo compare the superoxide dismu

2、tase (SOD) activity of rhizome, taproot and fibrous root of Panax ginseng and to provide the basis of the SOD distribution, the quality evaluation in the different parts of Ginseng and clinical application. MethodsThe samples were extracted by neutral pH buffer at 4 for 24 hs. Coomassie brilliant bl

3、ue method was used to determine the protein concentration, and improved pyrogallol auto-oxidation method was adopted to determine the SOD activity. ResultsThe SOD activitity of rhizome,taproo and fibrous root was U/mg, U/mg and U/mg, respectively. ConclusionThe SOD activity of different ginseng part

4、s is different. The SOD activity in rhizome is the highest, taproot is followed, and fibrous root is the lowest.Key words： Ginseng; Rhizome; Taproot; Fibrous root; SODSOD (Superoxide Dismutase,超氧化物歧化酶)是一種能清 除生物體內(nèi)產(chǎn)生的超氧陰離子自由基(02-)的金屬蛋白酶類，其普遍 存在于一切生物體內(nèi)，能清除超氧陰離子使其生成過氧化氫，然后過 氧化氫又被其他酶分解為水和氧氣，從而減輕或排除超氧陰離子自

5、由 基對機(jī)體的損害1。該酶具有潛在藥用價(jià)值，具有抗衰老、抗炎、抗 輻射、祛斑、抗皺等多種藥理作用1, 2,而且該酶還具有較高的催 化活性和化學(xué)穩(wěn)固性，因此能夠被作為藥劑學(xué)及臨床研究的參考因素 。人參為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Meyer.的干燥 根。研究說明，人參具有抗衰老、抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種藥 理活性4, 5。迄今己知人參根中含有人參皂甘、多糖、蛋白質(zhì)等多 種有效成份，但目前的研究大多針對人參皂甘，關(guān)于人參蛋白尤其是 SOD的研究相對較少69。本實(shí)驗(yàn)通過比較不同產(chǎn)地人參蘆頭、主 根和須根SOD活力，為科學(xué)評判人參不同部位質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。1材料與儀器人參

6、別離購自吉林省靖宇縣、長白縣、撫松縣、臨江市和安 國縣等5個地域，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心姜大成教授鑒定，均為 五加科植物人參Panax ginseng C. A. Meyer.,生常年限均為5年。高速離心機(jī)Minispin,德國Eppendorf公司;CP225D型電子天平（十萬分之一），北京賽多利斯儀器系統(tǒng);LL3000型冷凍干燥機(jī)， 德國Heto公司;UV mini-1240型紫外可見分光光度計(jì)，日本Shimadzu 公司；Multiskan MK3型酶標(biāo)儀，美國Thermo公司。Bradford蛋白質(zhì) 定量試劑盒，北京Tiangen公司；Tris （三羥甲基氨基乙烷），美國Sigma

7、公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。2方式與結(jié)果樣品的制備取5年生不同產(chǎn)地人參各假設(shè)干根，切取蘆頭、 主根及須根，別離磨粉。周密稱取各參粉末2 g,加入10 mmol/L Tris-HCl （pH 緩沖液 10 ml , 4°C浸提 24 h, 10 000 r/min 離心 10 min, 上清液用Um濾膜過濾，搜集濾液，得5批不同來源的樣品共15個。 各樣品留取ml待測定SOD活力，其余液體冷凍干燥，待測蛋白濃度。蛋白含量測定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線采納Bradford蛋白試劑盒法,將0, 10, 20, 30, 40, 50, 60 u 1牛血清白蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)溶液(lmg/ml)別離加入

8、到EP管中，加入PBS緩沖液補(bǔ)足到150 U1,混勻。從各管中依次掏 出15 H1,加入285 口1考馬斯亮藍(lán)染色液，混勻，室溫放置510 min。轉(zhuǎn)置96孔板中，于酶標(biāo)儀595 nm處測定光密度值。以不含BSA 的緩沖液的光密度值作為空白對照，以蛋白濃度為橫坐標(biāo)，光密度值 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程Y=2X + 2,相關(guān)系數(shù)R2=8o測定蛋白含量將凍干后的樣品別離用PBS緩沖液配制成必 然濃度，各取15 U1,加入285 U1考馬斯亮藍(lán)染色液，于酶標(biāo)儀595 nm處測定光密度值，每一個樣品設(shè)3個復(fù)孔，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算蛋 白含量。結(jié)果見表1。S0D活力測定上述樣品別離采納改良的鄰苯三酚

9、自氧化法10進(jìn)行酶活力測定。以1 ml反映液中每分鐘抑制鄰 苯三酚自氧化速度達(dá)50%時(shí)所需的酶量概念為一個活力單位。在堿性 條件下，鄰苯三酚會發(fā)生自氧化，可依照SOD抑制鄰苯三酚自氧化能 力測定SOD活力，以比活力U/mg蛋白表示，每一個樣品測3次取平 均值。結(jié)果見表lo依照表1數(shù)據(jù)，別離統(tǒng)計(jì)不同來源的5批樣品蘆 頭、主根及須根SOD活力。結(jié)果見圖1。表1人參不同部位SOD活力離散度考察利用Excel統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，別離統(tǒng)計(jì)5批樣品蘆頭、主根及須根SOD活力的標(biāo)準(zhǔn)差與平均數(shù)，計(jì)算三者的離散系數(shù)。結(jié)果見表2。表2樣品離散度考察3討論本實(shí)驗(yàn)采納中性緩沖液抽提法從人參中提取人參蛋白，方式 簡便易行。結(jié)果

10、顯示，5批樣品人參蛋白收率均比較高，平均蛋白收 率為。SOD活力測定方式很多，常見的有化學(xué)法、免疫法和等電點(diǎn) 聚焦法。其中化學(xué)法應(yīng)用最普遍，在化學(xué)方式中，又以改良的鄰苯三 酚自氧化法簡單易行較為有效。木實(shí)驗(yàn)采納該法測得人參蘆頭、主根 和須根SOD活力相差差異，這說明人參不同部位存在必然的質(zhì)量不同。離散系數(shù)的大小反映資料中各觀測值的變異程度。本實(shí)驗(yàn)采 納樣本標(biāo)準(zhǔn)差與平均值的比值即標(biāo)準(zhǔn)差系數(shù)考察人參各部位SOD活力 的離散度。表2結(jié)果顯示，蘆頭的離散系數(shù)較大，主根和須根的離散 系數(shù)較小。這說明，人參SOD活力因產(chǎn)地不同而不同專門大，尤其以 蘆頭SOD活力受產(chǎn)地阻礙最大。據(jù)歷代一些本草醫(yī)籍記載，蘆頭

11、具有涌吐作用，因這人參入 藥前要將蘆頭除掉。盡管已有一些報(bào)導(dǎo)以為蘆頭無涌吐作用，但仍有 一些藥廠及醫(yī)院襲用舊法，將蘆頭去掉。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，蘆頭具有 較高的SOD活力，這從側(cè)面反映了蘆頭的藥用價(jià)值。己有研究說明人參不同部位皂汴及無機(jī)元素含量有著明顯區(qū) 別11, 12。本實(shí)驗(yàn)通過比較人參蘆頭、主根和須根SOD活力，結(jié)果 亦顯示了不同部位的含量不同。這提示咱們?nèi)藚⒉煌课豢赡芫哂胁?同的藥用價(jià)值，同時(shí)說明SOD可作為人參質(zhì)量評判的內(nèi)在指標(biāo)之一。【參考文獻(xiàn)】1馬振華，楊紅強(qiáng)，楊瓊.超氧化物歧化酶(SOD)的功能及 應(yīng)用J.新學(xué)術(shù)，2020, 4:316.2時(shí)沁峰，曹威榮.超氧化物歧化酶(SOD)的研

12、究概況J. 畜禽業(yè)，2020, 4:66.3 Anne D. , Achim Z. , Ralph P. , et al. Heinemann, and Ivana Ivanovic ' -Burmazovic ' Water Exchange on Seven-Coordinate Mn(II) Complexes with Macrocyclic Pentadentate Ligands: Insight in the Mechanism of Mn(II) SOD MimeticsJ. Inorganic Chemistry, 2007, 46: 7.4劉 欣，楊凌，崔昱

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