水-中-細(xì)-菌-總-數(shù)及大腸菌群的檢測方案

1、水中細(xì) 菌總數(shù) 的 檢 測及大腸菌群的測定實(shí)驗(yàn)的目的要求1、學(xué)習(xí)并掌握水的細(xì)菌學(xué)檢測方法2、了解水質(zhì)狀況與細(xì)菌數(shù)量在飲用水檢測中的重要性。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌總數(shù)是指1ml水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37c經(jīng)24h培養(yǎng)后，所生長的 細(xì)菌菌落的總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)是評價(jià)水質(zhì)污染程度的主要衛(wèi)生指標(biāo)。我國現(xiàn)行的 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法GB5750-85規(guī)定水樣中細(xì)菌總數(shù)測定是1ml水樣在普通 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中37C經(jīng)24小時培養(yǎng)所生長的細(xì)菌菌落的總數(shù)。所測定的細(xì)菌總 數(shù)增多說明水被生活廢棄物污染，但不能說明污染的來源。因此必須結(jié)合總大腸 菌群數(shù)來判斷水污染的來源和安全程度。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用平板計(jì)數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)

2、。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們 對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下， 使水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落， 計(jì)算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值o目前一般是采用普通牛肉膏蛋白陳瓊 口匕年美甘 月日A口加分。平板菌落計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)：能測出樣品中的活菌數(shù)。此法常用于某些成品和生物制品檢定以及食品、 水源的污染程度的檢定等。缺點(diǎn)：手續(xù)較繁，而且測定值常受各種因素的影響。生活飲用水細(xì)菌衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)我國飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn): 3個大腸菌群/1L飲水， 100個細(xì)菌總數(shù)/1ml飲水細(xì)菌總數(shù)測定三、實(shí)驗(yàn)儀器和材料（三）實(shí)驗(yàn)器材 （1）菌落總數(shù)的測定:

3、1）培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基，無菌生理鹽水。2）器材：滅菌三角瓶，滅菌的具塞三角瓶，滅菌平皿，滅菌吸管，滅菌試管等。 大腸菌群的測定;1）培養(yǎng)基:伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基:蛋白陳10g,乳糖10g, K2HP0 2g, 2 %伊紅水溶液20M1, 0.65 %美藍(lán)水溶液1OmL瓊月旨17g,水1000ml pH7.1。制法：將蛋白陳、磷酸鹽和瓊脂溶于水中，校正pH后分裝.121c滅菌15min備用。臨用時加入乳糖并熔化瓊脂，冷至50-55C,加入伊紅和美藍(lán)溶液, 搖勻，傾注平板。2）器材：滅菌三角瓶，滅菌的具塞三角瓶，滅菌平皿，滅菌吸管，滅菌試四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:、培養(yǎng)基的制備:實(shí)驗(yàn)前事先準(zhǔn)備好培養(yǎng)

4、基平板（方法見上），每小組 2-4個平板。（二）、取水樣：1、自來水的取樣：先將自來水龍頭用酒精棉擦拭，再用酒精燈火焰滅菌，打開龍頭放水1-2分鐘，用無菌空三角瓶接取水樣200毫升。2、純凈水取樣：用消毒酒精棉擦拭純水機(jī)出口后，先放走部分水，再用 無菌空三角瓶接取水樣200毫升。3、池水、河水或湖水應(yīng)取距水面10 15cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃 塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中， 盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱 中保存。（三）、接種培養(yǎng)：（要求無菌操作）用無菌吸管吸取1毫升水樣，加入平板中（每個水樣平行做兩個平板），用 無菌涂

5、布器涂抹均勻,在培養(yǎng)皿側(cè)面標(biāo)注清楚后，置于37。叵溫箱內(nèi)經(jīng)24h-48、時培養(yǎng)后，統(tǒng)計(jì)細(xì)菌菌落的總數(shù)。（四）、菌落記數(shù)：菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時，可用眼睛直接觀察，必要時用放大鏡檢查以防遺漏。在 記下各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時應(yīng)用。 在求同稀釋度的平均數(shù)時，若其中一個平皿有較大片狀菌落產(chǎn)生時，則不宜采用， 而應(yīng)以無片狀菌落產(chǎn)生的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容；1、記錄實(shí)驗(yàn)方法和步驟。2、列表說

6、明檢測結(jié)果。（1）自來水平板菌落數(shù)1血目來水中細(xì)菌總數(shù)12(2)飲用水平板菌常數(shù)1血目來水中細(xì)菌總數(shù)123、思考題：(1)從自來水的細(xì)菌總數(shù)結(jié)果來看，是否合乎飲用水的標(biāo)準(zhǔn)？(2)你所測的水樣污穢程度水中大腸菌群的測定濾膜法濾膜法所使用的濾膜是一種微孔濾膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜的濾器 中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌即被均勻地截留在膜上，然后將濾膜貼于大腸菌群選擇性培 養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。再鑒定濾膜上生長的大腸菌群的菌落， 計(jì)算出每升水樣中含有 的大腸菌群數(shù)(MPN)。(1)準(zhǔn)備工作：1)濾膜滅菌：將3號濾膜放入燒杯中，加入蒸儲水，置于沸水浴中蒸煮滅菌3次，每次15min 前兩次煮沸后需換無菌水洗滌2-3次

7、，以除去殘留溶劑。2)濾器滅菌：準(zhǔn)備容量為500mL的濾器，用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌，也 可用121 C高壓滅菌20min 。3 )培養(yǎng)： 將品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基放入37 c培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)溫30-60min(2)過濾水樣：1)用無菌銀子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上貼放于已滅菌的濾床上， 輕輕地固定好濾器漏斗。水樣搖勻后，取 333mL注入濾器中，加蓋，打開濾器 閥門，在一50kPa壓力下進(jìn)行抽濾。2)水樣濾完后再抽氣約5s,關(guān)上濾器閥門，取下濾器，用無菌銀子夾取濾膜 邊緣部分，移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜截留細(xì)菌面向上與培養(yǎng)基完全緊 貼，兩者間不得留有間隙或氣泡。若有氣泡需用銀子輕輕壓實(shí)，倒放在 37 C培 養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16-18h o(3)結(jié)果判定：1)挑選符合下列特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。紫紅色，具有金屬光澤的菌落。深紅色，不帶或略