大腸菌群得計(jì)數(shù)試驗(yàn)

1、大腸菌群計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)MPN計(jì)數(shù)法一、設(shè)備與材料250ML隹形瓶3個(gè) 100ML 燒杯1個(gè)250MLs筒1個(gè)1000ML 燒杯1個(gè)15*150mnM管3個(gè) 1ML 刻度吸管4個(gè)18*180mnM管 20 個(gè)玻璃棒1個(gè)剪刀1把均質(zhì)器電爐二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1、配制培養(yǎng)基：LST培養(yǎng)基得配制：杜氏小管接種環(huán)1個(gè)藥匙2個(gè)天平（感量0、1g）洗耳球用天平稱取17、8gLST培養(yǎng)基于錐形瓶中加入500ML蒸儲(chǔ)水 加熱煮沸至完全溶解分裝于裝有杜氏小管得大試管中，每管10ML,共10管高溫滅菌備用BGLB§養(yǎng)基彳#配制：用天平稱取20gBGLBW養(yǎng)基于錐形瓶中加入500ML蒸儲(chǔ)水加熱煮沸至完全溶解 分裝于裝有杜

2、氏小管得大試管中，每管10ML,高溫滅菌備用2、生理鹽水取4、25g氯化鈉于大燒杯中加入500ML蒸儲(chǔ)水溶解取225ML生理鹽水于錐形瓶中分別取9ML生理鹽水于3只小試管中將分裝好得生理鹽水進(jìn)行高溫滅菌3、滅菌：將均質(zhì)杯、100ML燒杯、刻度吸管、剪刀、接種環(huán)、洗耳球 高溫滅菌備用三、取樣在提交得產(chǎn)品中隨機(jī)抽取三箱，從每箱中隨機(jī)抽取未打開(kāi)包裝得產(chǎn)品1袋3袋,抽取不低于250g得樣品作為微生物指標(biāo)檢驗(yàn)試樣。四、檢驗(yàn)程序36C ± 1 d 48h ± 2hC ± 1 C 48h ± 2h36五、操作步驟初發(fā)酵試驗(yàn)1、稱取25g樣品，放人盛有 225m生理鹽水

3、得無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi) ,8 00or/min-10 000r/min 均質(zhì) 1 min-2 min , 制成 1:10 得樣品勻液。2、用1ml無(wú)菌吸管吸取1:10樣品勻液1ml,沿管壁緩緩注人9ml生 理鹽水得無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖 試管，使其混合均勻，制成1:100得樣品勻液。3、換一只新得1ml無(wú)菌吸管吸取1:100樣品勻液1ml,沿管壁緩緩注 人9ml生理鹽水得無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液 面），振搖試管，使其混合均勻，制成1:1000得樣品勻液。4、將三個(gè)連續(xù)稀釋梯度得樣品原液在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 ml 樣品勻液于LST肉湯，每個(gè)稀

4、釋度接種三管。5、同時(shí)做一組空白，在一支LST肉湯中接種1ml生理鹽水。6、36 c ± 1 C培養(yǎng)24h土 2h ,觀察倒管內(nèi)就是否有氣泡產(chǎn)生，如未 產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h土 2h。記錄在24h與48h內(nèi)產(chǎn)氣得LST肉湯 管數(shù)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性，產(chǎn)氣者則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)用接種環(huán)從所有48h土 2h內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣得LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物l環(huán)，移種于（BGLB肉湯管中,36 C ± 1 C培養(yǎng)48h±2h ,觀察產(chǎn)氣情 況。產(chǎn)氣者，計(jì)為大腸菌群陽(yáng)性管。大腸菌群最可能數(shù)（MPN ）得報(bào)告根據(jù)大腸菌群陽(yáng)性管數(shù)，檢索MPN表，報(bào)告每克（或毫升）樣品中大腸

5、菌群得MPNg。大腸菌群最可能數(shù)(MPN)檢索表陽(yáng)性管數(shù)MPN95%M信限陽(yáng)性管數(shù)MPN95碗信限0、10、010、001上限下限0、10、010、001上限下限000<3、09、5220214、5420013、00、159、6221288、7940103、00、1511222358、7940116、11、218230298、7940206、21、218231368、7940309、43、638300234、6941003、60、1718301388、71101017、21、3183026417180102113、6383104391801107、41、3203117517200111113、63831212037420120113、64231316040420121154、5423209318420130164、542321150374202009、21、43832221040430201143、642323290901000202204、542330240421000210153、742331460902000211204、54233211001804100212278、794333>1100420注1:本表采用3個(gè)稀釋度【0、1g(mL)、0、01g(mL)與0、001g(mL),每個(gè)稀釋度接種3管。注2:表內(nèi)所列檢樣量如改用 1g(mL)、0、