龍頭魚中內(nèi)源性甲醛產(chǎn)生的生物化學(xué)機(jī)理研究{修}

1、 代 碼:研究生學(xué)號:上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題、英文題目:食品科羯工程專 業(yè):研究方向: 水產(chǎn)品加工燃孫永姓 名:周德慶研究員指導(dǎo)教師:二?年六月六日圭塑塑鱟奎堂堡主堂垡堡壅刪上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:我恪守學(xué)術(shù)道德,崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外,本論文不包括任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫,我對所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé),并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名.相舢日期:易/年廠月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校

2、有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文?？诒Ｃ?,在 年解密后適用本版權(quán)書本學(xué)位論文屬于.不保密日學(xué)位論文作者簽名:?燧名國埒日期護(hù)年月日 日期:刎庫月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文龍頭魚中內(nèi)源性甲醛產(chǎn)生的生物化學(xué)機(jī)理的研究:幺:魚學(xué)位論文完成時間:指導(dǎo)教師簽字:答辯委員會成員簽字:上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文龍頭魚中內(nèi)源性甲醛產(chǎn)生的生物化學(xué)機(jī)理的研究摘 要甲醛,是一種原生質(zhì)毒,對人體健康有極大的危害

3、。天然是生物體新陳代謝過程中的一種中間產(chǎn)物,但是含量極低。作為有毒化學(xué)物質(zhì),我國食品相關(guān)法律禁止將添加到食品中。國內(nèi)外大量研究證明許多水產(chǎn)品中存在內(nèi)源性,而我國關(guān)于水產(chǎn)品中內(nèi)源性的研究還處于起步階段,有關(guān)其產(chǎn)生機(jī)理論述更是鮮有報道,因此,我國目前的水產(chǎn)品中含量標(biāo)準(zhǔn)的制定在科學(xué)性和實用性方面都存在較大問題,甚至對有關(guān)行業(yè)的健康發(fā)展產(chǎn)生了負(fù)面影響。同時鑒于目前市場上依然存在人為添加的現(xiàn)象,如何分辨水產(chǎn)品中的是人為添加的還是自身產(chǎn)生的,也是擺在質(zhì)監(jiān)部門面前的一道亟待解決的難題。本論文的研究目的就是探索內(nèi)源性產(chǎn)生的機(jī)理、影響因素等,以期為水產(chǎn)品中限量標(biāo)準(zhǔn)的制定和完善提供科學(xué)依據(jù)。在確定龍頭魚能夠產(chǎn)生內(nèi)

4、源性的基礎(chǔ)上,本論文進(jìn)行了一系列實驗,得到以下結(jié)果:.貯藏過程中龍頭魚樣品中和二甲胺,不斷增加,證明龍頭魚中內(nèi)源性的存在;相對于龍頭魚的幽門盲囊、肝臟以及肌肉本身,腎臟更能促進(jìn)內(nèi)源性的產(chǎn)生,說明腎臟中的促進(jìn)和產(chǎn)生的活性成分要高于其他內(nèi)臟,因此可以選用腎臟作為提取的基質(zhì)能更容易獲得理想的活性成分:.從龍頭魚腎臟中獲得的提取物能夠分解體外模擬反應(yīng)體系中的氧化三甲胺.生成和,且在不同條件下生成的和為等物質(zhì)的量,為辨別市場上水產(chǎn)品中的是人為添加還是自身產(chǎn)生提供了理論依據(jù);.龍頭魚腎臟提取物在反應(yīng)過程中呈現(xiàn)酶的特性,在不同和溫度作用下具有鐘形曲線,在蛋白質(zhì)變性劑作用下失去催化活性;其最適反應(yīng)條件是,溫度

5、為;證明龍頭魚腎臟提取物中的活性物質(zhì)是一種蛋白質(zhì)酶或者酶系;龍頭魚肌肉浸出液在腎臟提取物作用下和含量均出現(xiàn)增長,證明龍頭魚肌肉中的成分能夠在龍頭魚自身酶的作用下產(chǎn)生內(nèi)源性;.通過實驗發(fā)現(xiàn)對龍頭魚腎臟提取物中的存在抑制作用,提示提取物中的是一種或者一類以金屬離子為激活劑的酶,這種金屬上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文離子是;不同濃度的對體系中的和含量影響極大,直至體系中的底物接近完全分解;而、等二價金屬陽離子對體系中和反應(yīng)體系的作用效含量無影響;還原劑抗壞血酸對含有.果與基本一致,提示我們是而不是還原劑本身對和含量有影響;.探索性地測定多種包括含有內(nèi)源性的水產(chǎn)品樣品以及不含有內(nèi)源性的水產(chǎn)品樣品中的總鐵含量

6、,發(fā)現(xiàn)含有內(nèi)源性的樣品中的總鐵含量明顯要高于不含有內(nèi)源性的樣品,排除不含有的淡水水產(chǎn)品樣品,種海水水產(chǎn)品樣品中總鐵含量與內(nèi)源性含量之間存在顯著的正相關(guān),進(jìn)一步提示了在內(nèi)源性產(chǎn)生之間的密切關(guān)系。本論文初步探討了龍頭魚中內(nèi)源性產(chǎn)生的生物化學(xué)機(jī)理和影響因素,為今后水產(chǎn)品中內(nèi)源性產(chǎn)生機(jī)理的進(jìn)一步研究以及其甲醛限量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)制定奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:內(nèi)源性甲醛, 二甲胺, 龍頭魚, 氧化三甲胺酶, 機(jī)理圭塑塑堂奎堂堡主堂垡笙莖一?一一.一. ,. , .,.:. . , ,; , .; . : , ;,;,; . ,嬲;十江計,什;.。 嬲十., , .、, ;, . .,。 ,:上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文

7、目錄弓 言.水產(chǎn)品中的甲醛?。.的物理化學(xué)性質(zhì)?。.的毒理學(xué)性質(zhì)?.水產(chǎn)品中的來源.在水產(chǎn)品中的存在方式及測定方法。.龍頭魚及龍頭魚內(nèi)源性研究狀況?.龍頭魚簡介。.龍頭魚中內(nèi)源性的研究狀況.氧化三甲胺酶?。.水產(chǎn)品中的?.在海洋生物中分布.海洋生物中的生理作用.與代謝相關(guān)的酶.內(nèi)源性氧化三甲胺脫甲基作用?.活性測定方法?。.的純化?.的鑒定.本論文的研究目的和意義第一章龍頭魚樣品在貯藏過程中含量的變化?小?.材料與方法.儀器與設(shè)備.材料與試劑.方法.標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的標(biāo)定?.標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的標(biāo)定?.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制.龍頭魚肌肉樣品的制備.龍頭魚肌肉中的測定.龍頭魚肌肉中的測定.數(shù)據(jù)處理?.結(jié)果與討論.

8、龍頭魚樣品在貯藏過程中和含量的變化?.小結(jié)第二章龍頭魚腎臟提取物對氧化三甲胺反應(yīng)體系的作用.材料與方法.儀器與設(shè)備?。.材料與試劑?.上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文.方法.提取緩沖液的配制?.。. 底物緩沖液的配制.龍頭魚腎臟提取物的制備.龍頭魚肌肉提取液的制備.反應(yīng)體系.反應(yīng)體系中和的測定.肌肉提取液與腎臟提取物的反應(yīng).肌肉提取液中和的測定?.對腎臟提取物滅活作用.響應(yīng)面設(shè)計和數(shù)據(jù)處理.結(jié)果與討論.單因素實驗以及反應(yīng)體系中與的含量關(guān)系.提取物最適條件的確定.響應(yīng)模型的分析與驗證?.最適條件下腎臟提取物對肌肉浸出液的作用?. 對龍頭魚腎臟提取物的滅活作用。.小結(jié)第三章亞鐵離子等對腎臟提取物活性的影響

9、.材料與方法?.儀器與設(shè)備.材料與試劑.方法?.樣品的濕法消化.工作參數(shù)以及鐵標(biāo)準(zhǔn)曲線.樣品水分的測定。.緩沖體系.緩沖體系中和的測定?.結(jié)果與討論“.對反應(yīng)體系的作用以及金屬離子輔因子的確定.和抗壞血酸對反應(yīng)體系的作用?.水產(chǎn)品中總鐵含量與含量的相關(guān)性.小結(jié)?。結(jié)滄.參考文獻(xiàn)?致謝?上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文引言.水產(chǎn)品中的甲醛水產(chǎn)品一直深受廣大消費者喜愛,隨著市場經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展,人們生活水平的提高以及保健意識的增強(qiáng),水產(chǎn)品的需求越來越大,要求也越來越高。但是近年來,一些不法經(jīng)營者為了保持水產(chǎn)品的新鮮外觀,延長保存期,增加重量,不顧人民群眾的身體健康,用甲醛浸泡處理水產(chǎn)品,造成了水產(chǎn)品不同程度

10、的污染,極大地?fù)p害了消費者的利益,嚴(yán)重威脅著廣大人民群眾的身體健康。但是大量研究和檢測結(jié)果表明許多水產(chǎn)品中還存在內(nèi)源性,如鱈形目的多種鱈魚、魷魚以及狗母魚科的龍頭魚等等。本論文對以龍頭魚為代表的一些水產(chǎn)品中內(nèi)源性產(chǎn)生的機(jī)理,包括生物化學(xué)本質(zhì),影響因素等進(jìn)行了初步的探索。.的物理化學(xué)性質(zhì)天然是生物細(xì)胞在絲氨酸,甘氨酸,甲硫氨酸以及膽堿代謝的中間產(chǎn)物【】。本身是一種無色的刺激性氣體,其水溶液體積比%或者質(zhì)量比%稱為福爾馬林,醫(yī)學(xué)上用作防腐劑和消毒劑。的物理化學(xué)性質(zhì)如表.所示:表.的物理化學(xué)性質(zhì)【】. 英文名稱化學(xué)式 結(jié)構(gòu)簡式分子量 ./外觀 無色氣體自燃點%爆炸極限溶解性 易溶于水沸點 .純?nèi)芤?

11、%溶液熔點 .純?nèi)芤?%上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文.的毒理學(xué)性質(zhì)具有原生質(zhì)毒性,按其毒性分級,屬于中等毒性物質(zhì),在我國有毒化學(xué)品優(yōu)先控制名單上高居第二位【。對人體的急性毒性主要表現(xiàn)在對上呼吸道,眼睛和皮膚的刺激作用。因為的水溶性極高,在沒有到達(dá)肺部以前已基本被上呼吸道粘膜吸收,所以吸入性能夠引起上呼吸道,主要包括鼻腔,咽,氣管和支氣管的損傷;眼部暴露于的主要表現(xiàn)是灼熱感和流淚;而皮膚直接接觸可以引起過敏性皮炎、色斑,甚至壞死。的慢性毒性涉及對免疫、神經(jīng)系統(tǒng)的影響,遺傳生殖毒性和致癌作用也有相關(guān)文獻(xiàn)報道。淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等可介導(dǎo)生物體內(nèi)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng),等人【】將雌性/大鼠暴露于,

12、和濃度下周發(fā)現(xiàn),暴露于下的大鼠體內(nèi)的巨噬細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞比大鼠要明顯增多,但是白細(xì)胞介素卻顯著減低;在體外試驗中,暴露下脾臟培養(yǎng)液上清液中脂多糖刺激產(chǎn)生的丫干擾素明顯下降,而卵清蛋白刺激暴露水平的大鼠中發(fā)現(xiàn)抗卵下生成的單核細(xì)胞誘導(dǎo)蛋白.顯著增加。清蛋白和兩種抗體明顯下降,而數(shù)量沒有發(fā)現(xiàn)變化。對神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的作用。將麻醉的大鼠置于的下暴露.其鼻腭神經(jīng)對戊醇刺激的反應(yīng)明顯降低,用刺激大鼠鼻粘膜處的三叉神經(jīng)末梢?？梢种剖茉嚧笫蟮暮粑省Ｒ种谱饔门c濃度成正比,這在動物自我保護(hù)上有積極意義。但隨.濃度的增加易使受刺激神經(jīng)產(chǎn)生耐受性。三叉神經(jīng)在的作用天后,可產(chǎn)生持續(xù)周的耐現(xiàn)象,而在低于此濃度的作用下則無

13、這種耐受性。研究表明在哺乳動物細(xì)胞的體外試驗中能表現(xiàn)出遺傳毒性【。可以導(dǎo)致動物細(xì)胞不同水平上的損傷,如染色體畸變,堿基突變等等,其導(dǎo)致?lián)p傷的機(jī)理是由于羰基親電性和較小的空間位阻作用,并可以誘發(fā)自由基效應(yīng),因而可以攻擊核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子而引起一系列反應(yīng)。王麗等人【】從水平證實了低濃度可以誘導(dǎo)細(xì)胞斷裂,高濃度則可以誘發(fā)交聯(lián)。生殖毒性的研究主要集中在試驗動物上,易建華等人【】通過人工注射方式對小鼠進(jìn)行暴露,發(fā)現(xiàn)高劑量組的小鼠精子數(shù)量顯著降低,精子活力與畸形率與劑量的關(guān)系存在統(tǒng)計學(xué)意義。能夠引起試驗動物發(fā)生癌變,有人懷疑白上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文血病與有關(guān),北京兒童醫(yī)院血液病研究中心發(fā)現(xiàn),在我國

14、一些大氣污染嚴(yán)重的城市,大約有%的白血病患兒家中短期內(nèi)裝修過房屋;哈爾濱市第一醫(yī)院血液病研究所也發(fā)現(xiàn)多名白血病患兒中,.%的家庭在發(fā)病前半年內(nèi)進(jìn)行過裝修【。但是對人類的致癌作用還沒有確切證據(jù)。.水產(chǎn)品中的來源馬敬軍等人【】認(rèn)為水產(chǎn)品中的的可能來源主要有以下個方面:作為養(yǎng)殖場和一些加工場所設(shè)施、工具等消毒作用使用的:以為原料生產(chǎn)的塑料制品在接觸食品或水產(chǎn)品而發(fā)生的游離的遷移;水產(chǎn)品養(yǎng)殖過程中,作為殺蟲漁藥使用而造成在魚體內(nèi)的殘留;為了較長時間保持水產(chǎn)品新鮮外觀,延長貨架期,增加水產(chǎn)品的持水量而人為地向水產(chǎn)品中添加的;在酶和非酶作用下水產(chǎn)品自身產(chǎn)生的內(nèi)源性。其中人為添加的和自身產(chǎn)生的內(nèi)源性是目前水

15、產(chǎn)品中檢出的主要原因。.在水產(chǎn)品中的存在方式及測定方法在水產(chǎn)品中的存在方式如圖.所示:曲噙甲醛司硅舶甲醪 通迓:澳定臣篝為結(jié)臺甲醛上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文圖水產(chǎn)品中存在狀態(tài)和測定方法【】. 水產(chǎn)品中的游離是指在室溫下處于游離態(tài),能夠用高氯酸溶液或三氯乙酸溶液提取的一部分;可逆結(jié)合是指除去游離,在酸性條件下通過水蒸氣蒸餾法能夠蒸餾出來的一部分;通過蒸餾法測定的一般要比游離含量大得多,所以可逆結(jié)合態(tài)在存在本地含量的水產(chǎn)品中占較大部分?？紤]到在水產(chǎn)品中和是等量存在的,試驗測定的的量要大于,所以水產(chǎn)品中還有一部分不能通過水蒸氣蒸餾的方法提取出來,這部分被稱為不可逆結(jié)合。不可逆結(jié)合的不能直接測定,只能通

16、過測定含量而推算出來【。有人認(rèn)為水產(chǎn)品中游離的含量與水產(chǎn)品對人體毒理學(xué)作用相關(guān),而結(jié)合的含量則是表征水產(chǎn)品質(zhì)構(gòu)變化的重要參數(shù)【。檢測方法最大的問題出現(xiàn)在樣品基質(zhì)中的提取過程,即前處理中【引,由于能夠與魚肉中的蛋白質(zhì)、核酸以及許多小分子物質(zhì)如游離氨基酸,胺類,肌氨酸,核苷酸等發(fā)生反應(yīng),的高反應(yīng)活性導(dǎo)致了其添加實驗的回收率很低【。提取過程中,游離可以通過以下種方法提取:室溫條件下水或者緩沖溶液提取【】:低溫條件下酸溶液提取【】;中性或者堿性條件下蒸餾提取【引。結(jié)合方面,與魚肉組織等通過穩(wěn)定的化學(xué)鍵結(jié)合,這些化學(xué)鍵,如在賴氨酸與精氨酸、天冬氨酸或谷氨酸等氨基酸之間的亞甲基橋,能夠在酸性條件下通過高溫

17、過程斷裂;但是有些亞甲基橋是酸穩(wěn)定性的,比如賴氨酸與酪氨酸以及其他與甲基基團(tuán)與賴氨酸之間的亞甲基橋?qū)λ崴庾饔梅€(wěn)定舊;由于反應(yīng)的多樣性,樣品中總含量測定的難度和不確定度都非常高。目前廣泛接受的是研究冷凍鱈形目魚類中總含量的測定方法,即根據(jù)對應(yīng)關(guān)系測定以含量推算出含量【引。提取液中的定量方法主要是分光光度法,通過顯色產(chǎn)物與吸光值的線性關(guān)系對定量,主要分為試劑法和變色酸法。試劑法的原理是乙酰丙酮與在過量銨鹽作用生成黃色,.二乙?；?,.二氫吡啶,在下比色定量:變色酸法是,.二羥基萘.,.二磺酸與反應(yīng)生成紫色化合物,在處比色定量。.龍頭魚內(nèi)源性研究狀況上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文.龍頭魚簡介俗稱豆腐魚、

18、九吐魚、水潺,屬于硬骨魚綱,龍頭魚燈籠魚目,狗母魚科,龍頭魚屬,是溫?zé)釒ШＱ笱匕吨行⌒偷讞腿馐承贼~類,在我國黃海、東海、南海均有分布,主要產(chǎn)區(qū)集中在浙江和福建沿海,尤以舟山等地最多;主要以小型魚類及甲殼類為食【。圖龍頭魚外形 .?龍頭魚魚體長形,略側(cè)偏質(zhì)柔軟;頭部稍圓,中等大,鼻孔較大,距眼近,眼很小,距吻較近,眼間隔寬,脂眼瞼發(fā)達(dá);身體呈乳白色,透過皮膚中部軸下肌清晰可見;臀鰭末端到尾鰭之間的尾部兩側(cè)有細(xì)小圓鱗,側(cè)線鱗.,身體其他部位鱗稀少而近乎裸露,各鰭鰭式為背鰭.,臀鰭.,胸鰭.,腹鰭;背鰭鰭點與腹鰭起點相對:側(cè)線管發(fā)達(dá),鰾退化【。龍頭魚水分高達(dá).%,因此肉質(zhì)細(xì)嫩多水,不易貯藏和運輸,

19、冷凍對魚體組織影響明顯,一般直接鮮銷。龍頭魚中含有豐富的蛋白質(zhì)、鈣、鐵、磷等,是良好的蛋白質(zhì)、鈣、鐵來源。.龍頭魚中內(nèi)源性的研究狀況由于龍頭魚水分很高而保存期短的特點,在銷售過程中常有不法商販為了延長貨架期而向龍頭魚中添加。然而在確定沒有人為添加的情況下仍發(fā)現(xiàn)龍頭魚中存在,鐘惠英等人【對龍頭魚中含量作了較為系統(tǒng)的調(diào)查,他們分別從市場、剛靠岸的漁船以及確實未加的張網(wǎng)或絲網(wǎng)漁貨物中獲取龍頭魚樣品,用水蒸氣蒸餾.乙酰丙酮分光光度法測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)龍頭魚死亡后肌體自上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文身能產(chǎn)生大量,其含量隨魚體鮮度的下降而升高,但在魚體高度腐敗時急劇下降。魚體死亡后低溫保存.天含量高達(dá)?。以上。于.

20、保存天,含量高達(dá)?以上。市售干制的龍頭魚不論咸品還是淡品,值高達(dá).?岔,張網(wǎng)獲取的樣品不去內(nèi)臟整尾陰干,值高達(dá)?。柳淑芳等人【矧也報道了龍頭魚中存在本底含量的現(xiàn)象。.氧化三甲胺酶一些魚類,包括鱈形目的多種鱈魚,在冷凍保藏過程中質(zhì)量穩(wěn)定性非常差,主要表現(xiàn)在快速的質(zhì)構(gòu)改變,導(dǎo)致魚肉失水發(fā)硬。為了解釋這一現(xiàn)象研究人員作了大量研究工作。大約多年前有人發(fā)現(xiàn)一些魚類,尤其是冷凍時質(zhì)量下降的魚類在冷凍過程中出現(xiàn)和的積累【。日本的一些學(xué)者在世紀(jì)六七十年代在這方面做了許多工作,他們研究了大量魚類品種和不同組織,認(rèn)為和含量最高的組織往往是在內(nèi)臟。同時他們也發(fā)現(xiàn)只要發(fā)現(xiàn)有,也會存在。許多試驗證明和是等量產(chǎn)生的并且由

21、存在于生物體內(nèi)能夠分解氧化三甲胺的一種酶催化產(chǎn)生】。還有一些人認(rèn)為在鱈魚冷凍過程中有可能存在非酶作用的降解,這一降解過程由存在于肌肉中的小分子物質(zhì)如/,半胱氨酸或者?；撬帷?或者其他化合物如主要存在于紅肉,血液或者其他含有高含量血液成分的組織中的血紅素蛋白【】引起。以上溫度下降解的非酶作用機(jī)制中發(fā)現(xiàn)通過和半胱氨酸作用有三甲胺產(chǎn)生。這一領(lǐng)域的其他學(xué)者認(rèn)為冷凍條件下鱈魚中產(chǎn)生的和大部分是由于一種酶或者酶系的作用而產(chǎn)生的。通過向鱈科和非鱈科魚類的白肉中添加具有高活性的組織通過冷凍儲藏都能夠使其產(chǎn)生,而其他如來自非鱈科魚類血液或者腎臟等沒有活性但含有大量血紅素蛋白的組織卻不能在冷凍過程中分解產(chǎn)生和,這

22、也證明了降解的酶學(xué)本質(zhì)。同時催化反應(yīng)進(jìn)行的化合物的熱穩(wěn)定性和高分子量特性也進(jìn)一步說明了此過程的酶學(xué)機(jī)制捌。在無脊椎動物,如魷魚 中發(fā)現(xiàn)有非酶機(jī)制的降解,在加工蒸煮過程中有大量,和產(chǎn)生。許多綜述文獻(xiàn)中匯總了關(guān)于冷藏過程中不同魚類酶促降解以及其對食品質(zhì)量影響的著作【。上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文.水產(chǎn)品中的. 在海洋生物中分布物理化學(xué)性質(zhì)見表.不僅是保持魚類和甲殼類生理功能的重要化合物同時還是導(dǎo)致生鮮和加工水產(chǎn)品變質(zhì)的關(guān)鍵物質(zhì)。盡管一般來說魚類主要通過捕食小型甲殼動物和軟體動物來獲得,但魚類本身具有內(nèi)源性合成的能力【,十足目動物中含量豐富;甲殼類中此類化合物含量也相當(dāng)可觀;而牡蠣,貽貝和蛤蜊中只檢測到

23、少量的。許多綜述中匯總和討論了大量水生動物組織中含量【】。表.總結(jié)了南極地區(qū)魚類,深海鱈科硬骨魚,淡水硬骨魚類和其他魚類含量。表 的物理化學(xué)性質(zhì).性質(zhì)分子量:.:.氧化還原電勢:.眥廠偏摩爾體積:.密度 .,溶液表水生動物中的:. 種類和組織含量?濕重軟體動物章魚,肌肉.魷魚,肌肉板鰓類.鰩,肌肉.鯊,肌肉.甲殼類,肌肉硬骨魚類北大西洋鱈科,白肉或魚片上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文鲆鰈類,白肉紅鲇 ,白肉,魚片鯡侈體鮐魚 ,魚片南極水域南極鱈魚,魚片巧饑鱷冰魚,魚片 北太平洋狹鱈 白肉跖肝臟幽門盲囊膽囊腸體鋁脾深海鱈形目硬骨魚細(xì)鱗擬深海鱈肌肉組織液長尾鱈科肌肉組織液淡水魚類尼羅尖吻鱸 魚片藥羅非魚,

24、魚片魚類中含量可能因餌料等原因而不同,同時受魚齡,魚體大小以及所處環(huán)境鹽分,溫度和壓力【影響。板鰓類軟骨魚和深海硬骨魚的肌肉中含量最高,達(dá)到?濕重。其他海洋硬骨魚類的含量在到?濕重之間。除了極少數(shù)種類夕,淡水水產(chǎn)品中不含有或者含量很少。不同組織中分布情況以阿拉斯加綠鱈數(shù)據(jù)為例在表.中作了描述。與早期研究結(jié)果相反,魚類血液中也發(fā)現(xiàn)有。作為季節(jié)性如水溫變化上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文血清中含量對含量影響的例子,亞洲胡瓜魚在到之間,變化較大。具有冬季適應(yīng)性的太平洋鯡 ,海公魚 和白點六線魚其血清中的濃度在到之間。白肉魚,包括大西洋鱈 和紅魚由 ,淺色肉中的含量要比暗色肉大的多,而紅肉魚的情況恰恰相反【。

25、腦部白質(zhì)含量為通過核磁共振檢測發(fā)現(xiàn)角鯊?濕重,灰質(zhì)中為?,而體壁中為?。】?？傊?海洋魚類各組織中均發(fā)現(xiàn)有不同含量的,有些淡水魚類中也發(fā)現(xiàn)有。.海洋生物中的生理作用滲透壓調(diào)節(jié)有充分證據(jù)證明魚類中的具有調(diào)節(jié)滲透壓的功能。比目魚肌肉中的含量隨和三刺魚著其從海水環(huán)境到淡水環(huán)境的轉(zhuǎn)換而下斟。同樣的現(xiàn)象也出現(xiàn)在盲鰻,當(dāng)將盲鰻置于不同滲透壓的海水中時,其肌肉中的含量與環(huán)境滲透壓大小呈線性相關(guān)【。深海鱈科硬骨魚類肌肉中的含量也與血清滲透能力成線性關(guān)系。最后,板鰓類魚類中的高含量可以解釋為對魚體的滲透保護(hù),作為滲透物具有對尿素的抵消作用【鯽。浮力調(diào)節(jié)有人通過測定其肌肉組織液和血漿中,其他代謝物以及無機(jī)離子的偏

26、摩爾體積研究了其對板鰓類浮力調(diào)節(jié)作用【。通過計算和尿素對黑鯨鯊 浮力的貢獻(xiàn),作者認(rèn)為和尿素對軟骨魚類浮力調(diào)節(jié)有正效應(yīng)。作為尿素拮抗劑人們在研究板鰓類中高濃度的生理功能時發(fā)現(xiàn)和其他甲基胺類與尿素之間的抵消作用。能夠穩(wěn)定高濃度尿素條件下酶的動力學(xué)特性,維持蛋白質(zhì)構(gòu)象【】。上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文海洋板鰓類包括鯊魚和鰩魚等魚類肌肉中和尿素的摩爾比大約為:。在這一比例下板鰓類和非板鰓類中的酶得以保持其活性。的這一保護(hù)機(jī)制通過物理化學(xué)手段研究認(rèn)為尿素和與蛋白質(zhì)之間存在熱力學(xué)代償機(jī)制。對蛋白質(zhì)高壓變性的保護(hù)作用深海硬骨魚類肌肉中高含量的說明可能對靜水壓對細(xì)胞蛋白質(zhì)的脫穩(wěn)作用有抵抗作用【。有人從.深海中生活

27、的魚類白肉中分離純化了乳酸脫氫酶,研究了和靜水壓對 的作用,發(fā)現(xiàn)高濃度的存在能夠降低高壓力導(dǎo)致的值上升。更能說明問題的是.等人】的報道,他們發(fā)現(xiàn)貝加爾湖中淡水片腳類動物體內(nèi)的含量隨著壓力的增大而大量增加。這充分說明了壓力與含量的關(guān)系。.與代謝相關(guān)的酶三甲胺單加氧酶三甲胺單加氧酶催化從合成過程的反應(yīng),反應(yīng)式如下:礦?此酶存在于甲基營養(yǎng)型細(xì)菌【,橈足類哲水蚤目動物以及一些海洋魚類中】。從海洋橈足類哲水蚤部分純化出了三甲胺單加氧酶【。以及兩種南極研究發(fā)現(xiàn)鯡魚 、胡瓜魚魚類肝臟中顯著的單加氧酶活性與這幾種魚類血清中的水平有明顯的相關(guān)性。抑制劑研究表明催化的合成的是含有黃素而不是細(xì)胞色素的單加氧酶。.三

28、甲胺脫氫酶脫氫酶催化的氧化脫甲基作用,產(chǎn)物為和,反應(yīng)式如下:一此酶存在于兼性甲基營養(yǎng)型細(xì)菌中【】,以一種黃素蛋白為電子受體。脫氫酶含有一個.簇和共價結(jié)合的黃素。魚類腐敗茵中沒有發(fā)現(xiàn)脫氫酶【】,冷藏魚類中的和含量在其深度腐敗階段時含量很低。產(chǎn)閾值。在西瓦氏菌屬外周胞質(zhì)組分中發(fā)現(xiàn)了兩種還原酶,純化的酶分子量為,為一種鉬酶。大部分與魚類腐敗相關(guān)的腸桿菌,交替單胞菌屬,發(fā)光桿菌屬和弧菌屬的細(xì)菌都能夠在厭氧生長過程中以作為最終電子受體而使之還原。因此含量是作為表征水產(chǎn)品腐敗程度的重要參數(shù)。.氧化三甲胺脫甲基酶通過脫甲基作用生成和的反應(yīng)過程如反應(yīng)式所示:許多鱈科魚類中都發(fā)現(xiàn)了這一重要內(nèi)源性反應(yīng),其與冷凍儲

29、藏過程中品質(zhì)劣化直接相關(guān)。.內(nèi)源性氧化三甲胺脫甲基作用影響嗄脫甲基酶分布的因素關(guān)于魚類死后產(chǎn)生的催化反應(yīng)是否也能在活體中進(jìn)行,到目前為止還沒有文獻(xiàn)報道。此酶或者此類酶的純化工作需要進(jìn)一步開展。盡管在所有海洋魚類和無脊椎動物以及部分淡水魚類中均有分布,但目前確定的僅有特定種類的海洋動物具有活性】。當(dāng)然,在海洋和淡水生物中真正的分布情況不為人知,因為目前不同作者研究的對象基本上都是具有商業(yè)價值的種類。檢測到和積累的魚類主要隸屬于鱈科,無須鱈科和蛇鼻魚科【。鱈形目是具有的代表性魚類。同時非鱈形目魚類的活性水平要明顯低于鱈形目。無脊椎動物中存在的令人費解,盡管這類生物中存在和,但是好像僅有內(nèi)臟中含有成

30、分。鲆鰈類,紅鲇中沒有發(fā)現(xiàn)存在活性,鯡類除了在大西洋鯡腎臟中發(fā)現(xiàn)活性之外,上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文其他鯡魚也沒有活性。脫甲基酶的生物化學(xué)本質(zhì)在某一特定的物種和組織中,水平有著較大的變異系數(shù)【。諸如性別,成熟階段,所處環(huán)境溫度,餌料情況以及體型大小等因素能夠直接影響到活性。有人觀察到夏季捕捉到的處于產(chǎn)卵期的大型銀無須鱈,其活性是冬季捕獲的非產(chǎn)卵期的小型魚的兩倍。有人對活體中此反應(yīng)的底物提出疑問。如綜述前面所述在魚類等的生理方面有多種功能和作用,但是不同魚體組織和器官中水平與存在降解的酶之間的聯(lián)系并沒有明確。因此有人認(rèn)為在活體中并不具有脫甲基作用【】。和】認(rèn)為酶促降解可能與發(fā)生在活體內(nèi)的脫甲基作用

31、相關(guān),并且與異源化合物的脫毒作用有關(guān)。這些反應(yīng)被認(rèn)為是發(fā)生在肝臟中的微粒膜上。與之相關(guān)的酶被認(rèn)為是電子傳遞組分如黃素蛋白和細(xì)胞色素的復(fù)合物。有人研究了在解剖學(xué)上的分布情況。其中以內(nèi)臟,肌肉和皮膚中的活性最高,內(nèi)臟中的含量比肌肉中的耐】。紅肉通常比白肉的含量高,在一些紅肉含量比較高的種類,如金槍魚和鯖魚中,低溫儲藏過程中僅紅肉中的出現(xiàn)增長【。鱈科魚類中也有此現(xiàn)象【。通過測定活性證明大多數(shù)鱈形目魚類的腎脾等內(nèi)臟活性最高,其他內(nèi)臟和體液如幽門盲囊和血液活性居中,其余的如肝臟和肌肉中協(xié)活性較低【。根據(jù)的分布情況,其活性成分在一些可溶性組分或者內(nèi)臟和組織的勻漿中被分離出來?！康热藦墓纺隔~ 的肝臟中分離出

32、一種,他發(fā)現(xiàn)部分純化的可溶性經(jīng)過堿處理可以分為可溶性和不可溶性組分,且只有這些組分的混合物才具有脫甲基活性。肌肉中存在的酶類。他們發(fā)現(xiàn)等人【研究了紅鱈可溶性組分和肌肉勻漿中均有存在,并對不可溶性成分進(jìn)行了深入而廣泛的研究。和和及等人【分別發(fā)現(xiàn)兩種鱈魚腎臟中分別有%,.%的活性來自非可溶性部分。等人【】發(fā)現(xiàn) 和,婦留凇腎臟和脾臟中上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文%活性來自不可溶組分。在分離純化和定性等方面,由于具有較高的活性,很大一部分工作集中在了從內(nèi)臟提取的不可溶部分.。但也有部分研究關(guān)注肌肉方面的. 活性測定方法活性的測定方法主要是通過在一定時間內(nèi)測定轉(zhuǎn)化為和的的量來確定的。目前文獻(xiàn)中已有幾種測定方

33、法,這些方法的主要區(qū)別在于測定時使用的輔因子種類的不同,其他區(qū)別包括酶孵育過程中是否存在氧氣,測定的產(chǎn)物的不同以及測定過程中的激活劑的不同。氧氣對反應(yīng)過程的影響爭議較大。一般來說有兩種方法去除體系中的氧氣:第一種是抽真空】;第二種是使用葡萄糖和葡萄糖氧化酶,通過催化作用清除體系中的氧氣【舢。部分研究人員在測定過程中沒有除去氧氣【¨。在活性測定方法中應(yīng)用的輔因子種類較多。一些學(xué)者使用,半胱氨酸和抗壞血酸【】以及加入還原性亞甲基藍(lán)【并排除氧氣。這一測定方法相對來說比沒有加入還原劑的方法更靈敏。等人使用了另外一種不加入人工電子供體如亞甲基藍(lán)的測定方法。由于加入或者能夠提高活性,他們認(rèn)為黃素

34、核苷酸是的輔因子。這類輔因子包括黃素核黃素,和。反應(yīng)通過加入三氯乙酸等蛋白質(zhì)變性劑終.,經(jīng)離心等操作去除沉淀部分,測定上清液中的產(chǎn)物。測定反應(yīng)產(chǎn)物的方法也有不同。的測定方法比要來得簡單,所以一般來說的測定是最基本的?？梢酝ㄟ^比色法陰或者關(guān)聯(lián)脫氫酶法測定。測定方法也是比色法,但是操作要繁瑣得多蚓。.的純化盡管屬于膜蛋白,的純化方法與水溶性蛋白的純化方法基本類似。膜蛋白屬于兩親性物質(zhì),需要提供其環(huán)境類似物以保持其活性。特定的蛋白質(zhì)/脂類/去污劑比例在整個純化過程中是非常必要的。如果比例改變可能會對蛋白質(zhì)的功能和性質(zhì)產(chǎn)生影響【】。膜的制備方面,亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞器的膜可能是不溶性存在位置,上海海洋大學(xué)碩

35、士學(xué)位論文但是目前并沒有研究證實哪種細(xì)胞器與活性相關(guān)。有的研究認(rèn)為其與溶酶體膜有關(guān)【引。也有入認(rèn)為存在于肌肉微粒體膜上【。通過加入緩沖溶液進(jìn)行高速勻漿,再通過離心去除可溶性蛋白質(zhì),這一過程可作為粗分離而為進(jìn)一步提取做準(zhǔn)備。在不同去污劑的作用下結(jié)果各不相同。微粒體對各種去污劑均有抵抗作用。.和脫氧膽酸鹽既不會影響活性也不能使之洗脫下來,相比而言十二烷基磺酸鈉則有效得多【。和】使用 . 和將洗脫下來,他們發(fā)現(xiàn)去除 會導(dǎo)致的沉淀現(xiàn)象;和玳【】使用.%濃度的 .從魚類組織中提取了;等人【】使用獲得了,且活性有所提高。色譜分離方面,目前使用不同的色譜層析技術(shù)已實現(xiàn)了對可溶性的分離。等人【】從去污劑萃取的

36、膜組分中利用陰離子交換層析技術(shù)分離出種組分,他們以的.緩沖液平衡.柱,三種組分分別在.,.和. 強(qiáng)度下洗脫。作者也因此認(rèn)為是一個多酶體系。其中一個組分.的活性是上柱的部分純化提取物的.倍,是粗提液活性的倍,產(chǎn)率為.%。.的鑒定由于在純化過程中存在的問題,活性的鑒定比較困難,對反應(yīng)過程中輔因子的研究能讓我們比較好的理解這一反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)催化降解作用需要一種可透析的輔因子【引。在早期即報道了輔因子的本質(zhì)特性,他認(rèn)為存在于海洋生物內(nèi)臟中的熱穩(wěn)定性輔因子對從狗母魚肝臟分離出的是必須的,同時他也報道還原態(tài)的或,黃素以及檸檬酸能夠提高的活性。其他一些物質(zhì)也能改變的活性。它們之中有些物質(zhì)如谷胱甘肽、抗壞血酸

37、,黃素,血紅蛋白,肌紅蛋白和亞甲基藍(lán)能夠提高的活性防】。其他物質(zhì)如碘乙酰胺,氰化物和疊氮化物能夠抑制的活性。表.中列舉了能夠激活或者抑制活性的一些化合物。大多數(shù)作者都報道過核營酸尤其是黃素類核苷酸作為激活劑的現(xiàn)象。其他如亞甲基藍(lán)或者吩嗪硫酸甲酯等含有異咯嗪結(jié)構(gòu)的化合物均是強(qiáng)激活剌】。上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文表影響活性的物質(zhì)【】. 試劑 輔因子 激活劑 無影響 抑制劑核苷酸 核黃素金屬礦¨氨基酸半胱氨酸?；撬醽喤；撬崞渌麃喖谆{(lán)甲萘醌吩嗪硫酸甲酯上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文至少有兩套生理輔因子系統(tǒng)與有關(guān):一套由和核黃素組成,其中黃素是必不可少的;另外一套系統(tǒng)由,抗壞血酸或者半胱氨酸組成】。

38、第一套系統(tǒng)需要厭氧條件【,而第二套系統(tǒng)不受氧氣影響【】。也有研究認(rèn)為氧氣能夠抑制第二套系統(tǒng)的活性【。有人認(rèn)為降解為和反應(yīng)的速率限制因素為輔因子的濃度。向肌肉中添加能夠分解或者抗壞血酸等已知輔因子的化合物能夠降低凍藏期內(nèi)和的產(chǎn)生速率。在金屬離子中,僅發(fā)現(xiàn)具有激活作用,而其他二價陽離子對反應(yīng)無影響。其他離子如在濃度下對反應(yīng)具有抑制作用,或者在較低濃度下對反應(yīng)無影響【。的抑制劑種類也很多。這些化合物中大部分同時也是氧化還原反應(yīng)的抑制劑,屬于強(qiáng)氧化劑,如。氧氣或氧化劑的存在能夠抑制冷凍紅鱈中的酶促降解【,。疊氮化物和氰化物能夠抑制,可能與脫甲基相關(guān)的與肌肉微粒體相關(guān)的血紅蛋白在厭氧條件下并不能被疊氮化

39、物所還原【¨。脫甲基作用能夠被與氧化還原反應(yīng)有關(guān)的化合物所抑制或激活的事實證明催化的反應(yīng)存在與氧化還原酶有關(guān)的電子傳遞機(jī)制。同時該反應(yīng)很有可能存在幾個階段,因為有許多化合物都具有抑制作用【】。研究發(fā)現(xiàn)在特定的組分中分離的,其活性受到脂類尤其是磷脂的影響。等人【朗分離并分析了這類磷脂組分,發(fā)現(xiàn)不同的磷脂/蛋白質(zhì)比例能夠解釋分離組分不同的層析特性。不同組分中的磷脂組成并不相同,一些組分中為極性磷脂。不過這些磷脂似乎對活性并無影響,因為經(jīng)過不同磷脂酶的消化作用并未觀察到活性的改變。上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文脂類和其他相關(guān)蛋白質(zhì)的存在可能會影響到表觀分子量的大小。所以有的文獻(xiàn)中記錄的非常大的分

40、子量并不一定可靠。等人【趵】給出的數(shù)值就在之間。的另一個特性就是其穩(wěn)定性。盡管存在熱變性作用,但是此酶的變性的溫度下限似乎非常低,因為實驗證明在冷凍儲藏的低溫下此酶仍具有活性。有文獻(xiàn)認(rèn)為在.下仍具有活性,但隨著溫度的下降酶活性也隨之下降】。以實驗室魚肉體系和部分純化提取物體系都研究了的熱變性作用。不同的魚類結(jié)果各不相同。阿拉斯加綠鱈在冷凍前在預(yù)加熱在星期內(nèi)能夠減少%的生成量。如果溫度為就能完全抑制和的產(chǎn)生【明。但是與處理對銀鱈完全沒有作用,只有在才能完全抑制和的產(chǎn)生。也許由于不同的試驗條件的原因,提取物的變性試驗結(jié)果也各不相同。處理即能使從紅鱈肌肉微粒體中使用提取的%的活性喪失。而完整的的微粒

41、體組分對熱具有更強(qiáng)的抵抗作用】。從綠鱈幽門盲囊中提取的含有的丙酮粉,在.。處理即喪失全部活性陋】。體外反應(yīng)的最適基本在.左右【,%。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)的最適為中性。活性中心:等人【】在對綠鱈骨骼肌中的進(jìn)行生化鑒定的過程忠克隆出一組含量極高的蛋白質(zhì)。其中一種以標(biāo)示的編碼一組由個氨基酸組成的含量極高的蛋白質(zhì),此蛋白質(zhì)經(jīng)和個氨基酸,間修飾作用后轉(zhuǎn)化為,成熟的/含有其中個;另一個以標(biāo)示的在端與有著相同的核苷酸序列,其編碼的蛋白質(zhì)具有一個額外的多聚片段和一個富含的端,端富含片段的氨基酸序列與哺乳動物中的富組氨酸的結(jié)合蛋白具有高度同源性。和的在骨骼肌中含量最豐富,在腎臟等器官中也能檢測到較低濃度的。人工合成的聚

42、合體在的存在下具有顯著的催化活性,而單體和寡聚體沒有活性。純化的和可能與催化活性有關(guān)的結(jié)合能力較低。最后作者認(rèn)為魚體死后在肌肉中形成的多聚.復(fù)合物可能與貯藏過程中的產(chǎn)生有關(guān)系。動力學(xué)特性:部分純化的的動力學(xué)特性研究表明的降解反上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)遵循米氏方程。試驗測定的的值自.不等【.。如此低的說明白肉中并不是其降解反應(yīng)的限速因子,因為鱈形目白肉中的含量遠(yuǎn)高于值【捌。電泳特性:和鼴】研究了的電泳分離。他們將從凝膠過濾柱得到的高分子量的凍干粉,通過非篩選性瓊脂糖基質(zhì)經(jīng)未變性電泳分離得到了了兩條帶,一條遷移率高另一條非常低,兩條帶經(jīng)活性染色均呈陽性。當(dāng)分離基質(zhì)成分改變時.%瓊脂糖,%丙烯酰胺

43、分離得到條帶,兩條高遷移率的帶呈現(xiàn)較強(qiáng)的活性染色特性。.本論文的研究目的和意義近年來,作為影響水產(chǎn)品質(zhì)量和安全的主要問題之一,一直是社會關(guān)注的焦點,各地紛紛要求闡明產(chǎn)生機(jī)理,提出限量標(biāo)準(zhǔn),加強(qiáng)水產(chǎn)品中的健監(jiān)控。國外在引起的內(nèi)源性積累的研究方面已經(jīng)開展了許多的研究工作,但是其機(jī)理和的特性還有許多方面未明了,國內(nèi)在這方面的研究多集中于含量的動態(tài)研究,有關(guān)其產(chǎn)生機(jī)理論述卻鮮有報道,因此目前我國水產(chǎn)品中含量標(biāo)準(zhǔn)的制定在科學(xué)性和實用性方面都存在較大問題,制約了有關(guān)行業(yè)的發(fā)展。同時鑒于目前市場上依然存在人為添加的現(xiàn)象,如何分辨水產(chǎn)品中的是人為添加的還是自身產(chǎn)生的,成為擺在質(zhì)監(jiān)部門面前的一道亟待解決的難題。

44、我國是水產(chǎn)大國,水產(chǎn)品在我國國民經(jīng)濟(jì)和日常生活中占有很重要的地位,水產(chǎn)品內(nèi)源性危害是質(zhì)量安全一個不容忽視的問題,制定科學(xué)合理的限量標(biāo)準(zhǔn)不僅關(guān)系到人民群眾的身體健康,更關(guān)系到一些行業(yè)的健康發(fā)展。凱氏定氮儀:電子分析天平:;.數(shù)控超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司;型控溫電熱套:鄄城華魯電熱儀器有限公司:.水浴恒溫震蕩器:金壇精達(dá)儀器制造廠;.快速混勻器:金壇市金城國勝實驗儀器廠;.全自動鼓風(fēng)干燥箱:上海智城分析儀器制造有限公司;.箱式電阻爐馬弗爐:上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;.低速離心機(jī):雷勃爾;冰柜:澳柯瑪。.材料與試劑磷酸溶液:取磷酸,加入蒸餾水,混合均勻;乙酰丙酮溶液:稱取乙酸銨,溶于蒸餾水中,

45、加入冰乙酸和乙酰丙酮.,混勻,貯存于棕色試劑瓶中,在.冰箱內(nèi)可保存一個月;.?。碘溶液:稱取碘化鉀晶體,溶于水中,加入.碘,待碘完全溶解后,加水定容至,移入棕色瓶試劑中,暗處貯存;?以氫氧化鈉溶液;硫酸溶液:取硫酸,加入蒸餾水,混合均勻;.。硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:按廠 .中規(guī)定的方法標(biāo)定;.%淀粉溶液:此溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配;標(biāo)準(zhǔn)儲備液:吸取.含量為.%溶液于容量瓶中,加水稀釋至刻度,為標(biāo)準(zhǔn)儲備液,冷藏保存周;標(biāo)準(zhǔn)溶液?以:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度,精密吸取適量于上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文容量瓶中,有水定容志刻度,適.標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為?,混合均勻,此溶液應(yīng)于實驗當(dāng)日配制;鹽酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液:稱取干燥鹽酸晶體.,用

46、蒸餾水定容至;鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:根據(jù)鹽酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度,精確吸取適量于;容量瓶中,使標(biāo)準(zhǔn)溶液工%氯乙酸溶液:稱取三氯乙酸溶于蒸餾水;銅銨試劑:稱取乙酸銨,硫酸銅晶體.溶于蒸餾水,加入氫氧溶于蒸餾水,再加入濃氨水,定容至; 化鈉無水硫酸鈉:將硫酸鈉于馬弗爐中脫水;二硫化碳.甲苯溶液%:吸取 與經(jīng)過重蒸脫水的甲苯混勻;%醋酸溶液;龍頭魚:購自舟山市漁港,漁船靠岸龍頭魚后直接加冰封箱運至實驗室處理。.方法.標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的標(biāo)定精密吸取制備的標(biāo)準(zhǔn)儲備液.,置于碘量瓶中,加入. .?碘溶液,.氫氧化鈉溶液,放置 再加入.硫酸溶液,放置用濃度為.?.的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,當(dāng)?shù)味ㄖ恋S色時,即如. .%淀粉

47、指示劑,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失,記錄所用硫代硫酸鈉溶液體積。同時用蒸餾水作空白滴定,記錄空白滴定所用的硫代硫酸鈉溶液的體積。標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度以式計算:五:?.式中:?標(biāo)準(zhǔn)儲備液中的濃度,單位為毫克每升?。;空白滴定消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,單位為毫升;一滴定消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,單位為毫升:硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)的量濃度,單位為摩爾每升?.;一 ?.碘相當(dāng)于的質(zhì)量,單位為毫克;所用標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的體積,單位為毫升。.標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的標(biāo)定上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文精密吸取制備的標(biāo)準(zhǔn)儲備液.于消化管中,加入催化劑消?,.化片,. 和. 再加入.的濃硫酸,靜置放冷,置于 凱氏定氮儀中開始消解,測

48、定樣品的含氮量。.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取/的標(biāo)準(zhǔn)溶液、.、.、.、.、.于納氏比色管中,以蒸餾水補(bǔ)齊至.加入乙酰丙酮溶液,渦旋震蕩混合均勻,置于沸水浴中加熱,取出用流水冷卻至室溫;以空白液為參比,于波長處,以比色皿進(jìn)行比色,測定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。拿望. . . . .圖 標(biāo)準(zhǔn)曲線.?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取含有?以的標(biāo)準(zhǔn)溶液、.、.、.、.、.于納氏比色管中,以蒸餾水補(bǔ)齊.,加入銅銨試劑,精確移取.甲苯溶液,于水浴中保溫,渦旋震蕩使溶液充分反應(yīng),加入醋酸溶液,渦旋震蕩直至溶液甲苯層澄清,靜置,取甲苯層,以無水硫酸鈉脫水,于波長處比色,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文.翟.

49、望?？? 圖 標(biāo)準(zhǔn)曲線.?.龍頭魚肌肉樣品的制備將龍頭魚去皮去頭,小心取肌肉,避免弄破內(nèi)臟造成污染。以解剖剪分別取龍頭魚肝臟、幽門盲囊和腎臟,按照:比例添加這三種內(nèi)臟到肌肉中;用組織搗碎機(jī)搗碎并混合均勻,以肌肉作為空白對照,共得到種樣品;混合均勻后的組織以為一份分裝到碎料白封袋中,于冰箱中貯藏個月,期間測定肌肉中和含量變化。.龍頭魚肌肉中的測定龍頭魚樣品中的游離的測定取樣品.于具塞三角瓶中加入%溶液,振搖使樣品在溶液中均勻分散,靜置,之后將浸提液在條件下離心,取上清液于納氏比色管中,加入乙酰丙酮試劑于沸水浴中加熱,取出后于流水中冷卻至室溫,在處進(jìn)行比色,同時做空白對照。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中的含量。龍頭魚樣品中可逆結(jié)合的測定游離含量按式計算,計算結(jié)果保留兩位小數(shù),五蘭×.%式中:卜浸提液總體積,單位為?？赡娼Y(jié)合的測定取樣品.樣品于圓底燒瓶中,加入蒸餾水,用玻璃棒攪拌均勻,蓋緊玻璃塞浸泡,加入磷酸溶液后立即接入蒸餾裝置進(jìn)行水蒸氣蒸餾,接收管出口事先插入盛有蒸餾水且置于冰水浴的容量瓶中,同時做空白對照。吸取蒸餾液于納氏比色管中,加入乙酰丙酮試劑于沸水浴中加熱,取出后于流水中冷卻至室溫,在波長處進(jìn)行比色,根據(jù)標(biāo)