維生素C的測定——水溶性維生素的測定

1、維生素c的測定水溶性維生素的測定 ，又稱抗壞血酸、抗壞血病維生素，為水溶性的維生素。它是一種不飽和的多羥基化合物，以內酯形式存在，在2位與3位碳原子之間烯醇羥基上的氫可游離h十，所以具有酸性。自然界存在還原型和氧化型兩種抗壞血酸，都可被人體利用。它們可以相互改變，但當氧化型（dhvc)一旦生成二酮基古洛糖酸或其他氧化產物，則活性喪失。維生素c主要食物來源為新奇蔬菜與水果，如西蘭花、菜花、塌棵菜、菠菜、柿子椒等深色蔬菜和花菜，以及柑橘、紅果、袖子等水果含維生素c量均較高。野生的莧菜、苜蓿、刺梨、沙棘、獼猴桃、酸棗等含量尤其豐盛。維生素c難溶于脂肪，易溶于水，其水溶液具有酸性，對酸穩(wěn)定，遇堿或遇熱

2、極易破壞，具有較強的還原性，易氧化，銅鹽可促進其氧化。 測定維生素c的辦法有2,6一二氯靛酚滴定法，2,4一二硝基苯臍比色法、熒光法、高效液相色譜法等。 一、2，6一二氯靛酚滴定法 具有烯醇式分子結構的抗壞血酸分子具有還原性，在中性或弱酸性條件下能定量還原2,6一二氯靛酚染料為無色。此染料在中性或堿性溶液中呈藍色，在酸性溶液中呈紅色。盡頭時，稍過量的2,6一二氯靛酚使溶液展現(xiàn)微紅色。按照染料消耗量即可計算出樣品中還原型抗壞血酸的含量。 樣品中維生素c含量按照下列公式計算： x=t(v-v0）/m(5/100)100 式中：x樣品中維生素c的含量，mg/l00g; t1ml染料溶液（2,6一二氯

3、靛酚溶液）相當于維生素c的質量，mg; v滴定樣液時消耗染料溶液的體積，ml; vo滴定空白時消耗染料溶液的體積，ml; m樣品的質量，g。 解釋及注重事項如下。 (1)2,6一二氯靛酚滴定法測定的結果為食品中的還原型l一抗壞血酸含量，而非維生素c總量。此法是測定還原型l一抗壞血酸最簡便的辦法，適合于大批果蔬，但對紅色果蔬不太相宜。 (2）維生素c在酸性條件下較穩(wěn)定，故樣品處理或浸提都應在弱酸性環(huán)境中舉行。浸提劑以偏磷酸（hp03）穩(wěn)定維生素c效果最好，但價格較貴。普通可采納2草酸代替偏磷酸，價廉且效果也較好。 (3)測定維生素c時，應盡可能分析新奇樣品，在不發(fā)生水分及其他成分損失的前提下，樣

4、品盡量搗碎，研磨成漿狀。需特殊注重的是：研磨時，加入與樣品等量的酸提取劑以穩(wěn)定維生素c。 (4)全部試劑應用新奇重蒸餾水配制。 (5）測定過程中應避開溶液接觸金屬、金屬離子。 (6)樣品勻漿在100ml容量瓶中，可能浮現(xiàn)泡沫，可加入戊醇2一3滴消退之。同時作空白試驗，消退系統(tǒng)誤差。 (7）囫圇操作過程應快速，滴定開頭時，染料溶液應快速加入直至紅色不立刻消逝，而后盡可能一滴一滴地加入，并不斷搖動三角瓶，至粉紅色15s內不消逝為止。樣品中某些雜質還可以還原染料，但速度較慢，故滴定盡頭以浮現(xiàn)紅色15s不褪色為盡頭。 二、2,4一二硝基苯肼法 總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮基古洛糖酸。樣品中還原型

5、抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2,4一二硝基苯肼作用生成紅色的脎，按照脎在硫酸溶液中的含量與總抗壞血酸含量成正比，舉行比色定量。 樣品中抗壞血酸含量按照下列公式計算： x=（v)/mf(100/1000) 式中：x樣品中抗壞血酸含量，mg/100g; 由標準曲線得“樣品氧化液”中總抗壞血酸的濃度，g/ml; v試樣用1草酸溶液定容的體積，ml; f樣品氧化處理過程中的稀釋倍數； m樣品的質量，g。 解釋及注重事項如下。 (1)苯肼比色法簡單受共存物質的影響，特殊是谷物及其加工食品，須要時可用層析法純化。 (2）試驗過程應避光操作。 (3)硫脲可庇護抗壞血酸不被氧化，且可協(xié)助脎的形成。

6、終于溶液中硫脲的濃度應全都，否則影響色度。 (4）試管從冰水中取出后，樣品中因糖類的存在會造成色彩逐漸加深，故必需計時，30min后及時比色。 三、熒光法 樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸后，與鄰苯二胺(opda）反應生成有熒光的喹喔啉。其熒光強度與抗壞血酸的濃度在一定條件下成正比，以此測定食品中抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的總量。 脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物而不與opda反應，以此排解樣品中熒光雜質產生的干擾。 樣品中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量按照下列公式計算： x=（v)/mf(100/1000) 式中：x樣品中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量，mg/100g; 由標準曲線查得或由回來方程算得的樣品溶液濃度，g/ml; v熒光反應所用試樣體積，ml; f樣品溶液的稀釋倍數； m樣品的質量，g。 解釋及注重事項如下。 （1)試驗所有過程應避光。 (2)活性炭用量應精確，其氧化機理是基于表面吸附的氧舉行界面反應，加入量不足，氧化不充分；加入量過高，對抗壞血酸有吸附作用。試驗證實，