熊果酸對大鼠子宮平滑肌收縮的影響

1、熊果酸對大鼠子宮平滑肌收縮的影響        作者：馬力揚(yáng)，李志強(qiáng)，徐敬東 【關(guān)鍵詞】  熊果酸；子宮；平滑肌摘要：目的  觀察熊果酸對離體大鼠子宮活動的影響。方法  將離體子宮肌條在1g的前負(fù)荷下溫育，加入熊果酸1.0×10-8、2.0×10-8、3.0×10-8 、4.0×10-8g/L，以等容量生理鹽水作為自身對照，記錄30min；分別使用不同的受體拮抗劑5min后，再加入熊果酸3.0×10-8g/L。用Biolap 410生物

2、機(jī)能儀記錄熊果酸對離體子宮平滑肌運(yùn)動的影響。結(jié)果  熊果酸可增強(qiáng)離體子宮平滑肌的收縮振幅、頻率和持續(xù)時間，熊果酸劑量與子宮肌興奮作用存在劑量反應(yīng)關(guān)系。并使用受體阻斷劑苯海拉明(2×10-6mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、異博定(2×10-7mol/L)及消炎痛(2×10-5mol/L)觀察其改變。該增強(qiáng)作用可被消炎痛阻斷，而異博定、酚妥拉明、苯海拉明未能阻斷熊果酸的作用。結(jié)論  熊果酸增強(qiáng)作用與前列腺素酶的合成與釋放有關(guān)，不通過型電壓依賴性鈣通道、受體以及H1受體發(fā)揮作用。關(guān)鍵詞：熊果酸；子宮；平滑肌Effect o

3、f ursolicacid on contractile activity of uterinesmooth muscle strips of virginal ratsABSTRACT: Objecitve  To observe the effects of ursolicacid on contractile activity of uterine smooth muscle strips of virginal rats. Methods  20 Wistar virginal rats, weight 200-300g were selected, to reco

4、rd the effects of ursolicacid (1.0×10-8, 2.0×10-8, 3.0×10-8, 4.0×10-8g/L) on contractile activity of uterine smooth muscle strips with Biolap 410 Biological System. Diphenhydramine (2×10-6mol/L), Phentolamine (2×10-6mol/L), Verapamil(2×10-7mol/L), Indomethacin (2&#

5、215;10-5mol/L) were used as antagonists to study the mechanisms of ursolicacid on uterine smooth muscle strips. Results  Ursolicacid could significantly potentiate uterine contractile activity of virginal rats. It could increase the frequencies, prolong the duration and enlarge the amplitude of

6、 contractile activity. The effect of which could be inhibited by the Indomethacin; but could not restrained by other antagonists. Conclusion  The results of Ursolicacid may be mainly primarily with prostaglandin synthese or release, but not mediated by H1 receptor, receptor and Lvoltagedependan

7、t calcium channels.KEY WORDS: ursolicacid; uterine; smooth muscle熊果酸(ursolicacid)又名烏索酸、烏蘇酸，屬三萜類化合物，相對分子質(zhì)量為456，在自然界分布很廣，存在于杜鵑花科植物熊果的葉、果實，玄參植物毛泡桐的葉，茜草科植物梔子的果實，龍膽科植物濕生蕾，木樨科植物女貞的葉，紫威科植物毛子草的地上部分。熊果酸具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，其突出作用為抗腫瘤，它對多種致癌、促癌物有抵抗作用，且對多種惡性腫瘤細(xì)胞有明顯細(xì)胞毒作用和誘導(dǎo)分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已引起重視1。熊果酸對離體平滑肌運(yùn)動影響及機(jī)制的研究鮮見報道。

8、1  材料與方法1.1  材料  熊果酸購自中國藥品生物制品鑒定所(編號7428902)，配制成濃度為4×10-6g/L，備用。肌肉張力換能器(JH2，中國北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所)、Biolap 410生物機(jī)能實驗系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司研制)、CW3恒溫平滑肌槽(上海豪敦工貿(mào)有限公司醫(yī)學(xué)生物學(xué)實驗器件廠)、950mL/L O2與50mL/L CO2組成的標(biāo)準(zhǔn)氣體(中科院蘭州化學(xué)物理研究所特種氣體供應(yīng)站)。受體阻斷劑分別為消炎痛(2×10-5mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、異搏定(2×10-7mol/L)

9、和苯海拉明(2×10-6mol/L)。1.2  方法  成年未孕Wistar大鼠20只，體重250-300g，由蘭州醫(yī)學(xué)院實驗動物室提供(合格證書：醫(yī)動字第3676494號)。動物實驗前24h禁食，飲水不限，并于實驗前72h皮下注射乙烯雌酚0.5mg/kg，造成人工動情期以提高子宮對藥物的敏感性。猛擊大鼠頭部致昏，取卵巢及子宮分叉處之間的中段子宮，剪除周圍組織，沿系膜縱軸剖開子宮角，在Krebs緩沖液中漂洗干凈。將其平鋪固定在盛有石蠟的培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿中充滿Krebs液，并持續(xù)供給950mL/L O2和50mL/L CO2標(biāo)準(zhǔn)氣體。在石蠟盤中，用固定的兩片平行刀

10、片沿平滑肌纖維的方向取寬2mm的縱行肌條，用大頭針將肌條的兩端固定，以肌條平展為宜，內(nèi)膜面朝上，用眼科彎剪刀剪除內(nèi)膜層，用手術(shù)縫線將肌條扎緊打結(jié)，另一端打結(jié)后再結(jié)一個直徑約0.5cm的環(huán)。扎線后的肌條長約5-8mm。將肌條分別安置在恒溫平滑肌肌槽中，每個肌槽中分別盛有5mL 37 Krebs液。肌條在1g的前負(fù)荷下溫育，每20min更換一次5mL新鮮的Krebs液(37)，待肌條的自發(fā)活動平穩(wěn)后再加入1.0×10-8、2.0×10-8、3.0×10-8、4.0×10-8g/L熊果酸，記錄子宮平滑肌收縮情況。加入受體拮抗劑酚妥  

11、60;  拉明(2×10-6mol/L)5min后，再加入熊果酸(3.0×10-8g/L)觀察20min子宮平滑肌肌條收縮的振幅、頻率、收縮的持續(xù)時間。此后，用37 Krebs液沖洗多次。待肌條的自發(fā)活動平穩(wěn)后，依次使用H1受體阻斷劑苯海拉明(2×10-6mol/L)、L型電壓依賴性鈣通道阻斷劑異搏定(2×10-7mol/L)及前列腺素合成酶抑制劑消炎痛(2×10-5mol/L)。藥物終濃度指的是溶于肌槽中5mL溶液后的濃度。     1.3  統(tǒng)計學(xué)方法  所有數(shù)據(jù)均采用均

12、數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。使用SPSS 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗，給藥組與對照組之間采用配對t檢驗。2  結(jié)果隨著熊果酸的劑量增加，子宮出現(xiàn)收縮頻率、收縮幅度增加，持續(xù)時間延長，使子宮肌張力增加，最后出現(xiàn)強(qiáng)直性收縮，熊果酸的劑量與子宮的興奮作用呈正相關(guān)(r=0.9587, P<0.05)(表1，圖1)。熊果酸(3.0×108g/L)的作用可被消炎痛(前列腺素合成酶抑制劑)所阻斷，說明熊果酸是通過作用前列腺素合成酶而對大鼠子宮平滑肌起作用，而使用H1受體阻斷劑苯海拉明、受體阻斷劑酚妥拉明以及L型電壓依賴性鈣通道阻斷劑異博定后，熊果酸增強(qiáng)子宮平滑肌的作用

13、未被阻斷(表2)，說明該作用可能與H1受體、受體及L型電壓依賴性鈣通道無關(guān)。表1  熊果酸對未孕大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響（略）Table 1  The effect of Ursolicacid on contractile activity of uterine smooth muscle strips of virginal rats*P<0.05, *P<0.01 vs. control表2  幾種拮抗劑對熊果酸增強(qiáng)未孕大鼠子宮平滑肌條運(yùn)動的影響（略）Table 2  Effect of antagonists on the con

14、tractile activity of Ursolicacid on uterine smooth muscle strips of virginal rats*P<0.05, *P<0.01 vs. control;  P<0.05, P<0.01 vs. UrsolicacidUrsolicacid (U): 3.0×10-8g/L; Indomethacin: 2×10-5mol/L; Phentolamine: 2×10-6mol/L; Verapamil: 2×10-7mol/L; Diphenhydrami

15、ne: 2×10-6mol/L.圖1  熊果酸對子宮平滑肌收縮頻率和振幅的量效曲線（略）Fig.1 Amplitude and frequency doseeffect curve of Ursolicacid on uterine smooth muscle strips (n=15)3  討論熊果酸又名烏索酸、烏蘇酸。熊果酸在植物界分布較廣，據(jù)不完全統(tǒng)計，在自然界已有34科108種植物中分離得到熊果酸。主要分布在女貞子、山楂、夏枯草和山茱萸等植物中。屬于香樹脂醇五環(huán)三萜類化合物，從中草藥中提取分離得到。有研究表明熊果酸具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，包括抗炎止咳、抗糖尿病、抗脂質(zhì)過氧化、抗抑郁等，尤其是在抗腫瘤、抗氧化、保肝、降血脂方面作用顯著。因其明顯的抗氧化功能，而被廣泛地用作醫(yī)藥和化妝品原料。熊果酸的藥理作用廣泛，不良反應(yīng)少，毒性低，近年來對其提取、含量測定、藥理作用方面進(jìn)行了大量的研究工作13。本實驗發(fā)現(xiàn)，熊果酸對未孕大鼠子宮平滑肌有顯著的增強(qiáng)作用，能增加收縮頻率、振幅、持續(xù)時間以及面積(振幅×持續(xù)時間)，而且有明顯的正相劑量效應(yīng)，對子宮平滑肌收縮作用可被消炎痛(前列腺素合成酶抑制劑)所阻斷。這說明熊果酸