高效液相色譜法測定人血清中伊曲康唑濃度

1、高效液相色譜法測定人血清中伊曲康唑濃度摘要目的:建立了HPLC法測定血清樣品中伊曲康唑的定量分析方法。方法:色譜條件:以ZORBAXTM-C18(5 m,4.6150 mm)為色譜柱;乙腈-水(67.532.5)為流動(dòng)相,檢測波長263 nm;用正庚烷異戊醇(98.51.5)作為提取劑。結(jié)果:三種濃度40,80,300 ng.ml-1回收率分別為105.05%,100.57%,97.91%(n=6);日內(nèi)、日間RSD分別為3.83%,4.05%,3.09%及6.00%,4.90%,4.72%(n=6)。血清中藥物的最低檢測濃度為5 ng.ml-1,在5600 ng*ml-1血藥濃度范圍內(nèi)線性關(guān)

2、系良好,r=0.999 5。結(jié)論:方法靈敏、準(zhǔn)確、結(jié)果滿意。關(guān)鍵詞伊曲康唑,血藥濃度,HPLC High performance liquid chromatographic determinationof itraconazole in human serumBai Lin,Lu Yanxia,Chen Xiulan,et al(General Hospital of PLA,Beijing 100853)ABSTRACTOBJECTIVE:To determine serum concentration of itraconazole.METHODS:HPLC analysis was c

3、arried out by using ODS column and acetonitrile-water(67.532.5) as the mobile phase.The detection wavelength was 263 nm.Itraconazole was extracted from serum with nheptane-iso-Amyl Alcohol(98.51.5) and evaporated to dryness.RESULTS:The linear range was 5600 ng.ml-1,r=0.999 5.The recovery rate of hig

4、h,middle,low concentrations was 105.05%,100.57%,97.91%(n=6),respectively.Coefficients of inter-day and intra-day variations were 3.83%,4.05%,3.09% and 6.00%,4.90%,4.72%(n=6),respectively.CONCLUSIONS:This method is rapid,accurate.KEY WORDS：itraconazol,serum drug concentration,HPLC伊曲康唑(Itroconazol)商品名

5、斯皮仁諾,為第三代三唑類抗真菌新藥。其血藥濃度測定方法,國內(nèi)尚未見報(bào)道。本文采用HPLC法測定伊曲康唑血藥濃度,以滿足藥物動(dòng)力學(xué)的研究和臨床監(jiān)測的需要。1材料1.1儀器美國Waters高效液相色譜儀;510泵,486紫外檢測器,U6K進(jìn)樣閥,BeckmanBD41記錄儀。1.2試藥伊曲康唑膠囊(每粒100 mg)、伊曲康唑?qū)φ掌?、?nèi)標(biāo)物R5101215均由西安楊森公司提供;正康烷(重蒸餾);乙腈,色譜純;甲醇:優(yōu)級(jí)純;其它試劑均為分析純。正常人無藥血清,由醫(yī)院提供。2方法和結(jié)果2.1色譜條件ZORBAXTM-C18色譜柱(4.6150 mm),粒徑:5 m;流動(dòng)相:乙腈-水(67.532.5)

6、;pH:7.07.5;流速:1.0 ml.min-1;檢測波長:263 nm;靈敏度:0.005 AUFS。2.2測定方法.L-1磷酸鹽緩沖液:NaH2PO4-Na2HPO4,pH=7.8。提取液:正庚烷異戊醇=98.51.5;伊曲康唑儲(chǔ)備液:濃度為0.1 mg.ml-1的伊曲康唑甲醇溶液置于冰箱(4 )保存。內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液:濃度0.1 mg.ml-1甲醇溶液置于冰箱(4 )保存。內(nèi)標(biāo)工作液:臨用前取儲(chǔ)備液,用甲醇稀釋成3.6 g.ml-1.L-1的磷酸鹽緩沖液0.5 ml,再加2 ml提取液,振蕩兩次,每次10 min并3 000 r.min-1離心5 min,合并有機(jī)相后加1.5 ml 0.0

7、5 mol.L-1硫酸液回提,再同法振蕩離心并棄去有機(jī)相,加氨試液80 l調(diào)pH=9.0,用提取液同法處理后吸取有機(jī)相,在氮?dú)饬飨?5 水浴吹干,加200 l流動(dòng)相復(fù)溶,取40 l進(jìn)柱分析。色譜見1,同時(shí)作空白。 1伊曲康唑(80 ng.ml-1)提取液(a)和空白血清(b)色譜 伊曲康唑(TR=7.46 min) 內(nèi)標(biāo)(TR=9.92 min) 血清內(nèi)源性雜質(zhì)2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線.ml-12.4回收率及精密度.ml-1.ml-1,每個(gè)濃度分別取0.5 ml并各加內(nèi)標(biāo)工作液30 l,按同法連續(xù)測定6 d,回收率及精密度結(jié)果見表1。表 1回收率及精密度(n=6)濃度/ng.ml-1回收率/%日內(nèi)RSD

8、/%日間RSD/%40105.053.836.080100.574.054.930097.913.94.723討論伊曲康唑?yàn)樽钚乱淮诜V譜抗生素,能同時(shí)殺滅三大類真菌以治療甲真菌病,其具有獨(dú)特的藥物動(dòng)力學(xué)特點(diǎn):高親脂性、對(duì)甲角質(zhì)有很高的親和性,口服后(指)甲中藥物濃度可持續(xù)6個(gè)月以上1,故檢測其血藥濃度很有必要。本實(shí)驗(yàn)亦為研究該藥在指(趾)甲中的濃度打下了一定的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)所用正庚烷經(jīng)重蒸餾處理后配制的提取液雜質(zhì)峰較小。本文所用血清為0.5 ml,所用試劑均較原方法2減少一半,節(jié)省了試劑。本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)樣前需將復(fù)溶后的液體3 000 r.min-1離心5 min,取上清液進(jìn)樣,所得譜雜質(zhì)峰較小,并且可延長色譜柱的使用,另外需定期更換預(yù)柱,以保證峰形及分離效果。武警總醫(yī)院進(jìn)修生作者單位：白林魯燕霞?陳秀蘭哈英霞杜美靜(中國人民解放軍總醫(yī)院北京100853)參考文獻(xiàn)1Cauwenbergh G,Degreef H,Heykants J,et al.Pharmacokinetic profile of orally administered itraconazole in human skin.J Am Acad Dermatol,1988,18:2632Woestenborghs R,Lorreyne W,Heykants J,et a