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文檔簡介

SDS電泳 SDSPAGE 是在要走電泳的樣品中加入含有SDS和b-巰基乙 醇的樣品處理液，SDS即十二烷基磺酸鈉，是一種陰離子表面活性劑 即去污劑，它可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二 級和三級結(jié)構(gòu)，強(qiáng)還原劑b-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的 二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。電泳樣品加入樣品處理液后，要在 沸水浴中煮35 min，使SDS與蛋白質(zhì)充分結(jié)合，以使蛋白質(zhì)完全變 性和解聚，并形成棒狀結(jié)構(gòu)。SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后使蛋白質(zhì)SDS復(fù) 合物上帶有大量的負(fù)電荷，平均每兩個(gè)氨基酸殘基結(jié)合一個(gè)SDS分子， 這時(shí)各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷完全被SDS掩蓋。這樣就消除了各種 蛋白質(zhì)本身電荷上的差異。強(qiáng)陰離子去污劑SDS與某一還原劑并用， 通過加熱使蛋白質(zhì)解離，大量的SDS結(jié)合蛋白質(zhì)，使其帶相同密度的 負(fù)電荷，在聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）上，不同蛋白質(zhì)的遷移率 僅取決于分子量。采用考馬斯亮蘭快速染色，可及時(shí)觀察電泳分離效 果。因而根據(jù)預(yù)計(jì)表達(dá)蛋白的分子量，可篩選陽性表達(dá)的重組體。 2013-10-8 北京同生時(shí)代生物技術(shù)有限公司 抗體活性 p p 流式細(xì)胞儀測定 帶入抗體檢測 選擇合適的抗原與抗體作免疫結(jié)合實(shí)驗(yàn)，包被梯度濃 度的抗原與抗體結(jié)合，用發(fā)光儀測試，看最低抗原檢出濃 度考察抗體活性。 2013-10-8 北京同生時(shí)代生物技術(shù)有限公司 The End Tha

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