中成藥中非法添加降壓類化學(xué)成分的薄層檢測方法的研究

1、 作者簡介鄭榮(1978-,女,碩士,主管藥師,主要從事中藥天然藥物分析工作。3通訊聯(lián)系人,E -mail:wangke1994yahoo 【化學(xué)測定方法】中成藥中非法添加降壓類化學(xué)成分的薄層檢測方法的研究鄭榮1,王柯13,季申(上海市食品藥品檢驗(yàn)所,上海201203摘要目的:建立中成藥中非法添加降壓類化學(xué)成分的薄層檢測方法。方法:采用兩種供試品溶液制備方法和兩種展開條件,用薄層色譜法進(jìn)行非法添加降壓類化學(xué)成分的檢測。結(jié)果:采用上述方法可進(jìn)行中成藥中非法添加利血平、硝苯地平、鹽酸可樂定、哌唑嗪、阿替洛爾、氫氯噻嗪和卡托普利七個化學(xué)成分的快速篩查。結(jié)論:本方法簡便快速,可作為非法添加日常監(jiān)督檢驗(yàn)

2、的有效方法。關(guān)鍵詞中成藥;非法添加;降壓化學(xué)成分;薄層色譜中圖分類號R917文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號1004-8685(200903-0530-03I den ti f i ca ti on of adultera ted chem i ca ls i n an ti -hyperten si on trad iti ona l ch i n ese pa ten t m ed i c i n e by TLCZHEN G Rong 1,WAN G Ke13,J I Shen(Shanghai I nstitute f or Food and D rug Contr ol,Shanghai 20

3、1203,China AbstractO bjecti ve:A s pecific method f or identifcating che m ical drugs added illegally int o anti -hypertensi on traditi onal chinese patent medicines by T LC was established 1M ethods:T wo methods including test s oluti on p reparati on,mobile phase and derivatizati on were devel ope

4、d 1Results:Reser p ine,nifedi p ine,cl onidine hydr ochl oride,p razosin hydr ochl oride,atenol ol,hydr o 2chl or othiazide,cap t op ril were detected res pectively by above t w o methods 1Conclusi on:The methods are fast,sensitive and easy t o operate,which is fit t o be app lied for r outine test

5、of illegal adulterati on 1Key wordsTraditi onal chinese patent medicines;Adulterated;Anti -hypertensi on che m icals;T LC近年來,在中藥中非法添加化學(xué)藥品的事件時有發(fā)生,屢禁不止。非法添加的藥品不僅對患者產(chǎn)生很大的副作用,危害人民群眾用藥安全,還在國內(nèi)外造成惡劣的影響,嚴(yán)重阻礙了中醫(yī)藥的健康發(fā)展。為遏制非法添加的不法行為,依據(jù)藥品管理法實(shí)施條例第五十八條,藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行了大量非法添加檢驗(yàn)方法的研究工作。2003年以來,國家食品藥品監(jiān)督管理局已批復(fù)了40多個涉及中成藥中非法添

6、加化學(xué)藥品檢測的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法及6個液-質(zhì)聯(lián)用(HP LC /MS/MS 通用檢測方法。但由于中藥復(fù)方制劑的復(fù)雜性,以及非法添加行為的隱蔽性,非法添加的檢測仍具有相當(dāng)?shù)碾y度,檢測覆蓋仍未達(dá)到有效的震懾頻度,其關(guān)鍵是尚未形成快速、系統(tǒng)的檢測技術(shù)和檢測標(biāo)準(zhǔn),基層藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)缺乏進(jìn)行非法添加日常監(jiān)督檢驗(yàn)的有效方法1。本研究通過試驗(yàn)摸索,建立了中成藥中非法添加利血平、硝苯地平、鹽酸可樂定、哌唑嗪、阿替洛爾、氫氯噻嗪和卡托普利的薄層檢測方法,可作為日常監(jiān)督的快速檢測。1材料與方法111材料全自動點(diǎn)樣儀(AUT OMATI C T LC S AMP LER 4,瑞士CA 2MAG 公司;攝像儀(C AMAG

7、 REPROST AR 3,瑞士C AMAG 公司。利血平、硝苯地平、鹽酸可樂定、哌唑嗪、阿替洛爾、氫氯噻嗪和卡托普利對照品:由中國藥品生物制品檢定所提供;薄層板(HPT LC -Fertigp latten Nano -DURASI L -20MN 薄層板,MACHEREY -NAGE L 公司。樣品:復(fù)方羅布麻片等市售抽驗(yàn)品種。112方法11211利血平、硝苯地平、鹽酸可樂定、哌唑嗪的檢查1121111對照品溶液的制備:取鹽酸哌唑嗪、利血平、鹽酸可樂定和硝苯地平對照品適量,加甲醇制成每1m l 分別含011、011、015、011mg 的溶液,即得。1121112供試品溶液的制備:取本品1

8、次服用劑量,加氨水1m l,再加氯仿20m l,超聲處理30m in,過濾,濾液蒸干(液體樣品取1次服用劑量,加氨水015m l,再用氯仿20m l 振搖提取,氯仿液蒸干,殘?jiān)眉状?m l 使溶解,即得。1121113測定法:照薄層色譜法試驗(yàn)2,吸取上述供試品溶液2l 和30l,對照品溶液各10l,分別點(diǎn)于同一高效硅膠GF 254薄層板上,以甲苯-二氧六環(huán)-氨水(12:7:1的上層溶 液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254n m 下檢視,供試品色譜中,在與鹽酸哌唑嗪、利血平和硝苯地平對照品色譜相應(yīng)的位置上,不應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn);置紫外光燈(365n m 下檢視,供試品色譜中,在與利

9、血平對照品色譜相應(yīng)的位置上,不應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn);噴以稀碘化鉍鉀試液,供試品色譜中,在與鹽酸可樂定對照品色譜相應(yīng)的位置上,不應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。 11212阿替洛爾、氫氯噻嗪、卡托普利的檢查1121211對照品溶液的制備:取氫氯噻嗪、卡托普利和阿替洛爾對照品適量,加甲醇制成每1m l 分別含3、1和1mg 的溶液,即得。1121212供試品溶液的制備:取本品1次服用劑量(液體樣品取1次用量蒸干,加甲醇20m l,超聲處理30m in,過濾,濾液濃縮至約5m l,即得。1121213測定法:照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述供試品溶液和對照品溶液各2l,分別點(diǎn)于同一高效硅膠GF 254薄層板上,以無水乙

10、醇-氨水(14:1為展開劑,展開,取出,晾干,置碘缸中熏約15m in 后,置紫外光燈(254n m 下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,不應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。置碘蒸氣中熏后,紫外光燈(254nm 下觀察1、阿替洛爾;2、氫氯噻嗪;3、卡托普利;4、陽性樣品;5、陽性樣品;6、陽性樣品;7、陽性樣品;8、混合對照品圖4氫氯噻嗪、卡托普利和阿替洛爾的薄層色譜圖2結(jié)果211方法檢測限按本文所述方法實(shí)驗(yàn),利血平、硝苯地平、鹽酸可樂定、哌唑嗪、阿替洛爾、氫氯噻嗪和卡托普利的最低檢測限分別為015、1、2、011、5、015、2g 。212不同薄層板分離效果觀察分別考察了不同來源的薄層板(

11、自制薄層板、普通市售薄層板、江蘇HSG 薄層板、MN 板及Merk 板,結(jié)果表明自制薄層板和普通市售薄層板的分離效果容易受環(huán)境影響,而不同來源的高效薄層板均可以獲得較為滿意的分離效果。213穩(wěn)定性取供試品溶液,分別于當(dāng)天,第二天和第三天按正文所述方法檢測,結(jié)果表明,供試品溶液穩(wěn)定性良好。214樣品測定實(shí)驗(yàn)中自制了四種陽性樣品,結(jié)果陽性樣品檢出上述七種化學(xué)成分,陽性樣品檢出硝苯地平和哌唑嗪,陽性樣品檢出氫氯噻嗪,陽性樣品檢出阿替洛爾和鹽酸可樂定,與實(shí)際添加情況吻合,說明本方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。按本文所述方法對市售60批降壓類樣品進(jìn)行檢查,結(jié)果均未檢出上述七種非法添加的化學(xué)成分(樣品本身含有上述化

12、學(xué)成分的除外。3討論311添加成分的選擇我所對日常檢驗(yàn)中遇到的非法添加情況,包括常見添加的中成藥類別、添加化學(xué)成分種類、添加形式或手段等內(nèi)容進(jìn)行了總結(jié)分析,確定了利血平、硝苯地平、鹽酸可樂定、哌唑嗪、阿替洛爾、氫氯噻嗪和卡托普利七個添加成分進(jìn)行薄層檢測方法的研究。312展開系統(tǒng)及顯色方法的選擇31211展開系統(tǒng)的選擇經(jīng)過對不同展開系統(tǒng)的研究比較,確定了本研究所述的展開劑。由于卡托普利和阿替洛爾的極性較大,且受酸堿影響較大,經(jīng)大量的實(shí)驗(yàn)摸索,無法采用同一(下轉(zhuǎn)第536頁5m l具塞刻度試管中,準(zhǔn)確加入110m l二硫化碳,緊塞管塞,振搖2m in,解吸2h,解吸液供測定。11612標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

13、用二硫化碳稀釋成0、116、810、40、80g/m l的ECH標(biāo)準(zhǔn)系列。按照色譜條件,將儀器調(diào)節(jié)至最佳測定狀態(tài),進(jìn)樣110l,測定各標(biāo)準(zhǔn)系列,每個濃度重復(fù)測定3次。以測得的峰面積對ECH的濃度(g/m l繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。11613樣品測定按照測定標(biāo)準(zhǔn)系列的色譜條件測定樣品和空白對照的解吸液,測得的樣品峰面積值減去空白對照峰面積值后,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得ECH的濃度(g/m l。11614計(jì)算公式C=c×v V0×D式中:C空氣中ECH的濃度,mg/m3c測得解吸液中ECH的濃度,g/m lV解吸液的體積,m lV0標(biāo)準(zhǔn)采樣體積,LD解吸效率,%2結(jié)果與討論211線性關(guān)系在上述色譜條

14、件下測定ECH標(biāo)準(zhǔn)系列,線性關(guān)系良好,線性回歸方程為Y=015899X-013571,相關(guān)系數(shù)r=019999。3次重復(fù)測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為:0138%、0126%、0121%、0113%,符合文獻(xiàn)3的要求。本方法的最低檢測限為0135g/m l,最低檢測濃度為0112mg/m3(以采集310L空氣樣品計(jì)。212解吸效率試驗(yàn)取6支活性炭管,各準(zhǔn)確加入50l的ECH標(biāo)準(zhǔn)溶液(800g/m l,立即封閉活性炭管兩端,在室溫下放置過夜后用110m l二硫化碳解吸2h,然后按測定標(biāo)準(zhǔn)系列的色譜條件測定解吸液,進(jìn)樣1l。計(jì)算得解吸效率為9015% 9412%,平均解吸效率為9210%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為

15、115%。213采樣效率試驗(yàn)配制高、低兩種濃度的ECH標(biāo)準(zhǔn)氣(1倍和5倍的STE L,串聯(lián)兩支活性炭管,以012L/m in采樣15m in,各平行采樣3組。分別測定前后兩支活性炭管中ECH含量,計(jì)算得采樣效率為9312%9614%,平均采樣效率為9418%。214穩(wěn)定性試驗(yàn)與解吸效率試驗(yàn)相同,活性炭管于室溫下放置5天后用110m l二硫化碳解吸測定,其含量無明顯變化。215穿透容量試驗(yàn)配制濃度為6810mg/m3ECH實(shí)驗(yàn)用氣,在室溫條件下,串聯(lián)兩支活性炭管,以50m l/m in流速采樣7h,分別測定前后兩段炭管中ECH含量,結(jié)果后段未檢出。得出每100mg活性炭對ECH的穿透容量大于11

16、4mg。216干擾試驗(yàn)考慮到現(xiàn)場可能存在苯、甲苯、氯丙烯等物質(zhì)的干擾,經(jīng)測定它們的保留時間均小于5m in(ECH的保留時間為51692m in,所以這些可能的共存物不干擾ECH的測定。217現(xiàn)場測定結(jié)果用本法對我市某化工企業(yè)采集14個點(diǎn)共計(jì)42份空氣樣品進(jìn)行測定,其中一個采樣點(diǎn)的3份樣品ECH含量均超標(biāo),其余結(jié)果都在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。3小結(jié)本方法采用活性炭管采集樣品,可以克服注射器采樣的缺點(diǎn),且樣品在活性炭管中穩(wěn)定性好。在解吸方式上,熱解吸只能使樣品一次進(jìn)樣測定,而用二硫化碳解吸,可重復(fù)多次測定,更能保證結(jié)果的可靠性。同時本法使用HP-I N NOW ax毛細(xì)管柱,采用程序升溫,不僅峰形更加對稱,

17、還減少沸點(diǎn)相近物質(zhì)的干擾,因此用本方法測定,其結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏、可靠。參考文獻(xiàn)1朱銘洪1氣相色譜測定空氣中環(huán)氧氯丙烷方法的改進(jìn)J1江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,17(3:68-6912崔久思,王欽源,王漢平,等1大氣污染監(jiān)測方法M1第2版1北京:化學(xué)工業(yè)出版社,1997:562-57013徐伯洪,閆慧芳1工作場所有害物質(zhì)監(jiān)測方法M1北京:中國人民公安大學(xué)出版社,2003:393-4021(收稿日期:2008-12-05(上接第531頁個系統(tǒng)使七個化學(xué)成分均具有滿意的Rf值,最終確定將上述七個化學(xué)成分分成兩組進(jìn)行鑒別3。31212檢視方法的選擇經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),上述七個化合物中,利血平、硝苯地平、哌唑嗪和氫氯

18、噻嗪均具有熒光淬滅斑點(diǎn),鹽酸可樂定在254n m下斑點(diǎn)較淡,但可采用噴以稀碘化鉍鉀的方法進(jìn)行檢視。利血平和哌唑嗪在365n m下也具有熒光斑點(diǎn),可以利用這一特征區(qū)分利血平和硝苯地平。阿替洛爾和卡托普利經(jīng)碘熏后在254n m下具有清晰的斑點(diǎn)。因此確定了本研究所述的檢視方法4。313供試品溶液的制備方法的選擇實(shí)驗(yàn)中嘗試采用甲醇、甲醇-乙腈,甲醇-氯仿的方法進(jìn)行供試品溶液的制備,結(jié)果均不能夠較好地檢出鹽酸可樂定,后改用氨水氯仿提取的方式進(jìn)行供試品溶液的制備,不僅可以有效提取出鹽酸可樂定,還可以同時檢出利血平、硝苯地平及哌唑嗪。由于鹽酸可樂定的檢出限較高,供試品溶液點(diǎn)樣2l用于利血平、硝苯地平和哌唑嗪的檢測,30l用于鹽酸可樂定的檢測。314薄層色譜法是鑒別中成藥中是否添加化學(xué)藥品的重要手段之一,具有快速、靈敏等特點(diǎn)。但是由于中成藥基質(zhì)復(fù)雜,不同樣品其化學(xué)成分差異較大,因此存在假陽性等問題5。本法為中成藥中非法添加降壓類化學(xué)成分的快速篩查方法,當(dāng)檢出樣品為陽性時,需進(jìn)一步結(jié)合HP LC或HP LC-