抗Ⅱ型膠原抗體的檢測(cè)及其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的意義

1、抗型膠原抗體的檢測(cè)及其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的意義         【摘要】目的了解抗型膠原抗體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)中的臨床意義。方法以改進(jìn)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)179例RA患者和171例其他風(fēng)濕病患者的血清IgG型抗天然及抗變性型膠原抗體水平。結(jié)果RA患者抗天然和抗變性型膠原抗體陽(yáng)性率各為22.3%和36.9%，早期RA患者各為30.0%和36.7%。其他風(fēng)濕病患者中各為3.5%和31.6%，健康人二者均為2.5%?？固烊恍湍z原抗體陽(yáng)性RA患者類風(fēng)濕因子檢出率、患者對(duì)病情活動(dòng)性評(píng)價(jià)高于陰性組(P0.05)

2、?？棺冃孕湍z原抗體和抗天然型膠原抗體同時(shí)陽(yáng)性RA患者的CRP平均水平較高。結(jié)論抗天然型膠原抗體可以作為RA的一個(gè)輔助診斷指標(biāo)?？固烊慌c抗變性型膠原抗體的檢測(cè)有助于判斷RA病情活動(dòng)性。 Anti-type collagen antibodies in rheumatoid arthritis  【Abstract】ObjectiveTo investigate the clinical significance of anti-type-collagens antibody in rheumatoid arthritis (RA).MethodSerum IgG antibodies

3、to native and denatured type collagens (anti-nc and anti-dc ) were detected in 179 patients with RA by an improved enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.ResultsIn RA,the positive rates of anti-nc and anti-dc were

4、22.3% and 36.9%;in early RA were 30.0% and 36.7%,respectively.In other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.Anti-nc positive RA showed higher prevalence rate of RF and higher scores of patients global assessment of disease acti

5、vity (P 0.05).The presence of anti-nc and anti-dc concomitantly was associated with high CRP level in RA patients.ConclusionAnti-nc could serve as a supplemental parameter in diagnosing RA and together with anti-dc may help evaluate the disease activity. 【Key words】Rheumatoid arthritis;Anti-type col

6、lagen antibody;Enzyme-linked immunosorbent assay;C-reactive protein 抗型膠原抗體(antibodies to type collagen)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)病情活動(dòng)性、嚴(yán)重性的關(guān)系目前仍有爭(zhēng)論。本研究參照Fujii等1提出的實(shí)驗(yàn)條件檢測(cè)179例RA患者、171例其他風(fēng)濕病和118名正常人血清的抗型膠原抗體，探討其在RA中的臨床意義。結(jié)果報(bào)告如下。 1資料與方法 1.1一般資料 1.2抗型膠原抗體的體測(cè) 參照Fujii等1的方法。 將天然型和變性型膠原分別溶解于0.05 mol/L的醋酸中，濃度為3 mg/ml。0.02 m

7、ol/L磷酸緩沖液(PB) pH 7.6稀釋膠原溶液，使?jié)舛葹?0 g/ml，加入微量反應(yīng)板孔，每孔100 l，保鮮膜覆蓋，4 過(guò)夜。 在與待檢血清標(biāo)本進(jìn)行溫育之前，包被好的微量反應(yīng)板用含0.05%吐溫20的生理鹽水溶液洗滌3次，然后每孔加入100 l BNGS，室溫(2428 )下封閉30 min，洗滌液洗滌3次。     1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)采用2檢驗(yàn)。 2結(jié)果 2.1ELISA工作濃度的選擇：為便于比較，選擇工作濃度時(shí)以天然型膠原作為包被抗原，測(cè)定血清抗天然型膠原抗體水平。 參照文獻(xiàn)3的方法進(jìn)行。結(jié)果表明，型膠原包

8、被液濃度以40 g/ml，第二抗體辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgG稀釋度以1400，血清以140稀釋為最佳。 2.2RA患者及對(duì)照組血清抗型膠原抗體檢測(cè)結(jié)果：179例RA患者中，抗天然型膠原抗體陽(yáng)性者40例，陽(yáng)性率22.3%，顯著高于健康人和疾病對(duì)照組(3.5%和2.5%)(P0.05)；抗變性型膠原抗體陽(yáng)性者66例，陽(yáng)性率36.9%，與正常對(duì)照組(2.5%)相比差異有極顯著性(P0.000 1)，與其他風(fēng)濕病(31.6%)差異不大。30例早期RA患者抗天然型膠原抗體陽(yáng)性9例，陽(yáng)性率為30.0%。 抗天然型膠原抗體對(duì)RA診斷的敏感性為22.3%，特異性為96.9%，抗變性型膠原抗體對(duì)RA診斷的敏

9、感性為36.9%，特異性為80.3%。      3討論 抗型膠原抗體檢測(cè)方法有多種，目前以ELISA法應(yīng)用最為廣泛。Fujii等1比較了吐溫20、牛血清白蛋白和一些動(dòng)物血清(如兔、雞、牛、羊)阻止人血清免疫球蛋白與酶標(biāo)微量反應(yīng)板的吸附作用后認(rèn)為，與其他動(dòng)物血清及吐溫20相比，兔和羊血清減少非特異性吸附作用效果最好。他用正常新鮮兔血清封閉酶標(biāo)反應(yīng)板，使RA病人與健康對(duì)照者血清的抗型膠原抗體滴度差異明朗化，并進(jìn)一步提出該抗體可作為RA的一早期診斷指標(biāo)4。我們雖未做多種動(dòng)物血清封閉酶標(biāo)反應(yīng)板的比較，但通過(guò)采用Fujii等改進(jìn)的ELISA檢測(cè)血清抗型

10、膠原抗體水平后我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組抗天然型膠原抗體陽(yáng)性率甚低，使其對(duì)RA的診斷特異性達(dá)96.9%，在早期RA中敏感性略高于非早期RA患者，表明該抗體的檢測(cè)可以作為對(duì)RA診斷的一個(gè)補(bǔ)充。 本組RF檢出率在抗天然型膠原抗體陽(yáng)性RA患者較陰性組高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與林冰等5所觀察到的結(jié)果一致。國(guó)外的報(bào)道多認(rèn)為抗天然型膠原抗體陽(yáng)性與RF檢出率無(wú)關(guān)6。是否存在人種差異，有待進(jìn)一步證實(shí)。 CRP為一急性時(shí)相反應(yīng)產(chǎn)物，其水平可作為判斷RA活動(dòng)性的一個(gè)指標(biāo)。Morgan等7報(bào)道僅部分RA患者CRP與抗天然及抗變性型膠原抗體 水平相關(guān)。本組179例RA患者抗變性型膠原抗體陽(yáng)性者血清CRP平均水平明顯高于陰性組，且有

11、高度的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？固烊恍湍z原抗體陽(yáng)性組患者CRP水平偏高。早期RA抗變性型膠原抗體陽(yáng)性患者ESR、CRP水平顯著較陰性者為高，提示這組患者炎癥活動(dòng)似更為顯著。 Charriere等8研究認(rèn)為，抗天然型膠原抗體陽(yáng)性與患者X線病情進(jìn)展較慢、較輕有關(guān)。但林冰等5報(bào)道抗天然型膠原抗體陽(yáng)性RA患者關(guān)節(jié)X線分期較高，認(rèn)為該組病人病情更重。我們的研究未發(fā)現(xiàn)抗天然型膠原抗體陽(yáng)性組與陰性組在放射學(xué)分期、Sharp評(píng)分上有統(tǒng)計(jì)意義的差別。 在本研究中，RA患者抗天然型膠原抗體陽(yáng)性者抗變性型膠原抗體多呈陽(yáng)性，單純抗天然型膠原抗體陽(yáng)性者較少(占全部抗天然型膠原抗體陽(yáng)性RA患者的31.7%)。進(jìn)一步分析抗天然和抗變性

12、型膠原抗體與臨床的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，抗天然型膠原抗體陽(yáng)性與否對(duì)抗變性型膠原抗體與CRP水平的關(guān)系有影響：當(dāng)抗天然型膠原抗體陰性時(shí)，抗變性型膠原抗體與CRP水平即無(wú)明顯關(guān)系，表明抗天然型膠原抗體狀況對(duì)活動(dòng)性同樣起著關(guān)鍵作用，檢測(cè)抗型膠原抗體有助于對(duì)RA活動(dòng)性的估計(jì)。 參 考 文 獻(xiàn) 1,Fujii K,Tsuji M,Murota K,et al.An improved enzyme-linked immunosorbent assay of anti-collagen antibodies in human serum.J Immunol Methods,1989,124:63-70. 2,Arnet

13、t FC,Edworthy SM,Bloch DA,et al.The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1988,31:315-324.        3,馬東來(lái)，張敏，許華林，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清型膠原抗體檢測(cè).中國(guó)實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，1996，8：28-30. 4,Fujii K,Tsuji M,Kitamu

14、ra A,et al.The diagnostic significance of anti-type collagen antibody assay in rheumatoid arthritis.Int Orthop,1992,16:272-276. 5,林冰，吳東海，張榮富，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者抗天然型膠原抗體的測(cè)定及臨床意義.中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，1997，12：170-172. 6,Choi EK,Gateaby PA,McGill NW,et al.Autoantibodies to type collagen:occurrence in rheumatoid arthritis,other arthritides,autoimmune connective tissue diseases,and chronic inflammatory syndromes.Ann Rheum Dis,1988,47:313. 7,Morgan K,Clague RB,Collins I,et& nbsp;al.A longitudinal study of anticollagen antibodi