S010不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程(微柱凝集法)

1、標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程 作業(yè)指導(dǎo)書 SOPREG010.01贛州市人民醫(yī)院輸血科 第 6 頁 共 6 頁文件名不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（微柱凝集法）編制人審核人批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期修改日期簽 字修改日期簽 字復(fù)審日期簽 字復(fù)審日期簽 字不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（微柱凝集法）一、目的對交叉配血不合時、有輸血史、妊娠史、短期內(nèi)需多次輸血的患者血樣本進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，目的為保證臨床輸血的相容性，確保臨床輸血安全。二、方法采用微柱凝集法；三、原理將被檢者血清與篩檢紅細(xì)胞發(fā)生的凝集反應(yīng)在微柱檢測系統(tǒng)中進(jìn)行。微柱檢測系統(tǒng)的上端為反應(yīng)室，將葡萄聚糖凝膠作為凝集反應(yīng)的介質(zhì)裝入檢測卡微柱凝集檢測管中，微柱凝集檢測管

2、中的凝膠的間隙起分子篩作用。凝集反應(yīng)陽性的紅細(xì)胞凝決留在微柱凝集檢測管的上面或中間，反應(yīng)陰性未凝集的紅細(xì)胞將通過凝膠的間隙，沉積在微柱凝集檢測管的底部。四、適用范圍適用于交叉配血不合、有輸血史、妊娠史、短期內(nèi)需多次輸血的患者血樣本及供血者不規(guī)則抗體的篩選。五、儀器設(shè)備普通離心機(jī)；血型血清學(xué)多用離心機(jī)；37免疫微柱孵育器；六、試劑1、試劑名稱：（1）不規(guī)則抗體篩檢卡（微柱凝集法）（2）4%篩檢細(xì)胞（2-8保存）；2、試劑生產(chǎn)廠家：長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司；3、批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S20050061；4、包裝規(guī)格：聚丙烯卡12卡2檢測人份/盒；5、貯藏條件；18-25避光保存。6、有效期：自檢定

3、合格之日起12個月；七、檢測樣本要求1、標(biāo)本類型：普通管靜脈血3ml。2、標(biāo)本采集：見輸血科標(biāo)本管理標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程。3、標(biāo)本儲存和運(yùn)輸：新鮮血28貯存時間不超過72小時。4、標(biāo)本拒收狀態(tài)：標(biāo)識不準(zhǔn)確、標(biāo)本稀釋、細(xì)菌污染，嚴(yán)重溶血等不能測定。八、操作步驟1、將試劑卡做好標(biāo)記；2、分離出被檢者血清；3、將篩檢紅細(xì)胞或譜紅細(xì)胞配制0.5%-0.8%濃度，分別加入標(biāo)記好的微管中，各1滴（50ul）；4、分別加被檢者血清1滴（50ul）；5、將加樣后的試劑卡置37免疫微柱孵育器中孵育15分鐘；6、使用血型血清學(xué)多用離心機(jī)900rpm離心2分鐘，1500rpm離心3分鐘，取出肉眼觀察結(jié)果。7、結(jié)果判斷：根

4、據(jù)所提供的篩檢紅細(xì)胞或譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局來判定結(jié)果。7.1陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。反應(yīng)強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠表面，為強(qiáng)陽性反應(yīng)；復(fù)合物在膠中為弱陽性反應(yīng)；愈靠近膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。7.2陰性結(jié)果：被檢紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的底部。篩檢細(xì)胞反應(yīng)格局編號Rh-hrD+C+-+E-+-c-+e+-+KiddJka+Jkb+MNSM+N-+-S-s+DuffyFya+Fyb-+DiegoDia-KellK-k+LewisLea+-Leb-+Pp1+-8、

5、不規(guī)則抗體篩選陽性標(biāo)本可應(yīng)用已知表現(xiàn)型的8-12個O型紅細(xì)胞進(jìn)一步做不規(guī)則抗體鑒定，以便臨床用血的篩選。九、質(zhì)量控制1、此檢測項目應(yīng)參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)評，且成績合格；2、每日做室內(nèi)質(zhì)量控制，且要求在控。3、嚴(yán)格執(zhí)行查對制度，判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤等引起的差錯。4、檢測標(biāo)本應(yīng)在28保存留一周，以備復(fù)查。十、生物參考區(qū)間 陽性，陰性。十一、注意事項1、檢測標(biāo)本必須正確有標(biāo)識，其血液量、紅細(xì)胞或血漿的質(zhì)量符合實驗要求和受血者當(dāng)前的免疫學(xué)狀態(tài)；2、輸血前檢查要求是輸血前3天內(nèi)的血樣（預(yù)防受血者在輸血前的3個月之內(nèi)可能有妊娠或輸血等免疫史而可能產(chǎn)生不規(guī)則抗體）。3、標(biāo)本血液離體后要求盡快送檢，至檢測完畢最長不能超過3d，每次檢測后受血者和供血者的血標(biāo)本應(yīng)在28保存7天；4、試劑使用前應(yīng)仔細(xì)檢查試劑的貯存條件是否符合要求、是否變質(zhì)失效；5、注意離心力、溫度、紅細(xì)胞濃度及抗原抗體的比例對檢測結(jié)果的影響；6、患者使用的藥物影響的處理：如果使用右旋糖酐、PVP等治療，應(yīng)注意將紅細(xì)胞洗滌；如果受者使用肝素治療，則應(yīng)用硫酸魚精蛋白對抗，使樣本凝結(jié)；十二、參考文獻(xiàn)1、胡麗華主編，臨床輸血檢驗，第1版。中國醫(yī)藥科技出版社，2