EB病毒感染的試驗(yàn)室指標(biāo)

1、EB病毒感染的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)2016-03-08兒科助手EBNAC 聚體帶狀模型EB 病毒（Epstein-Barrvirus,EBV 屬于 4 型皰疹病毒，類似其他皰疹病毒科的病毒，EBVg 染包括增殖性感染（或稱活動(dòng)性感染）和潛伏感染兩種狀態(tài)，EBV 感染人淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞，初次感染后病毒可長期在人上呼吸道上皮細(xì)胞或淋巴組織中潛伏，潛伏感染和終生攜帶是 EBV 感染的重要特征。人群對 EBV普遍易感，大多數(shù)人初次感染發(fā)生在兒童或青少年時(shí)期并可終生攜帶，在中國，8 歲以上人群 90%以上血清學(xué)陽性。傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectiousmononucleosis,IM）是典型的 EBV 初

2、次感染表現(xiàn)；值得注意的是在免疫抑制（如器官移植）、遺傳缺陷（如 X 連鎖淋巴組織增生）或潛伏感染的反復(fù)激活的情況下，EBV染可能導(dǎo)致不良預(yù)后，如發(fā)展成為慢性活動(dòng)性 EB 病毒感染（CAEBV 和 EBVf 目關(guān)的噬血性淋巴組織增生（EBV-HLH。另外 EBV 還與兒童及成人的淋巴瘤等多種月中瘤發(fā)病有關(guān)。因而及時(shí)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷有助于臨床對EBV感染的時(shí)相、 機(jī)體狀況和發(fā)生不良轉(zhuǎn)歸的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，這對于兒童 EBV 感染性疾病的診斷及預(yù)后至關(guān)重要。EBV-DNA 日性是 EBV#在的直接證據(jù)。由于潛伏感染的存在，正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞中也常有低載量的 EBV-DNA 僉出（通常低于 200 拷

3、貝數(shù)/m1）。在活動(dòng)感染發(fā)生時(shí) EBV在人淋巴細(xì)胞中大量增殖（IM 患者一般可達(dá) 103105拷貝數(shù)/m1 并釋放到血漿或淋巴液中。隨著感染的控制，EBV 感染進(jìn)入潛伏狀態(tài)，血漿或淋巴液中的病毒顆粒迅速消失，而外周血淋巴細(xì)胞中的 EBV 仍將以潛伏狀態(tài)保持較高滴度數(shù)月1 年。對于復(fù)發(fā)性感染外周血 EBV-DN 徽量會(huì)更高，CAEBV 可達(dá) 105106拷貝數(shù)/ml 甚至更高， EBV-HLHK!殳在 104106拷貝數(shù)/ml 之間。 由于不同感染狀態(tài)下病毒的狀態(tài)和分布不同，EBV-DNAffl 定結(jié)果的解釋因標(biāo)本來源的不同而有不同。1 .全血：淋巴細(xì)胞是 EBV 感染的靶細(xì)胞，淋巴細(xì)胞中潛伏期

4、 EBV 勺存在和活動(dòng)感染后長達(dá)數(shù)月的持續(xù)陽性使得該檢測結(jié)果不能反映現(xiàn)癥感染，也不適合急性感染如 IM 的診斷。因此外周血單個(gè)核細(xì)胞 EBV-DN 儂量測定更適合復(fù)發(fā)感染如CAEBVEBV-HLHE 移植相關(guān) EBV 感染的診斷和檢測。本方法的一個(gè)缺陷在于單個(gè)核細(xì)胞分離步驟繁瑣，自動(dòng)化程度低，定量結(jié)果受單個(gè)核細(xì)胞的分離效率影響較大。為解決這一問題，有研究者使用吸附法抽提全血 DNAa 行定量，現(xiàn)有大量商品化的抽提系統(tǒng)可供使用，抽提步驟自動(dòng)化程度大大提高，且定量結(jié)果與分離單個(gè)核細(xì)胞的測定結(jié)果具有良好的相關(guān)性。2 .血漿或血清： 血漿中的 EBV-DN 跳自活動(dòng)感染期由感染淋巴細(xì)胞中釋放的病毒顆粒

5、，感染被控制后血液中游離的病毒顆粒和 EBV-DN 儀被免疫系統(tǒng)迅速廓清。因此血漿或血清中的 EBV-DNAR 有活動(dòng)期感染時(shí)為陽性，恢復(fù)期和潛伏感染為陰性，這使得血漿EBV-DNAK 為一個(gè)很好反映活動(dòng)感染的指標(biāo)，在 IM、EBV-HLHffi 淋巴瘤等急慢性活動(dòng)感染患者的血漿中均可檢出，而潛伏感染者多為陰性。3 .上呼吸道標(biāo)本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子：具有取材方便的優(yōu)點(diǎn)，但由于EBV 生絕大多數(shù)人咽喉部定植，無論潛伏感染或活動(dòng)性感染均可檢出，常用于流行病學(xué)調(diào)查和鼻咽癌方面的一些檢查，對 IM 和其他兒科相關(guān) EBV 感染的診斷價(jià)值有限。就 EBV-DNA 僉測的方法學(xué)而言，商品化的 E

6、BV-DNAW 定試劑盒自 20 世紀(jì) 90 年代末上市以來，EBV-DNA 勺測定經(jīng)歷了從半定量、競爭定量到熒光定量的演化，現(xiàn)一般采用熒光定量 PCR 勺方法，分析性能良好，但迄今為止仍無權(quán)威的參考物質(zhì)，市場上多數(shù)試劑盒仍使用自制的以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)品，適宜的第三方質(zhì)控品也不易得到，這為 EBV-DNAW 定的標(biāo)準(zhǔn)化帶來了一定的障礙。EBV0 次感染時(shí)，機(jī)體首先產(chǎn)生針對其殼抗原（viralcapsidantigen,VCA 的 IgM 抗體（VCA-IgM,然后是殼抗原低親和力的 IgG 抗體（VCA-IgG,隨著抗體親和力的成熟，感染后期機(jī)體將產(chǎn)生高親和力的 VCA-IgG 和核心抗原抗體

7、 （EBNA-IgG 并持續(xù)終身。 在急性感染中后期還會(huì)一過性早期抗原抗體 （EA-IgG）出現(xiàn)。 而 IgA 型的抗體與 EBV!入上皮細(xì)胞有關(guān)， 持續(xù)高滴度的 IgA 抗體被認(rèn)為和鼻咽癌有關(guān)。血清中的 EBV 相關(guān)抗體主流檢測方法為 ELISA、化學(xué)發(fā)光和免疫熒光法，臨床應(yīng)用非常廣泛，但由于針對不同抗原或不同亞類的抗體具有不同的臨床意義，相關(guān)抗體的組合測定有助于感染類型和時(shí)相的判斷，檢驗(yàn)項(xiàng)目的合理選擇和正確解釋就顯得非常重要。VCA-IgM 是最常用的 EBV0 次感染的指標(biāo)，然而部分患者可能因 VCA-IgM 缺失而導(dǎo)致漏診；低親和力的 VCA-IgG 在初次感染的早期出現(xiàn)，也可作為初次

8、感染的診斷指標(biāo)。EBNA-IgGffi 高親和力的 VCA-IgG 都在感染后期才出現(xiàn)并可終生攜帶，被視為恢復(fù)期或既往感染的指標(biāo)；對于免疫功能正常的個(gè)體，EBNA-IgG 與VCA-IgG 結(jié)合可用于初次感染和復(fù)發(fā)感染以及感染時(shí)相的判斷。EA-IgG 產(chǎn)生晚于 VCA-IgG 慢性活動(dòng)感染時(shí)可持續(xù)陽性，根據(jù)熒光模式差異 EA可分為彌散型（D）和局限型（R）o 結(jié)合其他抗體檢測結(jié)果，EA 抗體通常用于復(fù)發(fā)感染相關(guān)疾病的診斷。三、EB 病毒感染的其他檢驗(yàn)除 EBV酸和抗體檢測外，感染者的細(xì)胞免疫功能檢測、惡卜 tEBVS 染性疾病易感基因檢測以及 EBV 基因分型也正越來越引起臨床的重視。1 .感

9、染者的細(xì)胞免疫功能檢測：EBV染者的細(xì)胞免疫功能通常通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測定，淋巴細(xì)胞亞群方面 IM 患者主要體現(xiàn)在 CD3 和 CD8+田胞的增高；EBV-HLK 兒典型特征為 NKffl 胞減少；而 CAEBV&者的典型特征為 2 系以上血細(xì)胞計(jì)數(shù)的減低?？?EBV免疫依賴于特異性的細(xì)胞免疫，T 細(xì)胞向 Thl/Th2 的極化狀態(tài)很大程度上決定了免疫殺傷和免疫逃避，通過測定細(xì)胞因子、極化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子以及外周血白細(xì)胞 CCRCCR 聯(lián)達(dá)水平可反映 T 細(xì)胞的極化狀態(tài)，從而對機(jī)體抗病毒免疫功能進(jìn)行評(píng)估。2 .惡性 EB 病毒相關(guān)疾病易感基因檢測：X 連鎖淋巴組織增生是一種 X 染色體連鎖

10、的先天性免疫缺陷病，患者對 EBV 感染高度敏感，發(fā)病急，常表現(xiàn)為暴發(fā)性 IM、HLH 低丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤等，預(yù)后很差，70%以上,患兒于 10歲前死亡，因此早期診斷并及時(shí)進(jìn)行骨髓移植至關(guān)重要，相關(guān)的遺傳學(xué)突變包括X 染色體上的 SH2D1 抹口 XIAP 等基因。另外基因 PRFl、UNC13DSTXll、STXBP2 也可能與原發(fā)性 HLH 有關(guān)。四、總結(jié)EBV 乍為兒童時(shí)期感染的一種常見病毒， 具有導(dǎo)致嚴(yán)重疾病的潛能， 常規(guī)的血清學(xué)、分子生物學(xué)和分子病理學(xué)手段已廣泛應(yīng)用于 EBV 感染及 EBVffi 關(guān)疾病的診斷。 EBV 的血清學(xué)檢查和核酸載量測定是當(dāng)前 EBV 感染相關(guān)疾病實(shí)驗(yàn)室檢查的最主要手段，VCA-IgM和低親和力的 VCA-IgG 對現(xiàn)癥 EBV 感染具有重要意義，對于 IM 等急性、亞急性 EBV 感染而言，血清學(xué)檢查優(yōu)于在恢復(fù)期還保持很高載量的 EBV-DNA 嬰幼兒、器官（或骨髓）移植者、HIV 感染者、月中瘤化療患者等免疫功能不全的受檢者，血清學(xué)檢查可能帶來漏診，對于此類患者還應(yīng)結(jié)合 EBV-DN 徽量進(jìn)行判斷。EBV-DNA量的才金測對 CAEBVEBV-HLH 勺診斷價(jià)值高于 VCA-IgM 血清學(xué)檢查。相對于 EBV 的核酸以及血清學(xué)檢