儀器分析實(shí)習(xí)指導(dǎo)_38733

1、第五章現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)第一節(jié)高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握高效液相色譜法測定蜂蜜中殘留的四環(huán)素的原理 熟悉高效液相色譜法測定蜂蜜中殘 留的四環(huán)素的實(shí)驗(yàn)方法了解高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)與使用方法二、實(shí)驗(yàn)原理（一）四環(huán)素是一種廣譜抗菌素，可用于治療和預(yù)防一些動物性疾病，但如果長期使用，將導(dǎo)致四環(huán) 素類藥物在動物類組織中的殘留。殘留在動物類組織中的四環(huán)素類藥物會影響食用者的健康。四環(huán)素類藥 物的毒性反應(yīng)主要表現(xiàn)為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等，還會造成過敏反應(yīng)、二重感染、致畸胎作 用。因此應(yīng)嚴(yán)格控制其在食品中的殘留量。（二）用酸性的Na2EDTA-Mcllvaine緩

2、沖溶液將蜂蜜中蛋白質(zhì)沉淀，同時將四環(huán)素提取出來，以草酸與乙睛為流動相，C8柱作為色譜柱，反相分離，紫外檢測器檢測，在四環(huán)素的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線 性圍，依據(jù)其測得的峰面積與其含量間的線性關(guān)系進(jìn)行定量分析。三、儀器和試劑（一）儀器1.高效液相色譜儀2紫外檢測器3-渦旋混合器4 -離心機(jī)5 天平（二）試劑6 -甲醇2 -乙睛3-乙酸乙酯4-磷酸二氫鈉5 -鹽酸6 -檸檬酸7-乙二胺四乙酸二鈉8 -草酸四、操作步驟1 提?。? ）稱取5g試樣，置于50mL離心管中，加入30mL0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine溶 液，快速混 合1min,以3500r/min離心10min，上清液倒入另一離

3、心管中。（2）將上清液通過固相萃取柱，用 2mLNa2EDTA-Mcllvaine溶液沖洗，再用20mL水洗，棄去全部流出液，減壓抽干10min，用4mL流動相洗脫，定容至4mL，供液相色譜紫外檢測器測 定。2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(1)稱取四環(huán)素10mg,用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得四環(huán)素儲備液(0.1mg/mL )。準(zhǔn)確移取該溶液1mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得0.01 mg/mL。準(zhǔn)確移取該溶液0，0.05，0.10，0.20，0.40，0.80mL于10 mL量瓶中，用 甲醇稀釋至刻度，推 勻。得四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為0.05, 0.10，0.2

4、0，0.40，0.80 g/mL。3.測定(1)色譜條件：色譜柱：。8色譜柱，150mmX 4.6mm, 5 m ；流動相：0.01mol/L草酸 溶液 (pH=2.5) 乙睛(80： 20);流速：1mL/min;柱溫：室溫；紫外檢測器：檢測波長：355nm。(2)將上述已制備好的不同濃度的四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液一次進(jìn)樣20 L，依據(jù)四環(huán)素的峰面積定量。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度為橫坐標(biāo)，其相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 并計(jì)算回歸方程。(3)樣品的測定：取已處理好的樣品溶液 20 L進(jìn)樣分析，根據(jù)峰面積帶入回歸方程 中計(jì)算。五、結(jié)果計(jì)算按下式可計(jì)算出蜂蜜中四環(huán)素的含量X=CXV/m式中：X為試

5、樣中四環(huán)素的含量，單位為g/g; C為從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的被測組分溶液濃度，單位為 g/mL； V為試樣溶液定容體積，單位為mL ； m為試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為g。六、注意事項(xiàng)(-) 流動相使用前必須經(jīng)過脫氣。如果流動相中含有氣體，在較高的柱壓下會產(chǎn)生氣 泡，使流動 相流動受阻，對分離樣品產(chǎn)生不利影響。(二)固相萃取柱使用前應(yīng)用5mL甲醇和10mL水活化。(凌云)第二節(jié)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中的氟苯尼考一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?一)基本熟悉現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)中高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的測定方法和特點(diǎn)；(二)了解液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的基本原理以及在食品安全檢測中的重要性。二、實(shí)驗(yàn)原理氟苯尼考又

6、名氟洛芬、氟甲碉霉素，分子式為C2H14cl2FNO4S;分子量為358.2127 ;結(jié)構(gòu)式為。氟苯尼考是一種獸用抗菌藥，用于敏感細(xì)菌所致的豬、雞及魚的細(xì)菌性疾病，尤其對呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著。 樣品中的氟苯尼考在堿性條件下，用乙酸乙酯提取，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干，殘?jiān)运芙?，?jīng)正己烷液液萃取脫脂。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，以笊代氯霉素(d5氯霉素)為標(biāo)，MRM離子對方 式檢測，標(biāo)法定量。三、試劑和儀器 甲醇（HPLC ）、乙酸乙酯（AR ）、正己烷（AR ）、氨水（AR，25%28%）、無水硫酸 鈉（AR ）、氟苯尼考和笊代氯霉素（d5氯霉素）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度>99% ）、超純水。液相

7、色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（API 4000 Qtrap），配電噴霧電離離子源（ESI）;分析天平，感量0.01mg和 0.001g ;離心機(jī)，4000r/min小型臺式離心機(jī)，> 13000r/min組織搗碎機(jī)；勻漿機(jī)；減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；渦旋振蕩器；聚丙烯離心管：帶蓋，50mL, 1.5mL ;雞心瓶：25mL ;具塞比色管 等。四、操作步驟（1） 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制1. 100 p g/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：稱取適量氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配成100 P g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-18 C冰箱保存?zhèn)溆谩?.1 P g/m標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：準(zhǔn)確吸取1.00mL 100 p g/八標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100mL容量

8、瓶中，用甲醇稀釋至刻度，于18 C冰箱保存?zhèn)溆谩?.標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：笊代氯霉素（d5一氯霉素）700 口 g/mL溶劑為乙睛，笊化度98%4.1 P g/m標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確吸取1.00mL標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋、定容至刻度，于18 C冰箱保存?zhèn)溆谩?.20ng/mL標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取1.00mL標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液于50mL容量瓶中，以超純 水稀釋至刻 度，于4c冰箱保存?zhèn)溆谩?.標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別準(zhǔn)確吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲備液和標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液，以空白基 質(zhì)溶液配成10、50、100、200、500ng/mL,含標(biāo)10ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。（2） 樣品的制備1 .標(biāo)記：從所取

9、樣品中，取出有代表性的可食部分約500g，用組織搗碎機(jī)充分搗碎均勻，裝入潔凈 容器，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。2 .提取：稱取5g充分搗碎均勻的試樣，精確至0.001g，置于50mL聚丙烯離心管中，加入標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液75.0 L加入25mL乙酸乙酯，0.75mL氨水，3g無水硫酸鈉，勻漿提取30s, 4000r/min 離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL比色管中。另取一 50mL離心管，加入20mL乙酸乙酯，0.60mL氨水，洗 滌勻漿刀10s,洗滌液轉(zhuǎn)移至第一支離心管中，用玻棒攪動殘?jiān)瑴u旋振蕩提取1min，超聲波振蕩提取5min , 4000r/min離心5min，上清液合并至50mL比色管，乙酸乙

10、 酯定容至50.0mL。推勻后移取10.0mL乙酸乙酯提取液于25mL雞心瓶，45C減壓旋轉(zhuǎn)濃縮至千。3 .凈化：雞心瓶中的殘?jiān)?.00mL水溶解，渦旋振蕩混勻，超聲5min，加入3mL正己烷渦旋振 蕩混合30s,靜置分層，棄掉上層的正己烷，再加3mL正己烷渦旋振蕩混合30s,靜置分層，移取部分下層 的水相至1.5mL的聚丙烯離心管中，13000r/min離心5min , 0.2 （im濾膜過濾后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 測定。4 .空白基質(zhì)溶液的制備：稱取5g空白樣本，精確至0.001g，除不加入標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液，其它按照樣品制備、凈化的步驟進(jìn)行。（三）液相色譜條件1 .色譜條件色譜柱：安捷倫Z

11、orbax XDB C-18 , 5八m, 150mM 2.1mm ；柱溫：40 C ;流動相：甲醇冰（4/1 ）； 流速：0.40mL/min ;進(jìn)樣量：10八。2 .質(zhì)譜條件3 子源：電噴霧電離離子源（ESI）;掃描方式：負(fù)離子；檢測方式：多反應(yīng)選擇離子檢測（MRM ）;質(zhì)譜條件的優(yōu)化：以1 口 g/mL的氟苯尼考和笊代氯霉素標(biāo)溶液，針泵直接進(jìn)樣，流速5 fl L/min分別12進(jìn)行MS、MS的優(yōu)化，確定相應(yīng)質(zhì)譜參數(shù)，選擇合適的檢測離子對。電噴霧電壓（IS） : -4200V ;輔助氣溫度（TEM ） ： 600C,其它參數(shù)見下表5-2-1 ：表5-2-1氟苯尼考、笊代氯霉素（d5一氯霉素

12、）質(zhì)譜參數(shù)名稱定性離子對（m/z）7E量離子對（m/z）采集時間（ms）去簇電壓DP（V）碰撞能量CE（V）氟苯尼考356.0/336.0356.0/336.0-75-15356.0/185.0-25笊代氯200霉素326.0/157.0326.0/157.0-55-26五、結(jié)果計(jì)算以標(biāo)法定量，在優(yōu)化的最佳條件下，對基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣， 以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分的峰面積與笊代氯霉素峰面積的比值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分的濃度（或被測組分濃度與笊代氯霉素濃度的比值）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量，得提取液的 含量C。按下式計(jì)算出蔬菜中被測組分的含量V 1000XC-m10

13、00式中：X 試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（P g/kg ;C 從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ n g/mL）；V樣品溶液最終的定容體積，單位為毫升（ mL）； m稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g ）。六、注意事項(xiàng)（1） 樣品采集要均勻、具有代表性；（2） 試樣要搗碎、勻漿徹底；（3） 流動相要過濾、脫氣，并現(xiàn)時配制；（四）避免樣品污染；（5） 色譜柱要充分平衡。（馬安德）第三節(jié)電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測茶葉中鉛、碑及鎘含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）掌握電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）測定元素含量的原理、分析過程中的各項(xiàng)干擾情況 及其消除方法、基本分析步驟（二）熟

14、悉電感耦合等離子體質(zhì)譜儀的基本構(gòu)造及操作（三）掌握元素（總量）分析的樣品前處理方法二、實(shí)驗(yàn)原理ICP-MS由進(jìn)樣系統(tǒng)、離子源和質(zhì)譜儀三個主要部分構(gòu)成。樣品溶液經(jīng)過霧化由載氣送入ICP炬焰 中，經(jīng)過蒸發(fā)、解離、原子化、電離等過程，轉(zhuǎn)化為帶正電荷的正離子，經(jīng)離子采集系統(tǒng)進(jìn)入質(zhì)譜儀，質(zhì) 譜儀根據(jù)質(zhì)荷比進(jìn)行分離。對于一定的質(zhì)荷比，質(zhì)譜積分面積與進(jìn)入質(zhì)譜儀中的離子數(shù)成正比。即樣品 的濃度與質(zhì)譜的積分面積成正比，通過測量質(zhì)譜的峰面積來測定樣品中元素的濃度。三、試劑和儀器（一）試劑硝酸（優(yōu)級純）H2O2 （優(yōu)級純）純水：電阻率大于18.0MQ - cm鉛（Pb）、碑（As ）、鎘（Cd）混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：1

15、0 mg/Lo錯（Ge）、錮（In ）、胡（Bi）標(biāo)溶液：100 p g/L（二）儀器Thermo fisher XSeriesll電感耦合等離子體質(zhì)譜儀Millipore超純水制備儀美國CEM Mars微波消解儀及配套消解管和架子精確控溫電熱消解器千分之一天平100 L、1 mL、5 mL可調(diào)移液器各一支，以及相應(yīng)吸頭若干100 mL容量瓶11個、1000 mL燒杯1個、10 mL量筒1個、1000 mL量筒1個四、操作步驟（一）儀器開機(jī)預(yù)熱（以下步驟基于實(shí)驗(yàn)老師將儀器預(yù)先調(diào)整到Vacuum ready狀態(tài)下進(jìn)行）檢查Ar氣壓力是否在0.60.7MPa圍，排風(fēng)是否正常，電源是否穩(wěn)定；打開計(jì)算

16、機(jī)，啟動Windows，打開循環(huán)冷卻水的電源；雙擊“ Plasma Lab ”圖標(biāo)，進(jìn)入操作軟件主窗口。檢查蠕動泵、ICP炬管、霧化室，關(guān)閉ICP等離子體發(fā)生器窗門；點(diǎn)擊on點(diǎn)火；待儀器點(diǎn)火后，預(yù)熱；（二）標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的制備1 .于1000 mL燒杯中加入594 mL去離子水，再定量吸取6 mL濃硝酸加入燒杯中，攪拌、冷卻， 配制成（1+99）的硝酸溶液；2 .于5個100 mL的容量瓶中分別加入0、50 L、200 L、1 mL和2.5 mL的鉛（Pb）、碑（As ）、鎘（Cd）混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（10 mg/L）,用（1+99 ）的硝酸溶液定容至刻度，配制成濃度濃度分 別為0、5、20、10

17、0、250 g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液系列；（三）樣品處理1 .稱取0.5g茶葉樣品，記下樣品具體重量（精確到小數(shù)點(diǎn)后第三位），平行樣品數(shù)為三份2 .將稱量好的三份平行樣分別放入3支微波消解管中，再取3支微波消解管作制備試劑空白用；每支 消解管中分別加入5 mL濃硝酸和1 mL H2O2，蓋上消解管瓶塞及蓋子；6支消解管對稱放入微波消解架 上，放入微波消解儀中，按照表5-3-1消解程序進(jìn)行樣品消解；表5-3-1茶葉樣品微波消解程序功率爬升時間溫度保持800 W5 min178 c5 min3微波消解程序結(jié)束后，將消解管放到精確控溫電熱消解器上進(jìn)行趕酸操作，溫度設(shè)定100 C,加熱10 h；4.趕好酸的試劑

18、空白及樣品分別轉(zhuǎn)入6個100 mL容量瓶中，每支消解管用少量超純水清洗35 次，清洗液也轉(zhuǎn)移至容量瓶中，最后用超純水定容至刻度，制備成樣品溶液劑試劑空白。（四）測定1 .使用調(diào)諧液調(diào)整儀器各項(xiàng)指標(biāo)，使儀器靈敏度、氧化物、雙電荷分辨率等各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到測定要求，儀器參考條件如下：RF功率為1400 W，載氣流量為0.93 L/min，采樣深度為150 mm，霧化器為同心霧化器、采樣錐類型為銀錐，具體儀器條件應(yīng)該以實(shí)際調(diào)整所獲 條件為主；2 .編輯測定方法、干擾方程、選擇各測定元素及標(biāo)元素、選擇校準(zhǔn)方法、輸入標(biāo)準(zhǔn)系列濃度；3 .引入在線標(biāo)溶液，觀測標(biāo)靈敏度、待標(biāo)信號穩(wěn)定后分別測定試劑空白、標(biāo)準(zhǔn)系列、樣

19、品溶液；4 .繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算回歸方程、獲取試劑空白及樣品溶液濃度（五）關(guān)機(jī)測定完畢，分別用5%硝酸溶液、超純水沖洗樣品管和標(biāo)管直至儀器響應(yīng)值回到基線；點(diǎn)擊of熄火， 關(guān)閉循環(huán)水及Ar氣，將進(jìn)樣系統(tǒng)的蠕動泵管放松，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。五、結(jié)果計(jì)算茶葉樣品中各待測元素的含量由以下公式計(jì)算：（C 樣 C 空）1001000 m其中，w為茶葉樣品中各待測元素的含量（g/g ） ； C樣為儀器所測定的樣品溶液濃度（g/L） ; °空為儀器所測定的試劑空白濃度的平均值（g/L ） ; m為茶葉樣品重量（g）W最終茶葉樣品中各待測元素的含量應(yīng)以三個平行樣品的含量均值來表示：SD。其中W為茶葉樣品中各待

20、測元素的含量均值；SD為標(biāo)準(zhǔn)偏差。六、注意事項(xiàng)（-）干擾及其消除電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定復(fù)雜樣品時常存在以下干擾，在試驗(yàn)過程中應(yīng)該注意消除干擾影響。1同量異位素干擾相鄰元素間的異位素有相同的質(zhì)荷比，不能被四極質(zhì)譜分辨，可能引起異位素嚴(yán)重干擾，選擇待測元素時應(yīng)避免選擇有同量異位素干擾的元素。2 .豐度較大的同位素對相鄰元素的干擾豐度較大的同位素會產(chǎn)生托尾峰，影響相鄰質(zhì)量峰的測定?？烧{(diào)整質(zhì)譜儀的分辨率以減少這種干擾。3 .多原子（分子）離子干擾由兩個或三個原子組成的多原子離子，并且具有和某些待測元素相同的質(zhì)荷比所引起的干擾，本實(shí)驗(yàn)中可能存在的多原子（分子）離子干擾見表5-3-2。多原子（分子）離

21、子干擾很大程度上受儀器操作條件的影響，通過調(diào)整或者干擾校正方程可以減少這種干擾。表53-2 常見的分子離子干擾分子離子質(zhì)量受干擾兀素40Ar35CI+75AsZrO106-112CdMoO108-116Cd本實(shí)驗(yàn)中，氧化物的干擾可通過調(diào)整儀器參數(shù)、降低氧化物生成來減少干擾；而A s 的干擾可以通過干擾校正方程來消除，校正方程為：75As=75M x 82M y （83M-Z 83Kr）其中，x、y、z的參考值分別為3.1285、0.8740、1.0074,具體數(shù)值以77ArCI、82Se和83Kr的實(shí)際 儀器響應(yīng)來計(jì)算。4 .物理干擾包括檢測樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液的粘度、表面力和溶解性總固體的差異所引起

22、的干擾。用標(biāo)物可校正物理干擾。5 .基體抑制（電離干擾）易電離的元素增加將大大增加電子數(shù)量而引起等離子體平衡轉(zhuǎn)變，通常會減少分析信號，稱基體抑 制。用標(biāo)法可以校正基體干擾。6記憶干擾經(jīng)常清洗樣品導(dǎo)入系統(tǒng)以減少記憶干擾。（二）儀器穩(wěn)定性監(jiān)測測定過程中，應(yīng)隨時留意標(biāo)元素的儀器響應(yīng)情況，如標(biāo)元素儀器響應(yīng)出現(xiàn)大幅度波動，應(yīng)查明原因再 重新測定。（三）樣品制備由于樣品趕酸過程較長，樣品制備應(yīng)提前進(jìn)行。（洪濤）第四節(jié)離子色譜法測定自來水中氟離子、氯離子含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）掌握離子色譜法測定自來水中氟離子、氯離子含量的基本原理及實(shí)驗(yàn)方法。（-）熟悉離子色譜儀的測定方法。（三）了解化學(xué)抑制的工作原理。二、實(shí)

23、驗(yàn)原理樣品通過進(jìn)樣閥注入儀器，并隨碳酸鹽 重碳酸鹽淋洗液進(jìn)入離子交換柱系統(tǒng)（由保護(hù) 柱和分離柱組成），由于樣品中各種陰離子對分離柱中陰離子交換樹脂的親和力不同，移動速度亦不同， 從而進(jìn)行分離。已分離的陰離子流經(jīng)陽離子交換柱或抑制器系統(tǒng)轉(zhuǎn)換成具高電導(dǎo)度的強(qiáng)酸，淋洗液則轉(zhuǎn)變 為弱電導(dǎo)度的碳酸。由電導(dǎo)檢測器測量出各陰離子組分的電導(dǎo)率，以相對保留時間和峰高或面積定性和定量。 三、儀器和試劑（一）儀器1 .離子色譜儀2 .全自動進(jìn)樣器3 .陰離子分離柱4 .超聲波清洗器5 .超純水系統(tǒng)6 .真空泵7 .過濾器8 .十萬之一分析天平9 .濾膜：0.22 m10 .聚乙烯塑料容量瓶：1000m1 >

24、100m1（二）試劑11 氟標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000mg/L ）12 氯標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000mg/L ）13 碳酸鈉：分析純14 碳酸氫鈉：分析純15 硫酸：優(yōu)級純16 去離子水四、操作步驟（一）水樣預(yù)處理吸取10mL自來水樣過0.22 m孔徑的微濾膜過濾除去渾濁物質(zhì)，然后上機(jī)待測。（二）溶液的配制1氟（10.0 mg/L）、氯（100.0 mg/L）混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別吸取將氟標(biāo)準(zhǔn)貯備液1m1，氯 標(biāo)準(zhǔn)儲備液10m1，置于100mL容量瓶中，然后用去離子水稀釋至刻度，搖勻。2 .氟、氯標(biāo)準(zhǔn)溶液的繪制：準(zhǔn)確吸取1、2、5、10、20mL氟、氯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液分別置于100mL容量瓶中，最后用去離子水

25、稀釋至刻度，搖勻。3 .淋洗液的配制（碳酸鈉1.8101。1/1_/碳酸氫鈉1.70101。1/1_）:準(zhǔn)確稱取碳酸鈉0.1908g/L、碳酸氫 鈉0.1428g/L （于105c下烘干2小時，并保存在干燥器），溶于去離子水中，并轉(zhuǎn)移到1000mL容量瓶 中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，并經(jīng)真空泵過濾、除氣，備用。4 .再生液的配制（50mmol/L ）：準(zhǔn)確吸取3mL硫酸到1000mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻 度，搖勻。5 .沖洗液：去離子水。（三）儀器的條件1 .柱溫：室溫2 .淋洗液流速：1.0 m L/min3 .進(jìn)樣量：20 I（四）樣品測定1 .裝上淋洗液，依次打開全自動進(jìn)樣器

26、、主機(jī)、連接色譜工作站的電腦開關(guān)。2 .調(diào)節(jié)淋洗液和再生液流速，使儀器達(dá)到平衡，并指示穩(wěn)定的基線。3 .建立測定方法。4 .待基線走穩(wěn)后，用氟離子、氯離子的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣（可分別得到兩種離子的工作曲線）繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5 .將預(yù)處理后的自來水樣品注入色譜儀進(jìn)樣系統(tǒng)，記錄峰高或峰面積。6 .測量完畢后，沖洗柱子。7 .關(guān)泵。五、結(jié)果計(jì)算根據(jù)測出的樣品峰面積，儀器可直接在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得各陰離子的質(zhì)量濃度（mg/L ）。如有稀釋需 乘以稀釋倍數(shù)。C樣=C檢X稀釋倍數(shù)式中：c樣為樣品的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升mg/L ；C檢為在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升mg/L。六、注意事項(xiàng)（-）

27、由于進(jìn)樣量很小，操作中必需嚴(yán)格防止純水、器皿以及水樣預(yù)處理過程中的污染，淋洗液應(yīng) 用去離子水配制，不宜配制太多、放置時間太長。（二）為了防止保護(hù)柱和分離柱堵塞，樣品必須過0.22 m孔徑的微濾膜。（三）每次開機(jī)后，觀察白色的再生液和沖洗液的廢液管是否有液體流出，是否被堵。（四）離子色譜儀長期不用時也要定期用超純水清洗或?qū)⒅有断旅芊獗４妗Ｃ罚┑谖骞?jié)氣相色譜質(zhì)譜法測定蔬菜中的敵敵畏和甲拌磷含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）了解氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的基本結(jié)構(gòu)及原理；（二）了解氣相色譜質(zhì)譜儀使用的方法；（三）了解蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥的提取方法；（四）熟悉氣相色譜質(zhì)譜法的定性、定量的方法；（五）掌握標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的定量方

28、法。二、實(shí)驗(yàn)原理樣品用乙睛勻漿后過濾，濾液鹽析后離心，取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用乙睛十甲苯 （3+1 ）洗脫，洗脫液濃縮后，用氣相色譜-質(zhì)譜儀測定。氣相色譜質(zhì)譜儀的工作原理：樣品中各組份經(jīng)氣相色譜分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀，被離子源轟擊成不同質(zhì) 荷比（m/z）的碎片離子。碎片離子經(jīng)過質(zhì)量分析器后，由離子流檢測器檢測，并按照m/z的大小輸出質(zhì)譜 圖，以離子流強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，保留時間為橫坐標(biāo)輸出色譜圖。利用組分的保留時間和質(zhì)譜圖進(jìn)行定性分 析，用峰面積或者峰高進(jìn)行定量分析。Ci標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法：將待測組分的純物質(zhì)配置成不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（），分別加入AiAs等量的標(biāo)物質(zhì)，在一定實(shí)驗(yàn)條件下分析，測得待測組分的

29、峰面積及標(biāo)的峰面積，以A/As對Cl作圖得標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線yaxbo再將同樣量的標(biāo)物加入到待測樣品中，進(jìn)樣分析，測出AX/As，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得待測組分的含量。三、試劑和儀器（1） 儀器GC-MS （2010QPPIUS,日本島津公司）；自動固相萃取儀或手動固相萃取儀； 均質(zhì)器；離心機(jī)，電子天平（精度分別為O.OOIg和O.OOOOIg）;氨氣吹干儀；100uL/1000uL可調(diào)移液器；雞心瓶；微量進(jìn)樣器。（2） 試劑乙晴、甲苯、正己烷、氯化鈉，均為優(yōu)級純。 Envi-18和Envi-Carb活性 炭固相萃取小柱(3 mL,0.5 g)。敵敵畏、甲拌磷和環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)品(純度>95%，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

30、研究中心)。敵敵畏、甲拌磷和環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)母液(1.0 mg/mL):精確稱取10.00 mg標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于10.0 mL容量瓶中用正己烷定容。準(zhǔn)確移取敵敵畏和甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)母液各1 mL置10mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，得含 0.1 mg/mL敵敵畏和甲拌磷的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確 移取該溶液0, 0.0025，0.005，0.01，0.02，0.05mL于5 mL容量瓶中由空白基質(zhì)提取液定容，得標(biāo)準(zhǔn)工 作液0, 0.05，0.10, 0.20，0.40 7.00 g/mL。環(huán)氧七氯標(biāo)工作標(biāo)準(zhǔn)溶液(40.0g/mL):準(zhǔn)確移取1 mL環(huán)氧七氯母液于25 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度。四、操作步驟(1

31、) 儀器操作步驟：1 .確認(rèn)處于正常工作狀態(tài)。2 .對儀器進(jìn)行調(diào)諧，獲得調(diào)諧報(bào)告。3 .編輯檢測方法，將檢測方法發(fā)送給儀器，等待儀器達(dá)到設(shè)定好的條件。4 .編輯樣品測定序列，將標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液放于自動進(jìn)樣器樣品盤中。5 .儀器穩(wěn)定后，開始測試。6 .樣品測定完畢后，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。(2) 檢測條件色譜柱：Rxi-5ms,30mX0.25mm>< 0.25 m ;色譜柱溫度程序：50c保持2 min，然后以50C /min程序升溫至180 C,再以5C /min升溫至280 C,保持1min,在以50C /min升溫至 300C，保持1 min ;載氣：氮?dú)?，純?9.999%流速：

32、1.0mL/min ;進(jìn)樣口溫度：250C ;進(jìn)樣量：1 uL進(jìn) 樣方式：無分流進(jìn)樣，4.5 min后打開流閥和隔墊吹掃閥；電子轟擊源：70 eV;離子源溫度：250Co GC-MS 接口溫度：250C；掃描方式：選擇離子 監(jiān)測。監(jiān)測離子見下表5-5-1 ：表5-5-1待測組分及標(biāo)的定量離子和定性離子化合物名稱定量離子(強(qiáng)度)定性離子(強(qiáng)度)駐留時間/s敵敵畏109 (100)185 (22)，145(6)0.15甲拌磷260 (100)121 ( 429)，231 (110)0.15環(huán)氧七氯353 (100)355 (80)，351 (53)0.15(三)樣品處理:1 .提取稱取20 g試樣

33、(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入40 mL乙睛，用均質(zhì)器在15OOOr/min勻漿提取1 min，加入5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，將離心管放入離心機(jī)，在3OOOr/min離心5 min，取上清液20 mL (相當(dāng)于10 g試樣量)，待凈化。2 .凈化(1)將Envi-C18柱放入固定架上，加樣前先用10 mL乙晴預(yù)洗柱，下接雞心瓶，移入雞心瓶，移入上述20 mL提取液，并用15 mL乙履洗滌柱，將收集的提取液和洗滌液在 40c水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1 mL ,備用。(2)在EnviCarb柱中加入約2 cm高無水硫酸鈉,下接雞心瓶放在固定架上，加樣前先用4 mL乙睛+甲苯（

34、3+1 ）預(yù)洗柱，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液（1 ）轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再每次用2 mL乙睛+甲苯（3+1 ）三次洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中。在串聯(lián)柱 上加上50 mL貯液器，用25 mL乙晴+甲苯（3+1 ）洗滌串聯(lián)柱，收集所有流出物 于雞心瓶中，并在 40C水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5 mL。每次加入5 mL正己烷在40C水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，進(jìn)行溶劑交換二次， 最后使樣液體積為1 mL,加入40 yL標(biāo)溶液，混勻，用于氣相色譜質(zhì)譜測定。五、結(jié)果計(jì)算（一）定性分析：進(jìn)行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選

35、擇的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)樣品的離子豐度比相一致（相 對豐度50%,允許±10%偏差；相對豐度20%50%,允許±15%偏差；相對豐 度10%20%，允許 ±20%偏差；相對豐度 10%允許±50%偏差），則可判斷樣品中存在這種農(nóng)藥或相關(guān)化學(xué)品。如果不能 確證，應(yīng)重新進(jìn)樣，以掃描方式（有足夠靈敏度）或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高 的分析儀器來確定。（二）定量分析：分別以敵敵畏、甲拌磷及標(biāo)的定量離子的質(zhì)量色譜圖進(jìn)行面積積分， AsCi獲得標(biāo)準(zhǔn)系列中待測組分的峰面積/A及標(biāo)的峰面積，以A / As對 作圖得標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線V AX bAyAy。再測得樣品

36、中待測組分的峰面積及標(biāo)的峰面積SX，計(jì)算Ax/Asx，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得待測組分的含量。（三）含量計(jì)算按下式計(jì)算出蔬菜中被測組分的含量:V 1000 x c 'm 1000式中：X蔬菜試樣中敵敵畏或甲拌磷的含量，單位為mg/kg ;C從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的被測組分溶液濃度，單位為 g/mL； V試樣溶液定容體積，單位為mL ； M試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為 g。六、注意事項(xiàng)（一）為減少基質(zhì)的影響，定量用標(biāo)準(zhǔn)溶液通常采用空白基質(zhì)提取液配置標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。 （二）在進(jìn)行測定前，常進(jìn)樣一針溶劑空白，以檢查儀器的狀況。七、參考文獻(xiàn)1 郭愛民主編，衛(wèi)生化學(xué)實(shí)驗(yàn)，：人民衛(wèi)生，2007。2唐英章主編，

37、現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)，：科學(xué)，2004。（周枝鳳）第六節(jié)原子吸收光譜法測定水中的鋅和銅一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┱莆栈鹧嬖游展庾V法測定水中鋅、銅的基本原理和操作技術(shù)。 （二）熟悉原子吸收分光光度計(jì)的工作原理及火焰原子法的操作。實(shí)驗(yàn)原理在使用銳線光源條件下，基態(tài)原子蒸汽對共振線的吸收，符合朗伯比爾定律，即：1。Alg0 0.4343 Ko LKo（A為中心頻率處的吸光度；L為原子蒸氣的厚度；峰值吸收系數(shù)）在試樣原子化時，火焰溫度低于3000 K時，對大多數(shù)元素來講，原子蒸汽中基態(tài)原子的數(shù)目實(shí) 際上十分接近原子總數(shù)。在一定實(shí)驗(yàn)條件下，待測元素的原子總數(shù)目與該元素在試樣中的濃度呈正比。則 A=k-c用A

38、-c標(biāo)準(zhǔn)曲線法或標(biāo)準(zhǔn)加入法，可以求算出元素的含量。試劑和儀器（一）試劑：不同濃度的鋅、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液；水樣。（二）儀器：原子吸收分光光度計(jì)；鋅、銅空心陰極燈；電熱板。四、操作步驟（一）鋅、銅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制配制鋅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.100, 0.200, 0.300, 0.400, 0.500 P g - m1L配制銅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.200, 0.400, 0.600, 0.800, 1.000 P g - m1L（二）工作條件的設(shè)置表5-6-1儀器參數(shù)的設(shè)置測試工作空心陰極燈空心陰極燈預(yù)狹縫寬波長噴頭J元系模式電流熱時間度高度鋅火焰8 mA20 min0.4 nm213.8 nm7mm銅火焰8

39、 mA20 min0.7 nm324.5nm7mm表5-6-1儀器參數(shù)的設(shè)置（續(xù)）測試測定工作計(jì)算測定重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度 背景樣品延遲J元系方法曲線方式時間次數(shù)數(shù)量單位 校正數(shù)時間鋅濃度 自續(xù)直線回歸積分335g/mL 否30銅濃度自續(xù)直線回歸積分335g/mL 否30（三）鋅、銅的測定1 %硝酸為空白，測定鋅、銅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和自來水樣的吸光度A。（四）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用1 %硝酸噴洗原子化系統(tǒng)5 min，按關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。最后關(guān)閉乙烘鋼瓶閥 門，旋松乙烘穩(wěn)壓閥，關(guān)閉空壓機(jī)和通風(fēng)機(jī)電源。（五）繪制鋅、銅的A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線，由未知樣的吸光度A，求算出自來水中鋅、銅含量（Pg/mL）,按一元線性回歸計(jì)算程序，

40、計(jì)算鋅、銅的含量。五、注意事項(xiàng)乙塊為易燃易爆氣體，必須嚴(yán)格按照操作步驟工作。在點(diǎn)燃乙塊火焰之前，應(yīng)先開空氣，后開乙燃；結(jié)束或暫停實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)先關(guān)乙快，后關(guān)空氣。乙快鋼瓶的工作壓力，一定要控制在所規(guī) 定圍，不得超壓工作。必須切記，保障安全。（偉立）第七節(jié)氣相色譜法檢測飲料中的防腐劑苯甲酸一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）掌握氣相色譜氫火焰離子化（FID ）分析方法的原理和實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。（二）熟悉標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法的定量分析方法。二、實(shí)驗(yàn)原理食品防腐劑因具有殺滅或抑制微生物增殖的作用，而被廣泛應(yīng)用于各類食品、飲料中，防止食品變質(zhì)及延長食品的保質(zhì)期，但過量食用對人體有一定毒性。所以有必要對其進(jìn)行檢測監(jiān)控。 氣相色譜法的工作

41、原理：是利用試樣中各組份在流動相和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)汽化后的試 樣被載氣帶入色譜柱中運(yùn)行時，組份就在其中的兩相間進(jìn)行反復(fù)多次分配，由于固定相對各組份的吸附或溶解能力不同，因此各組份在色譜柱中的保留時間不同，便彼此分離，按順 序離開色譜柱進(jìn)入檢測器，產(chǎn)生的離子流訊號經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組份的色譜峰。利用保 留時間對樣品中的組分進(jìn)行定性分析，用峰面積進(jìn)行定量分析。標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法：在一定實(shí)驗(yàn)條件下，待測組分的含量m或濃度C與樣品峰面積Ai /標(biāo)峰面積As成正比例。先用待測組分的標(biāo)準(zhǔn)品配置一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入相同量的標(biāo)物；再 將同樣量的標(biāo)物加入到同體積的待測樣品溶液中，分別進(jìn)樣，測出Ai/As，作Ai/As -m或Ai/As C圖，由Ai （樣）/As即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得待測組分的含量。食品中苯甲酸先經(jīng)乙醛萃取，以正十一烷酸作標(biāo)，采用標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。三、試劑和儀器（一）儀器天美，GC-7900氣相色譜儀；FID檢測器；2010雙通道色譜工作站；中惠普 NHA-300S氣源發(fā)生器；微量進(jìn)樣器。（二）試劑正十一烷酸，乙醇，乙醛均為分析純。苯甲酸（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供），食品防腐劑標(biāo)準(zhǔn)工作液：1Cg/L，用乙醇配制；正十一烷酸標(biāo)溶液：3.0g/L,用乙醇配制。鹽酸（1+1 ）：取100mL鹽酸，加 蒸鐳水稀釋至200mL。四、