口腔粘膜上皮異常增生和鱗癌組織中凋亡蛋白Bax的表達(dá)研究

1、口腔粘膜上皮異常增生和鱗癌組織中凋亡蛋白Bax的表達(dá)研究【摘要】目的研究凋亡相關(guān)蛋白Bax在口腔正常粘膜、上皮異常增生和鱗癌組織中表達(dá)及意義。方法采用免疫組化方法檢測(cè)10例正常粘膜、10例單純性增生上皮、32例異常增生上皮、19例高分化鱗癌、9例低分化鱗癌石蠟包埋樣本中Bax的表達(dá)。結(jié)果正常粘膜中見Bax弱表達(dá)局限于角化層。上皮單純?cè)錾鷷r(shí)Bax表達(dá)較正常組增強(qiáng)，輕度異常增生時(shí)反而較單純?cè)錾陆?，隨異常增生程度加重，Bax明顯增加。癌變時(shí)Bax表達(dá)較重度異常增生下調(diào)，且高分化鱗癌Bax表達(dá)明顯高于低分化鱗癌。結(jié)論Bax蛋白表達(dá)水平代償性增高是口腔癌前病損發(fā)生發(fā)展中的早期事件。Bax表達(dá)下調(diào)將導(dǎo)致

2、癌細(xì)胞過度積留產(chǎn)生癌變并與其預(yù)后相關(guān)。【關(guān)鍵詞】上皮異常增生鱗癌Bax The expression of Bax protein in oral dysplasia and carcinomousGUAN Weiqun,YU Shifeng,GAO Yan.Department of Pathology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081【Abstract】ObjectiveTo study the expression and signficance of apoptosis-related pro

3、tein Bax in Oral normal mucosa,epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma(SCC).MethodsThe expression was observed in 10 normal epithelial,10 simple hypetplasia,32 epithelial dysplasia,19 high-differentiated SCC and 9 low-differentiated SCC by immunohistochemical evaluation.ResultsLow Bax expre

4、ssion was located in normal mucosa keratinocyte.Expression of Bax protein was directly proportional to the degree of epithehia dysplasia,but down-regulated in SCC.And the bax expression had a positive correlation with tumour differentiation.ConclusionThe compensatory Bax overexpression is an early e

5、vent in oral precancerous lesion development.The down regulation of Bax will result in cultimation of carcinoma cells and had a relation with SCC prognosis.【Key words】Oral dysplasiaSquamous cell carcinomaBax許多證據(jù)表明細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)異常與某些腫瘤的發(fā)生相關(guān)，凋亡調(diào)控基因已被看作一類新的腫瘤相關(guān)基因1，2，3。鱗癌是口腔中最常見的惡性腫瘤，約占口腔腫瘤的90%以上，且5年生存率不足50%，而

6、口腔粘膜上皮異常增生做為癌前病變約有4%16%的癌變率4，5，所以對(duì)其發(fā)生演變的病因?qū)W研究尤為重要。本文采用免疫組化方法研究凋亡基因產(chǎn)物Bax抗原在口腔正常粘膜、單純?cè)錾掀?、口腔異常增生上皮和口腔癌組織中的表達(dá)，以期探討它與口腔癌前病變、鱗癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。材料和方法1.標(biāo)本：選擇1995年1998年北京醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院病理室保存資料完整的石蠟包埋組織80例，其中正?？谇徽衬?0例、單純上皮異常增生10例、上皮輕度異常增生11例、中度異常增生13例、重度異常增生8例、高分化鱗癌19例、低分化鱗癌9例。2.試劑：兔抗人Bax多克隆抗體、SP試劑盒均為Santa Cruz公司產(chǎn)品。3.免疫

7、組化染色方法：切取5m厚石蠟切片常規(guī)脫蠟水化后，用39%H2O2甲醇溶液抑制內(nèi)源性過氧化物酶后，置于檸檬酸緩沖液(pH6.0)中水浴微波處理進(jìn)行抗原修復(fù)。再用10%正常綿羊血清封閉10分鐘，Bax抗體稀釋度為1：80，生物素化二抗體為1：150，鏈條和素為1：150，采用SP法染色，顯色底物為DAB。每次實(shí)驗(yàn)均用已知陽性片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗為陰性對(duì)照。4.判斷標(biāo)準(zhǔn)：Bax陽性反應(yīng)為黃到棕黃色顆粒，定位于胞漿，根據(jù)Nakagawa等提供的方法，高倍鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)：標(biāo)本中無陽性細(xì)胞為0分，25%為1分，26%50%為2分，50%以上為3分，染色強(qiáng)度以淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分

8、。兩者相乘，0分為陰性(-)；13分為弱陽性(+)；46分為中等陽性(+)；79分為強(qiáng)陽性(+)。結(jié)果10例正?？谇徽衬び?例出現(xiàn)Bax陽性表達(dá)，表達(dá)程度較均一，為弱陽性表達(dá)，主要局限于角化層淺表細(xì)胞，而在上皮單純?cè)錾?0例標(biāo)本中可見Bax陽性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)和強(qiáng)度均較正常粘膜明顯增加，但仍以顆粒層和棘細(xì)胞淺層細(xì)胞著色最深，中等強(qiáng)度以上陽性率為60%。隨著上皮異常增生的出現(xiàn)，Bax表達(dá)總的陽性率雖然沒有明顯的改變(單純?cè)錾洼p度異常增生相比，P0.05)，但陽性細(xì)胞數(shù)和著色程度卻明顯下調(diào)，中等程度以上陽性率下降為33.3%。當(dāng)上皮出現(xiàn)中度和重度異常增生時(shí)，Bax表達(dá)較輕度異常增生時(shí)再次呈現(xiàn)增強(qiáng)趨

9、勢(shì)(1)，中等程度以上陽性率上升到76.7%和87.5%。在鱗癌組織中，19例高分化鱗癌中出現(xiàn)中等程度以上陽性染色13例(占68.4%)，陽性細(xì)胞彌漫分布于腫瘤全層，且在分化較好的癌巢中央細(xì)胞多為Bax強(qiáng)著色，而癌巢周邊的細(xì)胞則著色較淡(2)，這個(gè)結(jié)果與Jordon等6的觀察相一致。各級(jí)上皮異常增生粘膜和鱗癌組織Bax的表達(dá)情況見表1。單純?cè)錾c輕度異常增生無顯著性差異P0.05；單純?cè)錾c正常粘膜、重度異常增生與高分比化癌、高分化鱗癌與低分化鱗癌均有顯著性差異P0.05。表1口腔正常粘膜、上皮單純?cè)錾?、異常增生和鱗癌組織中Bax的表達(dá)比較組別例數(shù)-+正常粘膜103700單純?cè)錾?00442輕

10、度異增110731中度異增131264重度異增80107高分化鱗癌1915103低分化鱗癌97110討論Bax是一種由192個(gè)氨基酸殘基組成的，分子量為21KD的蛋白質(zhì)，具有一個(gè)跨膜位點(diǎn)，與Bcl-2的同源性為21%，屬Bcl-2家族，為促細(xì)胞凋亡的一類分子。當(dāng)Bax形成自身Bax/Bax二聚體時(shí)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡；與Bcl-2結(jié)合成異二聚體時(shí)則失去活性7。本研究中正常口腔粘膜出現(xiàn)Bax表達(dá)，可能正?？谇徽衬ぶ蠦ax參予了細(xì)胞生理死亡的調(diào)節(jié)。正?？谇徽衬?fù)層鱗狀上皮細(xì)胞由底部基底層的細(xì)胞發(fā)生，向上移行，分化成熟至表面逐漸衰老死亡。凋亡蛋白Bax弱表達(dá)局限于角化層細(xì)胞，符合口腔粘膜上皮細(xì)胞移行成熟的

11、生理特征。對(duì)于細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡，有學(xué)者認(rèn)為這是兩個(gè)不同的過程，也有的學(xué)者認(rèn)為是同一過程8。促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因蛋白Bax局限于分化成熟的角化層，推測(cè)口腔粘膜這一特定的鱗狀上皮中其分化和凋亡可能是同一過程，至少存在著某種相同的途徑。除低分化鱗癌外，各組與正常粘膜相比，其Bax的表達(dá)均有顯著性差異。當(dāng)上皮出現(xiàn)單純性增生時(shí)，Bax表達(dá)明顯增強(qiáng)，這可能是機(jī)體一種自我保護(hù)功能的表現(xiàn)，它通過Bax表達(dá)加強(qiáng)來促進(jìn)凋亡進(jìn)而拮抗細(xì)胞的增殖，維持細(xì)胞數(shù)目的穩(wěn)定。而當(dāng)單純?cè)錾葑兂奢p度異常增生時(shí)，Bax中等程度以上陽性表達(dá)率反而出現(xiàn)下降，可能是異常增生發(fā)生時(shí)，機(jī)體某些新的基因開始啟動(dòng)，且它們能拮抗Bax的作用，從而

12、使其表達(dá)呈現(xiàn)一過性降低。隨著上皮異常增生程度的加劇，惡性轉(zhuǎn)化的細(xì)胞分裂周期短，機(jī)體經(jīng)過一段時(shí)間適應(yīng)后，Bax又進(jìn)一步代償性增加以促進(jìn)異常增殖細(xì)胞的凋亡，抗衡異常上皮細(xì)胞增殖，中等強(qiáng)度以上的陽性表達(dá)率再次明顯增加。上皮重度異常增生演變成鱗癌組織時(shí)，多種促癌細(xì)胞增殖基因的作用得以充分發(fā)揮，機(jī)體凋亡代償能力則達(dá)到極限開始表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致癌細(xì)胞生存時(shí)間過度延長(zhǎng)，造成癌細(xì)胞聚集而形成腫瘤。另外，其結(jié)果亦顯示Bax表述程度與鱗癌分化程度有關(guān)，分化程度高者Bax陽性率高(94.7%)，通過Bax途徑發(fā)生凋亡的腫瘤細(xì)胞增多，則鱗癌的惡性程度低，侵襲性弱，預(yù)后可能較好。低分化患者Bax陽性率低(22.2%)，通過

13、Bax途徑發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)少，則鱗癌的惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，預(yù)后差，因此Bax的表達(dá)強(qiáng)度在一定程度上能反應(yīng)鱗癌的預(yù)后。通常Bax陽性著色定位于胞漿，也可見于胞膜和核膜，然而本實(shí)驗(yàn)中亦出現(xiàn)了3例核著色陽性的細(xì)胞。核染色所顯示的意義不太清楚，不過這種核染色可能代表Bax的另一異構(gòu)體形式。Bax最常見的是分子量為21KD的蛋白體(BAX)。但Krajewki等人曾描述了另外兩種Bax形式BAX和BAX，從cDNA結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)它們的分子量分別為24KD和5KD，與BAX不同，這些形式的Bax分子可能因缺乏跨膜位點(diǎn)，因而僅顯示核染色。因?yàn)楹酥@示的意義不清，本實(shí)驗(yàn)僅計(jì)算那些胞漿著色的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。本研究

14、從一個(gè)側(cè)面反映口腔粘膜上皮異常增生時(shí)，機(jī)體試通過Bax表達(dá)上調(diào)來拮抗細(xì)胞的惡性增殖。而一旦這種功能受抑制則可能導(dǎo)致鱗癌的發(fā)生，且鱗癌組織Bax表達(dá)與癌細(xì)胞的分化呈相關(guān)，可能對(duì)其預(yù)后有一定的影響。1上皮重度異常增生時(shí)，全層細(xì)胞均可見Bax明顯著色2高分化鱗癌組織中，癌巢中央細(xì)胞著色強(qiáng)度明顯強(qiáng)于周邊細(xì)胞(本文編輯韓志峰)作者單位：關(guān)為群（100081 北京醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院病理研究室）于世鳳（100081 北京醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院病理研究室）高巖（100081 北京醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院病理研究室）參考文獻(xiàn)1，Kerr JFR,Winterford C,Harmon BV.Apoptosis:its s

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