(PAS反應(yīng)與聯(lián)苯胺反應(yīng))

1、實驗三 PAS反應(yīng)與聯(lián)苯胺反應(yīng)一：實驗?zāi)康模赫莆诊@示細胞中多糖和過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。二：實驗原理：1、高碘酸希夫試劑反應(yīng)簡稱PAS（Periodic Acid Schiff reaction）反應(yīng)。組織內(nèi)的多糖等都用PAS法來顯示。其化學基礎(chǔ)是利用過氧酸的氧化作用打開CC鍵，將CH2OHCH2OH變成CHOCHO。同樣，對CH2OHCHO，CH2OHCOOH，CH2OHCH2NH2等物質(zhì)均有氧化作用而放出醛基，這種新生的醛基和無色品紅作用形成紫紅色化合物（見圖1）。顏色的深淺與糖類的多少有關(guān)。2、細胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類化合物氧化為有色化合物（見圖2），用聯(lián)苯胺處理樣本，細胞內(nèi)的

2、過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為蘭色的苯胺藍，進而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判斷過氧化物酶的有無或多少。三：實驗材料與試劑1. 材料：土豆塊莖、洋蔥根尖或鱗莖表皮。2. 器具：顯微鏡、載波片、單面刀片、培養(yǎng)皿、鑷子、染色缽、蓋玻片、吸水紙。3. 試劑：（1） 過碘酸酒精溶液： 過碘酸（高碘酸） 0.4g 95%酒精 35ml 0.2 mol/L醋酸鈉 5ml （即17.2g醋酸鈉溶于1000ml 蒸餾水） 蒸餾水 10ml 該液需保存于冰箱，包黑紙，如變黃則失效。（2） Shiff試劑（詳見指導書P75頁）（3） 0.1%鉬酸銨溶液：稱取0.1 g鉬酸銨溶于100 ml 0.85%鹽水（4

3、） 聯(lián)苯胺混合液（臨用前配制）聯(lián)苯胺 0.2g95%乙醇 100ml3%H202 2滴（5） 亞硫酸水溶液：取200ml自來水，加10ml10的偏重亞硫酸鈉水溶液和10ml1mol/L的HCl，三者于使用前混勻。（6） 70乙醇四：實驗的方法和步驟1 PAS反應(yīng)（1）把馬鈴薯塊莖徒手切成薄片，放入高碘酸溶液浸泡10min，用70%乙醇中浸片刻（2）將薄片浸入Schiff 試劑染色15分鐘（3）取出放入亞硫酸水中洗3次，每次1min(4) 蒸餾水沖洗片刻，壓片觀察2. 聯(lián)苯胺反應(yīng) （1）把洋蔥根尖徒手切成20-40 µm厚的薄片或用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊 （2）浸在溶有0.1%鉬酸銨的0.85%鹽水溶液中5 min（鉬酸銨起催化作用） （3）浸在聯(lián)苯胺溶液內(nèi)2 min至切片出現(xiàn)藍色 （4）在0.85%鹽水溶液中洗1 min （5）將薄片置于載玻片上展開，蓋上蓋玻片，顯微鏡檢查五：實驗結(jié)果1PAS反應(yīng)：塊莖組織細胞內(nèi)可見到紫紅色或深紅色的淀粉顆粒，對照片無色或色淡。2聯(lián)苯胺反應(yīng)