一氧化氮對肝硬化大鼠腸系膜血管反應(yīng)的影響

1、    一氧化氮對肝硬化大鼠腸系膜血管反應(yīng)的影響        實(shí)驗(yàn)研究肝硬化大鼠離體腸系膜血管對苯腎上腺素(PE)的收縮反應(yīng)以及對乙酰膽堿(Ach)、硝普鈉(SNP)的舒張反應(yīng)，以探討肝硬化血流動(dòng)力學(xué)紊亂的NO機(jī)制。材料與方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物: SD大鼠，雌雄各半，體重170220g。隨機(jī)分二組，一組為正常對照組(7只)，另一組為肝硬化模型組，由皮下注射50%CCl4，3天1次，共計(jì)10周誘導(dǎo)而成（肝硬化形成經(jīng)病理證實(shí)）。2.試劑: 左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)為美國S

2、igma公司產(chǎn)品，PE由上海第十制藥廠生產(chǎn)，Ach由軍事醫(yī)學(xué)院藥材供應(yīng)站提供，SNP由北京制藥工業(yè)研究所實(shí)驗(yàn)藥廠生產(chǎn)。3.游離腸系膜血管床: 參照文獻(xiàn)1。4.實(shí)驗(yàn)記錄: 經(jīng)過30min平衡后，于灌流液內(nèi)加入PE，逐步增加濃度使其終濃度達(dá)到約13.3kPa(100mmHg)的灌注壓P0（經(jīng)預(yù)試驗(yàn)獲得的正常大鼠的腸系膜血管床最大灌注壓的50%)；經(jīng)10min平衡后，分別加入Ach 8×10-10 mol/L及SNP 5×10-9mol/L（經(jīng)預(yù)試驗(yàn)獲得的，在PE單獨(dú)存在時(shí)正常大鼠血管最大舒張反應(yīng)的一半約需的濃度），記錄此時(shí)的灌注壓P1，并計(jì)算M值；沖洗掉PE及血管舒張劑，導(dǎo)入L

3、-NAME到基礎(chǔ)灌注壓，平衡30min后，逐步加入PE到終濃度（達(dá)到灌注壓P0時(shí)的濃度）；再經(jīng)10min平衡后，分別加入上述劑量的Ach及SNP，記錄此時(shí)的灌注壓，并計(jì)算M值（方法同前）。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理: 采用t檢驗(yàn)。結(jié) 果1.正常組及肝硬化組在加入PE后血管張力均增加，但肝硬化組需給予明顯高于對照組的濃度才能獲得和對照組相同水平的灌注壓(表1)。2.加入L-NAME對基礎(chǔ)灌注壓沒有影響，但可增加兩組對PE的反應(yīng)性，表現(xiàn)為達(dá)到相同灌注壓水平所需的PE濃度降低。肝硬化組PE的濃度降低幅度更大。但是L-NAME仍不能完全糾正肝硬化組對PE的反應(yīng)性，表現(xiàn)為肝硬化組需給予明顯增高于對照組的PE的濃度(

4、表1)。3.在L-NAME存在時(shí)，加入Ach，兩組的血管舒張反應(yīng)較單獨(dú)用PE時(shí)均明顯減弱，減弱的程度兩組之間并無明顯差異(表2)。4.加入SNP，在L-NAME存在時(shí)，兩組的舒張反應(yīng)較單獨(dú)用PE均明顯增強(qiáng)，但肝硬化組的血管舒張反應(yīng)明顯弱于對照組，表現(xiàn)為肝硬化組M值明顯低于對照組(表2)。討 論研究表明肝硬化時(shí)外周血管對縮血管因子的反應(yīng)性下降。加入NOS抑制劑L-NAME后兩組對PE的敏感性則增加，表明內(nèi)臟血管NO的生成對基礎(chǔ)張力起重要調(diào)節(jié)作用。但是，較高的L-NAME濃度(30mol/L)還不能完全糾正該低反應(yīng)，提示肝硬化時(shí)NO活性增強(qiáng)可能不是唯一的解釋。在給予L-NAME后，血管對SNP的舒

5、張反應(yīng)增強(qiáng)。有研究認(rèn)為這是由于L-NAME致NO缺乏使血管平滑肌cGMP高水平調(diào)節(jié)，引起血管對直接的NO供體SNP的反應(yīng)性增強(qiáng)2。而肝硬化組舒張反應(yīng)較對照組弱，考慮這與肝硬化時(shí)cGMP長期暴露給平滑肌誘導(dǎo)的NO致活性降低有關(guān)3。實(shí)驗(yàn)提示肝硬化時(shí)腸系膜血管內(nèi)皮NO合成基本不變。表明可能有內(nèi)皮誘導(dǎo)的超極化因子通過K+通道的激活，對Ach引起的腸系膜血管舒張反應(yīng)起作用。實(shí)驗(yàn)表明NO在肝硬化血流動(dòng)力學(xué)紊亂中起重要作用，但內(nèi)皮依賴的血管舒張因子Ach的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不支持腸系膜血管內(nèi)皮NO合成增強(qiáng)，是否存在于其它外周血管床或肝硬化患者還不清楚。作者單位：430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院肝病研究所參

6、考 文 獻(xiàn)1 McGregor DD. The effect of sympathetic nerve stimulation on vasoconstictor responses in perfused mesenteric vessels of the rat. J Physiol, 1965, 171: 21-50.2 Raleric V, Methie RT, Alexander B, et al. NG-Nitro-L-arginine methyl ester attenuates vasodilator response to acetylcholine but enhance

7、s those to sodium nitroprusside. J Pharm Pharmacol, 1991, 43: 871-874.3 Tsuchida S, Hitaoka M, Sudo M, et al. Attenuation of sodium nitroprusside responses after peolomnged incution of rat aorta with endotoxin. Am J Physiol, 1994, 267: H2305-H2310.表1正常及肝硬化大鼠腸系膜血管對PE的收縮反應(yīng)(±s)基礎(chǔ)壓PEPE+L-NAME(30mol

8、/L)組別PE(mol/L)灌注壓(kPa)PE(mol/L)灌注壓(kPa)PE(mol/L)灌注壓(kPa)對照組02.60±0.4419.4±3.513.09±0.720.9±0.6#13.45±0.69肝硬化組02.30±0.5236.3±7.6*12.25±0.744.0±3.0*#12.69±0.97與對照組比較 *P<0.01, *P<0.05， 與單獨(dú)用PE比較#P<0.01 表2正常及肝硬化大鼠腸系膜血管對Ach及SNP的舒張反應(yīng)(±s)AchSNP組別PEPE+L-NAMEPEPE+L-NAME對照組M值(%)52.0±6.226.3±6.0#51.1±8.180.9±7.3#肝硬化組M值(%)47.5±6.722.9