深部真菌感染地實驗的室診斷

1、第十篇商品試劑和設(shè)備第三章深部真菌感染的實驗室診斷第一節(jié)：1-3- B -D-葡聚糖測定1、1-3- B -D-葡聚糖測定（G試驗）濁度法及顯色法檢測原理分別是什么？答：濁度法檢測原理：1,3- B -D-葡聚糖能特異性激活鱟試劑中的 G因子，活 化的G因子使凝固酶原轉(zhuǎn)變成凝固酶，凝固酶作用在凝固蛋白原上，通過酶切的 作用，產(chǎn)生凝固蛋白，發(fā)生凝固反應(yīng)，從而引起檢測溶液透光率變化，根據(jù)檢測 被測溶液透光率變化對真菌1,3- B -D-葡聚糖濃度進(jìn)行定量。顯色法檢測原理：1,3- B -D-葡聚糖能特異性激活鱟試劑中的 G因子，活化 的G因子使凝固酶原轉(zhuǎn)變成凝固酶，凝固酶作用在顯色底物上，通過酶切

2、的作用， 將寡肽和顯色基團(tuán)（PNA分離，顯色基團(tuán)的量和1,3- B -D-葡聚糖的量呈正比， 根據(jù)檢測其溶液吸光度變化對真菌1,3- B -D-葡聚糖濃度進(jìn)行定量。2、G試驗顯色法檢測較濁度法有哪些優(yōu)勢？答：（1）有效的排除干擾，特異性明顯提高；（2）顯色基質(zhì)使其靈敏度大為提高；（3）適用于血清標(biāo)本的檢測。3、為什么同一份標(biāo)本在不同實驗室檢測結(jié)果不一致？答：這與檢測系統(tǒng)有關(guān)。目前 G試驗沒有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，只有企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。而不同 廠家設(shè)計生產(chǎn)的檢測系統(tǒng)（包括試劑和儀器）的性能不同，這里涉及到使用的標(biāo) 準(zhǔn)品、試劑來源等，故檢測結(jié)果不具有可比性。4、G試驗結(jié)果提示病人有真菌感染，而真菌培養(yǎng)結(jié)果為陰性，如何

3、解釋？答：這主要與培養(yǎng)法和非培養(yǎng)法檢測的原理不同和對疾病診斷的窗口期不同有關(guān)。真菌進(jìn)入人體后，會在較短的時間內(nèi)釋放出1,3- B -D-葡聚糖，因此，在感染早期就可能呈現(xiàn)陽性結(jié)果。而培養(yǎng)則需要細(xì)菌在體內(nèi)有一定的增殖過程，因 此在感染的咼峰期培養(yǎng)陽性率咼。 有文獻(xiàn)報告血漿1,3- B -D-匍聚糖在侵襲性真 菌感染癥狀出現(xiàn)前5天就可呈檢出。方法學(xué)上講，內(nèi)毒素和1,3- B -D-葡聚糖檢查多采用鱟試驗方法，具有簡便、 快速、定量的特點，而培養(yǎng)則需要時間，細(xì)菌和真菌的體外生長需要一定的條件， 如果條件（例如培養(yǎng)基、溫度、時間等）如掌握不好，則難于培養(yǎng)成功。根據(jù)文獻(xiàn)報告，對侵襲性真菌感染的診斷，血漿

4、 1,3- B -D-葡聚糖的診斷特異度和敏 感度均高于培養(yǎng)，其ROC曲線下面積（AUC也大于培養(yǎng)方法。5、血培養(yǎng)陽性，G實驗為什么是陰性？答：（1）病人存在吞噬細(xì)胞功能缺陷，如粒細(xì)胞缺乏癥等，真菌進(jìn)入血液 但是沒有被吞噬細(xì)胞處理，1,3- B -D-葡聚糖沒有釋放出來，或釋放的很少，故 G試驗陰性。（2）進(jìn)入血液內(nèi)的真菌數(shù)量很少，1,3- B -D-葡聚糖釋放的很少， 沒有達(dá)到G試驗檢測最低限。（3）使用了抑制1,3- B -D-葡聚糖釋放的抗真菌藥 物，如棘白菌素類等。6病人甲的臨床表現(xiàn)比病人乙的輕，可病人甲的檢測值比病人乙的檢測值高？答：這里有幾方面的問題。第一，病人免疫功能有差異。真菌

5、進(jìn)入人體后， 需要在吞噬細(xì)胞作用下，才能將細(xì)胞壁上的1,3- B -D-葡聚糖釋放到血液或其他 體液中，被檢測出來。如果病人吞噬細(xì)胞功能減低，真菌不能被吞噬破壞，細(xì)胞 壁上的1,3- B -D-葡聚糖不能釋放出來，也就無法檢測出來。這時病人病情可能 更為嚴(yán)重。第二，疾病的不同階段，1,3- B -D-葡聚糖水平是有變化的。一般來 說，隨著抗真菌藥物的治療，感染的控制，1,3- B -D-葡聚糖水平也會相應(yīng)下降。 因此，如果兩個病人處于疾病的不同階段，其檢測結(jié)果是不可比較的。此外，不同的真菌1,3- B -D-葡聚糖水平也不同。如念珠菌感染者血清1,3-B -D-葡聚糖平均值為755 p g/m

6、L,曲霉感染者1,3- B -D-葡聚糖平均值為1 103 pg/ mL，鐮刀霉感染者1,3- B -D-葡聚糖平均值為1 652 pg/ mL，接合菌（毛 霉、根霉） 細(xì)胞壁不產(chǎn)1,3- B -D-葡聚糖，感染接合菌的患者血清1,3- B -D-葡聚糖值為0，隱球菌細(xì)胞壁外有莢膜包裹，因此不易檢測到細(xì)胞壁上的抗原， 但是在一定條件下莢膜自身可釋放出極微量的1,3- B -D-葡聚糖到血清中，所以 檢測值可大于0,但仍小于陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。而對于口腔和其他器官的真菌定植患 者，1,3- B -D-葡聚糖值也較低，一般不超過 20 pg/ mL （或者其他檢測熱體系 的陽性診斷值）。7、G試驗為什么

7、要強(qiáng)調(diào)連續(xù)檢測？答：1,3- B -D-葡聚糖水平是隨著疾病過程而變化的。因此，在感染的最早 期，細(xì)菌或真菌剛剛進(jìn)入人體，數(shù)量較少，因此檢測不出來?；蛘哂捎诓∪藱C(jī)體 免疫功能的變化，1,3- B -D-葡聚糖的產(chǎn)生速度和量也有變化，或者由于某些干 擾因素存在造成假陽性或假陰性結(jié)果。因此，不能只靠一次檢測結(jié)果就判定有無 感染，我國許多侵襲性真菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn)中都要求2次檢測結(jié)果均大于診斷值才 有診斷意義。此外，檢測應(yīng)覆蓋整個疾病過程，特別是在疾病早期更應(yīng)重視連續(xù) 檢測，以免出現(xiàn)漏診或誤診。8、為什么G試驗的重復(fù)性不理想？答：1,3- B -D-葡聚糖自身一些理化性質(zhì)就可以影響 G試驗。反應(yīng)易受葡聚

8、 糖的分子量、分支度，特別受到三維結(jié)構(gòu)的影響。發(fā)現(xiàn)平均分子量在 6.8-216.0kDa之間的1,3- B -D-葡聚糖，隨其分子量增加和分支度減少，激活G因子的能力越強(qiáng)；分子量在 6.75-27.50 kDa之間的1,3- B -D-葡聚糖的裂褶菌 多糖對G因子的級聯(lián)反應(yīng)有抑制作用。Aketagawa等發(fā)現(xiàn)單股螺旋的1,3- B -D- 葡聚糖在G因子反應(yīng)中起著決定性作用；Nagi等在研究試驗條件時發(fā)現(xiàn)三股螺 旋的1,3- B -D-葡聚糖不與G因子反應(yīng)。故該法測定之前常用NaOH寸1,3- B -D- 葡聚糖進(jìn)行預(yù)處理，使其轉(zhuǎn)化為單股螺旋的1,3- B -D-葡聚糖，已減少實驗誤差。 會不

9、會真菌釋放的1,3- B -D-葡聚糖發(fā)生上述變化，尚不清楚。不同批號的鱟試劑標(biāo)示值相同，但試驗結(jié)果不盡相同，尤其是接近失效者的 靈敏度有明顯下降的趨勢。所以在更換批號或者用接近失效期鱟試劑的時候，應(yīng)對靈敏度進(jìn)行復(fù)核，以確定本批鱟試劑的實際靈敏度。9、哪些抗菌藥物對G試驗有正干擾現(xiàn)象？答：文獻(xiàn)報告磺胺類、阿莫西林/克拉維酸、頭抱類藥物藥物可造成假陽性。 頭抱菌素類中可能涉及頭抱哌酮鈉、頭抱美唑鈉、頭抱米諾、頭抱西丁、頭抱噻 肟鈉、頭抱噻肟和頭抱哌酮/舒巴坦鈉。此外厄他培南也可能造成假陽性，具體 機(jī)制尚不清楚。哌拉西林/他唑巴坦尚不清楚有無干擾，但對半乳甘露聚糖（GM 試驗有正干擾。10、患者使

10、用可引起假陽性的血液制品，含真菌成分的抗腫瘤藥物或者透析治 療及手術(shù)后多長時間檢查G試驗可避免假陽性？答：血液制品中白蛋白和免疫球蛋白可激活 G因子途徑，對G試驗影響很 大。文獻(xiàn)報告，靜脈輸入IgG 10g可使血漿G濃度升高達(dá)300pg/mL以上，這足 以誤診為侵襲性真菌感染（IFI ）。血漿G的平均半衰期為20 （3.1-181.3 ） h， 推斷在1周后復(fù)查1,3- B -D-葡聚糖濃度應(yīng)明顯下降或轉(zhuǎn)陰，可作為與IFI的鑒 別。這與上述物質(zhì)的代謝有關(guān)，抗菌素一般 48小時后上述物質(zhì)代謝完成或排出 體外，但是血漿制品，包括白蛋白代謝半衰期較長，一般需要停用10天左右再查合適。11、某些細(xì)菌的

11、敗血癥也可引起 G試驗出現(xiàn)假陽性，能具體說明嗎？答：文獻(xiàn)報告某些細(xì)菌敗血病患者，例如鏈球菌敗血癥，綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌細(xì)胞膜的一些可溶性抗原可造成 G試驗假陽性。敗血癥患者，特別合并 全身炎癥反應(yīng)綜合征的病人，由于機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生許多炎癥因子，如IL-6和IL-8，這些炎癥因子可參與試驗過程，引起假陽性結(jié)果。文獻(xiàn)報道，在重癥監(jiān)護(hù)病房住院時間超過 14天的患者多伴有不同程度血漿 1,3- B -D-葡聚糖濃度升高，而這些患者并不一定為IFI ;某些細(xì)菌感染，如金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌感染以及凝固酶陰性的葡萄球菌膿毒癥時可能出現(xiàn)G試驗假陽性結(jié)果。甚至部分支原體、EB病毒感染患兒G試驗亦呈陽性，但多

12、為 輕度升高，且7天后復(fù)查多已轉(zhuǎn)陰性，考慮可能與感染本身。12、抗真菌藥物對G試驗檢測結(jié)果有什麼影響？答：抗真菌藥物治療后真菌生長受到抑制，這是明確的。但是由于藥物作用機(jī)理不同，對G試驗結(jié)果不完全一致。例如，兩性霉素B脂質(zhì)體能夠作用于真菌 細(xì)胞壁成分甘露聚糖和甘露聚糖蛋白質(zhì)復(fù)合體使之結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定以致胞壁破壞，可能造成1,3- B -D-葡聚糖值一過性增高。而卡泊芬靜為葡聚糖合成酶抑制劑， 非競爭性地抑制真菌細(xì)胞壁的1,3- B -D-葡聚糖的合成，可以造成假陰性結(jié)果。13、G試驗質(zhì)控時，直接使用廠家提供的均值和標(biāo)準(zhǔn)差是否合適？答：不能。這是因為廠家和用戶使用的試驗條件不同。廠家提供的質(zhì)控品的定值

13、不能作為質(zhì)控中的均值，必須按照質(zhì)控規(guī)范在自己的檢測系統(tǒng)和試驗條件下 重新測定。標(biāo)準(zhǔn)差也是如此。14、為什么質(zhì)控品必須和試劑同一批號？答：這是G試驗的一個特點。因為每批生產(chǎn)的試劑敏感度不同，取決于每批 試劑中主試劑（鱟血中G因子）活性?；钚圆煌?，1,3- B -D-葡聚糖對它的反應(yīng) 結(jié)果不同。而質(zhì)控數(shù)據(jù)是建立在具體反應(yīng)體系上的，不同批號間的質(zhì)控數(shù)據(jù)是有 差異的。15、標(biāo)準(zhǔn)曲線能不能代替質(zhì)控品？答：可以，不過每天都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以確保當(dāng)天檢測結(jié)果正確可靠。但是， 要特別提醒用戶，不能使用公司提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線，一定要用戶自己做標(biāo)曲。16、為什么質(zhì)控數(shù)據(jù)在控，而病人的測定結(jié)果仍有問題？答：這要看用戶在建

14、立最初質(zhì)控數(shù)據(jù)時是否先做了標(biāo)準(zhǔn)曲線（也就是定標(biāo)）。如果用戶沒有定標(biāo)就進(jìn)行20個質(zhì)控數(shù)據(jù)的測定，那些數(shù)據(jù)很可能不正確。無論 是標(biāo)準(zhǔn)曲線，還是質(zhì)控數(shù)據(jù)，還是病人樣本的檢測都與試劑有關(guān)。試劑有變化， 其他結(jié)果也會隨之變化。所以，試劑更換批號，標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控數(shù)據(jù)都要重新建17、當(dāng)日一批試驗結(jié)果中出現(xiàn)數(shù)個結(jié)果與臨床診斷不符合，如何解決?答：(1) 觀察當(dāng)日質(zhì)控結(jié)果是否失控？(2) 檢查操作過程有無差錯？(3) 檢查試劑有無過期或變質(zhì)？是否使用不同批號的試劑？(4) 檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線是否合格？(5) 了解病人采樣時的臨床背景，如病程、是否使用抗真菌藥物治療等。(6) 找廠家工程師檢查。18、有沒有真菌1,3-

15、 B -D-葡聚糖檢測的免疫學(xué)方法？答：a -半乳糖神經(jīng)酰胺可高親和地與1,3- B -D-葡聚糖結(jié)合。Don aid等依次 建立一種以a -半乳糖神經(jīng)酰胺包被物，鼠抗1,3- B -D-葡聚糖單克隆抗體的酶聯(lián)免疫吸附檢測系統(tǒng)，特異性檢測生物體液中1,3- B -D-葡聚糖。發(fā)現(xiàn)1,3- B -D- 葡聚糖含量低于0.8ng/mL時線性良好，并具有良好的回收率，相對于鱟試驗受 干擾物質(zhì)影響更小，同樣具有較高的精密度和準(zhǔn)確度。但本法尚無分子量、分支度及三維構(gòu)型對檢測結(jié)果影響的報告。此外，鼠抗1,3- B -D-葡聚糖單克隆抗體是否能廣譜識別各種真菌1,3- B -D-葡聚糖還需要進(jìn)一步驗證。第二

16、節(jié)：念珠菌抗原和抗體測定一、念珠菌抗原測定1. 可用于檢測的念珠菌病相關(guān)抗原有哪些?答：念珠菌病相關(guān)的血清學(xué)檢測主要通過檢測患者血液循環(huán)中的各類抗原： 如甘露聚糖(manna) 1-3- B -D葡聚糖、細(xì)胞質(zhì)烯醇化酶(Eno)、磷酸甘油酸 酯激酶(Pgk1p)、熱休克蛋白(HSP90)以及蛋氨酸合酶(Met6p )等。其中，甘 露聚糖是目前研究最為廣泛的一種真菌血清抗原。2. 為什么甘露聚糖可用于侵襲性念珠菌病的檢測?答：甘露糖是目前研究最為廣泛的一種真菌血清抗原，它對熱穩(wěn)定，廣泛存在 于真菌胞壁中，是真菌胞壁的重要組成成分，甘露糖在不同真菌中的含量和作用 不是恒定不變的，常常受周圍環(huán)境的營

17、養(yǎng)狀態(tài)和細(xì)胞形態(tài)的影響。其在真菌致病 過程中參與了免疫調(diào)節(jié)、防御，而且抗甘露糖抗體具有保護(hù)性作用。 酵母菌中導(dǎo) 致侵襲性感染者主要為念珠菌屬，少數(shù)為新生隱球菌，當(dāng)念珠菌感染時，甘露聚 糖會被釋放入血，故可進(jìn)行血液檢測。而隱球菌的厚莢膜使細(xì)胞壁上的甘露聚糖 難以釋放人血而不易測得，所以血漿中甘露聚糖抗原陽性與侵襲性念珠菌感染有 高度相關(guān)性，可用于早期診斷侵襲性念珠菌感染。3. 為什么檢測甘露聚糖可用于侵襲性念珠菌病早期診斷？答：念珠菌免疫學(xué)檢測技術(shù)在靈敏度和特異性方面都較組織病理學(xué)、念珠菌培養(yǎng)、直接鏡檢和影像學(xué)檢查有明顯的優(yōu)勢， 抗原檢測陽性要早于念珠菌培養(yǎng)陽 性，敏感性達(dá)80%上，正逐漸成為念

18、珠菌檢測的常用方法。在國內(nèi)外侵襲性真 菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)中，均認(rèn)為血清念珠菌抗原陽性可作為微生物學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，因此測定血清中的甘露聚糖有助于侵襲性念珠菌病的早期診斷、早期治療。4. 目前，念珠菌病相關(guān)抗原檢測有商品化的試劑嗎？答：以上提到的甘露聚糖（mannar）、1-3- B -D葡聚糖、細(xì)胞質(zhì)烯醇化酶 （Eno）、磷酸甘油酸酯激酶（Pgklp）、熱休克蛋白（HSP90）以及蛋氨酸合酶 （Met6p ）等念珠菌相關(guān)抗原中，只有1-3- B -D葡聚糖（G試驗）和甘露聚糖 檢測有商品化試劑提供，其它相關(guān)抗原目前僅限于科研。5. 商品化的念珠菌甘露聚糖抗原檢測試劑盒有哪些？答：目前，商品化的念珠菌甘

19、露聚糖抗原檢測試劑盒極少，國外產(chǎn)品只有伯樂（Bio-Rad）公司生產(chǎn)的PLATELIA? Candida試劑盒；國內(nèi)產(chǎn)品只有天津貽諾 琦（Bio-E noche）生物工程有限公司（中美合資）生產(chǎn)的念珠菌甘露聚糖抗原檢 測試劑盒。6. 念珠菌甘露聚糖檢測試劑盒原理?答：伯樂（Bio-Rad）公司Platelia ? Candida試劑盒原理：該試劑盒采用 雙抗體夾心一步法，待檢血清（或血漿）中的甘露聚糖或標(biāo)準(zhǔn)品與包被在酶標(biāo)板 上的鼠單抗（捕獲抗體）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠單抗（檢測抗體）形成抗體 -抗原-抗體復(fù)合物，再加入底物顯色，在酶標(biāo)儀450nm處測定吸光度值，測定值 和待檢抗原的濃度呈正相

20、關(guān)，根據(jù)甘露聚糖標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算待檢標(biāo)本 中甘露聚糖的濃度（pg/ml）。該試劑盒可進(jìn)行定性或定量分析。貽諾琦（Bio-Enoche ）公司試劑盒原理：該試劑盒采用競爭法，先將甘露聚糖包被在酶標(biāo)板上，再加入待檢血清（或血漿）和辣根過氧化物酶標(biāo)記的甘露 聚糖抗體，此時，待檢標(biāo)本中的甘露聚糖及甘露聚糖標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)板上的甘露聚 糖競爭性結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點，再加入底物顯色，在酶標(biāo)儀450nm處測定吸 光度值，測定值和待檢抗原的濃度呈負(fù)相關(guān)，可根據(jù)甘露聚糖標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線并計算待檢標(biāo)本中甘露聚糖的濃度（pg/ml）。該試劑盒可進(jìn)行定性或定量分析。7. 念珠菌甘露聚糖檢測試劑盒可檢測什么標(biāo)

21、本？答：可檢測血清或血漿標(biāo)本。8待檢標(biāo)本為什么需要預(yù)處理？答：血清或血漿標(biāo)本均需要預(yù)處理。標(biāo)本與處理液混合后加熱，可以：（1）將標(biāo)本中的抗原-抗體復(fù)合物解離，有利于抗原檢測。（2）將標(biāo)本中的蛋白質(zhì)變性并沉淀，減少其對免疫測定的干擾。9. 標(biāo)本如何進(jìn)行預(yù)處理？答：在離心管中加300卩L待檢血清或血漿，再加入100卩L樣本處理液，漩 渦震蕩10秒混勻，將離心管放入水浴鍋內(nèi)100C加熱90秒后10000g離心10分 鐘，取上清即可進(jìn)行檢測。10. 如何保證甘露聚糖試劑盒檢測的可靠性？答：為保證實驗的準(zhǔn)確性、可靠性和減少系統(tǒng)誤差，每次實驗都必須做標(biāo)準(zhǔn) 曲線和質(zhì)控品，并在標(biāo)準(zhǔn)曲線r0.98以上和質(zhì)控品不

22、失控的前提下才能進(jìn)行數(shù) 據(jù)分析。11. 開展甘露聚糖檢測需用什么儀器設(shè)備？答：需要使用的儀器包括：酶標(biāo)儀(450nm、恒溫箱(37C)、離心機(jī)、水 浴鍋、混旋器等。二、念珠菌抗體測定1. 念珠菌抗體檢測有什么臨床意義？答：過去人們并不看好真菌抗體檢測在診斷中的作用，但是近年來的研究表明，抗體檢測在以下方面具有重要臨床意義：(1、區(qū)分真菌感染與定植。(2、免疫缺陷的患者仍可以產(chǎn)生達(dá)到診斷水平的抗體濃度。(3) 真菌感染有一個相對較長的潛伏期，抗體的檢測能滿足臨床對診斷時間窗 的要求。(4) 抗原和抗體聯(lián)合檢測可提高臨床診斷的敏感性和特異性。2. 為什么檢測抗體可以區(qū)分念珠菌感染與定植？答：定植者

23、抗體水平很低，而感染者抗體水平明顯增高，完全可以通過臨界 值加以區(qū)分。特別是選擇那些只有在侵襲性感染時才釋放出來的優(yōu)勢抗原， 就可 以避免定植所引起的假陽性。Fasahat F Alam等分別對32例念珠菌培養(yǎng)陽性患 者、51例臨床疑似念珠菌感染患者、10例念珠菌定植者和16例健康人進(jìn)行念珠菌甘露聚糖抗體檢測，結(jié)果顯示念珠菌培養(yǎng)陽性和臨床疑似念珠菌感染者抗體陽 性率和抗體效價均較高，而念珠菌定植者抗體陽性率和抗體效價均較低，健康人抗體均陰性。該研究提示，可以建立適當(dāng)?shù)目贵w臨界值將念珠菌感染和定植加以 區(qū)分。3. 免疫缺陷的患者能檢測到念珠菌抗體嗎？答：抗體產(chǎn)生依賴于正常的免疫機(jī)能，而IFI患者

24、多處于免疫缺陷狀態(tài)，無法正常產(chǎn)生抗體，或產(chǎn)生遲緩。2006年P(guān)itarch 等將白念珠菌細(xì)胞壁成分用二 維電泳技術(shù)分離，進(jìn)行免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究，用侵襲性念珠菌病人血清和對照血 清分別與之反應(yīng)，篩選出與患者血清發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)的免疫優(yōu)勢抗原。這些抗原主 要有：烯醇化酶（Eno）、磷酸甘油酸酯激酶（Pgklp）、蛋氨酸合酶（Met6p ）、 B -1，3葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（Bgl2p ）和果糖二磷酸醛縮酶（Fba1 ）。IC患者可 能產(chǎn)生針對這些抗原的抗體，甚至是嚴(yán)重的免疫抑制患者如肝移植、干細(xì)胞移植 和HIV患者也可產(chǎn)生這些抗體。4. 念珠菌抗體檢測適用于侵襲性念珠菌病早期診斷嗎？答：Yera等的研究表

25、明，有73%勺侵襲性念珠菌?。╥nvasive candidiasis ， IC）患者至少可以早于血培養(yǎng)陽性結(jié)果 2天檢出抗體，最多可早于15天，平均 為7天。近年來的研究顯示：念珠菌在黏膜定植時可能已有部分細(xì)胞壁抗原暴 露于宿主免疫系統(tǒng)。當(dāng)發(fā)生IC時，機(jī)體產(chǎn)生免疫記憶反應(yīng)，表現(xiàn)出相對早期IgG 的反應(yīng)，并優(yōu)于IgM0而IgM升高的血清抗體其抗原是念珠菌胞漿內(nèi)抗原，在定 植共生狀態(tài)下，可能極少暴露于機(jī)體體液免疫系統(tǒng)。當(dāng)發(fā)生IC時，免疫受損患者表現(xiàn)出與免疫正?；颊哳愃频难鍖W(xué)反應(yīng)，IgG早期升高，說明血清抗體檢測 同樣也適用于免疫受損患者早期診斷念珠菌病。并且隨著抗真菌藥物治療，IgG水平下降。

26、所以，檢測IgG也不失為一種療效觀察的方法。5. 為什么念珠菌抗原和抗體聯(lián)合檢測可提高臨床診斷敏感性和特異性？答：甘露聚糖在機(jī)體內(nèi)能被降解，因此抗甘露聚糖抗體的檢測可以彌補甘露 聚糖檢測的局限性，尤其是抗體和甘露聚糖聯(lián)合檢測，可以大大提高診斷的敏感 性和特異性。Fasahat F Alam等對31例感染念珠菌的患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，檢測念珠菌甘 露聚糖敏感性為41%甘露聚糖抗體敏感性為47%甘露聚糖和甘露聚糖抗體聯(lián) 合檢測，敏感性可顯著提高至 75%國外另一項研究發(fā)現(xiàn)，檢測念珠菌甘露聚糖敏感性為58%特異性為93%甘露聚糖抗體敏感性為59%特異性為83%甘露聚糖和甘露聚糖抗體聯(lián)合檢測， 敏感性可達(dá)

27、83%特異性為86%6. 抗原和抗體聯(lián)合檢測的優(yōu)勢是什么?答：鑒于侵襲性真菌感染的隱蔽性和發(fā)病的特點，建議在使用實驗室手段進(jìn) 行侵襲性真菌感染診斷時應(yīng)采取多種方法的聯(lián)合檢驗，強(qiáng)調(diào)真菌培養(yǎng)和非培養(yǎng)技 術(shù)的結(jié)合，各種非培養(yǎng)技術(shù)之間的聯(lián)合。例如，抗原抗體聯(lián)合檢測?？乖涂贵w 的聯(lián)合檢驗的優(yōu)勢：（1）優(yōu)勢互補，提高檢測的敏感性和特異性。（2）能更準(zhǔn)確地反映感染程度及階段。（3）用藥前后抗原抗體的檢測值變化可為臨床用藥的評價提供依據(jù)，有利于疾 病的預(yù)后。7. 怎樣設(shè)計念珠菌抗原抗體聯(lián)合檢測方案?答：可參考如下方案ig 眺 GfiW8. 怎樣分析真菌抗原和抗體聯(lián)合檢測結(jié)果？答：真菌抗原和抗體聯(lián)合檢測結(jié)果分

28、析見表 3-1，僅供參考。表3-1抗原、抗體聯(lián)合檢測結(jié)果判定抗原抗體臨床分析+侵襲性真菌感染+-早期感染/未產(chǎn)生抗體或免疫力低下/無抗體產(chǎn)生感染一段時間/抗原可能分解/抗原被抗體中和無侵襲性真菌感染9. 商品化的念珠菌抗體檢測試劑盒有哪些?答：商品化的念珠菌抗體檢測試劑盒，國外產(chǎn)品有伯樂（ Bio-Rad）公司生 產(chǎn)的Platelia Candida Ab-Ac-Ak抗體檢測試劑盒，德國 Virion Serion公司生 產(chǎn)的IgA、IgM、IgG抗體檢測試劑盒，美國IBL公司生產(chǎn)的IgA、IgM、IgG抗體 檢測試劑盒；國內(nèi)產(chǎn)品有天津貽諾琦（Bio-Enoche ）生物工程有限公司（中美合

29、資）生產(chǎn)的念珠菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒（ELISA）。10. 念珠菌抗體檢測試劑盒原理？答：念珠菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒（ELISA）原理相同，均采用 ELISA 間接法。將預(yù)處理后的患者血清（或血漿）樣本加到包被有念珠菌抗原的酶標(biāo)板 中，血清（或血漿）中的念珠菌IgM或IgG抗體與固相抗原結(jié)合，再加入抗人 IgM酶標(biāo)抗體或抗人IgG酶標(biāo)抗體，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后加四 甲基聯(lián)苯胺（TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定其吸光度， 吸光度值與待測物濃度成正比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣本中念珠菌IgM或IgG抗體濃 度進(jìn)行定量分析。11. 國產(chǎn)念珠菌IgM、Ig

30、G抗體檢測試劑盒性能指標(biāo)？答：上述國產(chǎn)念珠菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒分析靈敏度為31.25AU/mL; 特異性均大于 90% 測范圍均為 31.25500AU/mL與德國 Virion Serion 公司 IgM、IgG抗體檢測試劑盒總體符合率分別為 80.9%（36例對比）和71.4%（35 例對比）。12. 念珠菌IgM抗體檢測為什么樣本需要預(yù)處理？答：樣本處理的目的是去除類風(fēng)濕因子的干擾。類風(fēng)濕因子是一種以變性IgG為抗原的自身抗體，主要為IgM型。進(jìn)行IgM抗體檢測時，它的存在會導(dǎo)致 假陽性結(jié)果。此外，結(jié)合力強(qiáng)的病原體特異性IgG抗體也可能取代結(jié)合力弱的病 原體特異性IgM抗體與抗

31、原結(jié)合，造成IgM檢測假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。因此，進(jìn)行 白色念珠菌IgM抗體檢測前需用類風(fēng)濕因子吸附劑吸附掉血清中可能存在的類 風(fēng)濕因子。13.為什么念珠菌IgM、IgG抗體檢測濃度單位是 AU/ml?答：目前，尚無念珠菌IgM和IgG的國際標(biāo)準(zhǔn)品和國家標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù) 1995 年國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC和國際臨床化學(xué)和實驗室醫(yī)學(xué)聯(lián)盟（IFCC） 推薦的“臨床實驗室物質(zhì)特性和單位命名規(guī)則”（PROPERTIES AND UNITS IN THECLINIC LABORATORY SCIENCES I. SYNTAX AND SEMANTIC RULE使用 AU/ml（arbitrary

32、unit ）作為濃度單位（該單位不是國際統(tǒng)一單位）。14.開展念珠菌抗體檢測需用什么儀器設(shè)備?答：需要使用的儀器包括：酶標(biāo)儀（450nm、恒溫箱（37C）、離心機(jī)、混 旋器等。第三節(jié)曲霉菌抗原和抗體測定一、曲霉菌抗原測定1. 為什么檢測半乳甘露聚糖可用于侵襲性曲霉菌?。↖A ）的早期診斷？答：半乳甘露聚糖（galacto-mannan ，GM是曲霉細(xì)胞壁上的一種多聚抗原， 其中具有免疫反應(yīng)性的是呋喃半乳糖， 菌絲生長時能從薄弱的菌絲頂端釋放， 是 最早釋放的真菌抗原。GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度。GM在感染后24小時（感染早期）即可檢測到，與病情嚴(yán)重程度一致。有2/3的患者在臨 床

33、癥狀和影像學(xué)出現(xiàn)異?；蚱渌\斷方法陽性之前 6-14天即可檢測到GM對高 ?；颊哌B續(xù)動態(tài)監(jiān)測(每周2次)具有早期診斷價值。GM試驗可用于曲霉菌感 染早期診斷的篩查指標(biāo)。歐洲癌癥研究和治療組織和美國真菌病研究組 (EORTC/MSG)經(jīng)把半乳甘露 聚糖(GM作為診斷曲霉病的標(biāo)準(zhǔn)之一。中國侵襲性真菌感染工作組經(jīng)反復(fù)討論， 并參照歐洲癌癥研究和治療組織和美國真菌病研究組 (EORTC/MSG)關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，同 樣把血清中半乳甘露聚糖(GM陽性作為診斷曲霉病的標(biāo)準(zhǔn)。2. 半乳甘露聚糖檢測還有什么臨床意義？答：國內(nèi)外的薈萃分析結(jié)果表明，其診斷的靈敏度和特異性均高達(dá)90%左右。 患者血清中GM含量與感染程度相關(guān)

34、，動態(tài)監(jiān)測血清GM水平的變化可作為病情轉(zhuǎn) 歸和療效評價指標(biāo)。在治療期間，病人 GM持續(xù)陽性或保持較高水平則預(yù)后差， GM抗原清除早的病人預(yù)后好。但是對非粒缺患者的診斷價值尚有爭議。3. G試驗和GM式驗聯(lián)合檢測可提高IA診斷準(zhǔn)確率？答：GM試驗和G試驗發(fā)生假陽性的人群不同。GM試驗在巨細(xì)胞病毒血癥、 銅綠假單胞菌和化療后金葡菌和表葡菌感染者血清中會出現(xiàn)假陽性，但這些患者G試驗則為陰性；而出現(xiàn)G試驗假陽性的白念珠菌定植者 GM試驗則為陰性。因 此，當(dāng)兩者都出現(xiàn)陽性時可以基本診斷 IA，兩者聯(lián)合使用可最大程度地降低假 陽性率。另有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)單獨GM式驗靈敏度為70%特異性為84%單獨G試驗靈 敏

35、度為50%特異性為92% GM式驗和G試驗二者聯(lián)合試驗時，其靈敏度和特異 性分別為93唏口 78% GM式驗和G試驗均對侵襲性真菌病具有診斷價值，二者聯(lián) 合應(yīng)用使其應(yīng)用價值進(jìn)一步提高。4. 商品化的半乳甘露聚糖抗原檢測試劑盒有哪些？答：目前，商品化的曲霉菌半乳甘露聚糖抗原檢測試劑盒較少，國外產(chǎn)品有伯樂（Bio-Rad ）公司生產(chǎn)的PLATELIA? ASPERGILLU五IA試劑盒；國內(nèi)產(chǎn)品只 有天津貽諾琦（Bio-Enoche ）生物工程有限公司（中美合資）生產(chǎn)的曲霉菌半乳 甘露聚糖抗原檢測試劑盒。5. 曲霉菌半乳甘露聚糖檢測試劑盒原理？答：伯樂（Bio-Rad ）公司PLATELIA? A

36、SPERGILLUEIA試劑盒原理：該試 劑盒采用一步夾心法，待檢血清（或血漿）中的半乳甘露聚糖與包被在酶標(biāo)板上 的鼠單抗（捕獲抗體）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠單抗（檢測抗體）形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物，再加入底物顯色，在酶標(biāo)儀 450nm處測定吸光度值，測定值 和待檢抗原的濃度呈正相關(guān)，以臨界值（Cutoff）對待檢標(biāo)本中是否含有半乳甘 露聚糖進(jìn)行定性分析。貽諾琦（Bio-Enoche ）公司試劑盒原理：該試劑盒采用競爭法，先將半乳甘露聚糖包被在酶標(biāo)板上，再加入待檢血清（或血漿）和辣根過氧化物酶標(biāo)記的 半乳甘露聚糖抗體，此時，待檢標(biāo)本中的半乳甘露聚糖及半乳甘露聚糖標(biāo)準(zhǔn)品與 酶標(biāo)板上的半乳甘露聚

37、糖競爭性結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點，再加入底物顯色，在酶標(biāo)儀450nm處測定吸光度值，測定值和待檢抗原的濃度呈負(fù)相關(guān)，可根據(jù)半乳 甘露聚糖標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算待檢標(biāo)本中半乳甘露聚糖的濃度。該試劑盒可進(jìn)行定量或定性分析。6. 半乳甘露聚糖定量檢測有什么臨床意義?答：半乳甘露聚糖定量檢測試劑盒與定性試劑盒相比不但可以進(jìn)行定性分 析，還可對半乳甘露聚糖精確定量，有利于判斷患者侵襲性曲霉感染的嚴(yán)重程度。 此外，半乳甘露聚糖含量的動態(tài)監(jiān)測在抗真菌藥物療效觀察、停藥時機(jī)的選擇及 預(yù)后等方面有重要臨床意義。7. 國產(chǎn)半乳甘露聚糖ELISA試劑盒性能指標(biāo)如何？答：上述國產(chǎn)半乳甘露聚糖ELISA試劑盒分析靈敏度

38、0.1 ng/ml ;特異性達(dá) 89% 測范圍為 0.1-10ng/ml ； 與 Bio-Rad 公司 PLATELIA ASPERGILLUSEIA 檢 測試劑盒進(jìn)行對比試驗（109例樣本），陽性符合率91.4%,陰性符合率85.2%。8. 哪些標(biāo)本可用于半乳甘露聚糖檢測?答：標(biāo)本可以是血清、尿液、腦脊液及肺泡灌洗液（BAL等，但敏感性和 特異性有所不同9. 待檢標(biāo)本為什么需要預(yù)處理？答：血清或血漿標(biāo)本均需要預(yù)處理。標(biāo)本與處理液混合后加熱，可以:（1）將標(biāo)本中的抗原-抗體復(fù)合物解離，有利于抗原檢測。（2）將標(biāo)本中的蛋白質(zhì)變性并沉淀，減少其對免疫測定的干擾。10. 標(biāo)本如何進(jìn)行預(yù)處理？答：在離

39、心管中加300卩L待檢血清或血漿，再加入100卩L樣本處理液，漩 渦震蕩10秒混勻，將離心管放入水浴鍋內(nèi)100C加熱90秒后10000g離心10分 鐘，取上清即可進(jìn)行檢測。11. 半乳甘露聚糖檢測試劑盒需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控嗎？答：為消除系統(tǒng)誤差和保證實驗的準(zhǔn)確性、 可靠性，每次實驗都必須做標(biāo)準(zhǔn) 曲線和陰性、陽性質(zhì)控，并在質(zhì)控品不失控的前提下才能進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。12. 哪E些因素可造成半乳甘露聚糖檢測假陽性?答：抗菌藥物如哌拉西林、他唑巴坦、阿莫西林、克拉維酸等與GM有交叉反應(yīng)，因此在接受這些藥物治療的患者中GM試驗的特異性可能會下降。GM試驗的假陽性率為10%-15% 般在以乳制品為主食的嬰幼兒

40、、 異體骨髓移植患者、 菌血癥患者、自身抗體陽性及使用半合成青霉素的患者中較易出現(xiàn)。13. 半乳甘露聚糖檢測的局限性?答：GM檢測對中性粒細(xì)胞減少患者感染曲霉的診斷價值較高，但對兒童、 腫瘤及ICU危重患者、中性粒細(xì)胞不減少或減少不嚴(yán)重的其他 IA高危人群診斷 價值有限。對此現(xiàn)象的解釋是由于中性粒細(xì)胞能吞噬并快速殺傷菌絲，使體內(nèi)真菌載量降低，從而使釋放入血液的 GM減少而難以檢出。14. 開展GM僉測需用什么儀器設(shè)備？答：需要使用的儀器包括：酶標(biāo)儀（450nm、恒溫箱（37C）、離心機(jī)、水 浴鍋、混旋器等。二、曲霉菌抗體測定1. 曲霉菌抗體檢測臨床意義？答：曲霉抗體的研究沒有念珠菌抗體那么廣泛

41、和深入。Latg e等研究小組報道，約1/2的IA患者產(chǎn)生曲霉特異性抗體。Sambatakou等進(jìn)一步證明，抗體 測定對非中性粒細(xì)胞減少的亞急性侵襲性曲霉?。╥nvasive aspergillosis ，IA）患者是最好的無創(chuàng)診斷方法。Kappe R等研究發(fā)現(xiàn)，總體大約23%勺侵襲性曲霉 感染患者曲霉抗體檢測呈陽性，免疫力低下的病人在用藥有效后10.8天左右能檢測到抗體產(chǎn)生?？贵w檢測尤其是ELISA法IgG抗體檢測對臨床診斷的確認(rèn)和臨 床用藥的評價有著十分重要的意義。2. 商品化的曲霉菌抗體檢測試劑盒有哪些？答：商品化的曲霉菌抗體檢測試劑盒，國外產(chǎn)品有伯樂（ Bio-Rad）公司生 產(chǎn)的Pl

42、atelia ? Aspergullus IgG抗體檢測試劑盒，德國 Virion Serion 公司 生產(chǎn)的IgA、IgM、IgG抗體檢測試劑盒，美國IBL公司生產(chǎn)的IgA、IgM、IgG 抗體檢測試劑盒；國內(nèi)產(chǎn)品有天津貽諾琦（Bio-E noche）生物工程有限公司（中 美合資）生產(chǎn)的曲霉菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒（ELISA）。3. 曲霉菌抗體檢測試劑盒原理？答：曲霉菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒（ELISA）原理相同，均采用 ELISA 間接法。將預(yù)處理后的患者血清（或血漿）樣本加到包被有曲霉菌抗原的酶標(biāo)板 中，血清（或血漿）中的曲霉菌IgM或IgG抗體與固相抗原結(jié)合，再加入抗人

43、IgM酶標(biāo)抗體或抗人IgG酶標(biāo)抗體，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后加四 甲基聯(lián)苯胺（TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定其吸光度， 吸光度值與待測物濃度成正比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣本中曲霉菌IgM或IgG抗體濃 度進(jìn)行定量分析。4. 國產(chǎn)曲霉菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒性能指標(biāo)？答：上述國產(chǎn)曲霉菌IgM、IgG抗體檢測試劑盒分析靈敏度分別為 8 AU/mL 31.25AU/mL;特異性均大于 90% 測范圍分別為 864AU/mL 31.25500AU/mL; 與德國Virion Serion公司IgM抗體檢測試劑盒總體符合率為 96.8%（ 31例對比）。5. 曲霉菌I

44、gM抗體檢測為什么樣本需要預(yù)處理？答：樣本處理的目的是去除類風(fēng)濕因子的干擾。類風(fēng)濕因子是一種以變性IgG為抗原的自身抗體，主要為IgM型。進(jìn)行IgM抗體檢測時，它的存在會導(dǎo)致 假陽性結(jié)果。此外，結(jié)合力強(qiáng)的病原體特異性IgG抗體也可能取代結(jié)合力弱的病 原體特異性IgM抗體與抗原結(jié)合，造成IgM檢測假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。因此，進(jìn)行曲霉菌igM抗體檢測前需用類風(fēng)濕因子吸附劑吸附掉血清中可能存在的類風(fēng)濕 因子。6. 為什么曲霉菌IgM、IgG抗體檢測濃度單位是AU/ml?答：目前，尚無曲霉菌IgM和IgG的國際標(biāo)準(zhǔn)品和國家標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù) 1995 年國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會（IUPAC和國際臨床化學(xué)和實驗室

45、醫(yī)學(xué)聯(lián)盟（IFCC） 推薦的“臨床實驗室物質(zhì)特性和單位命名規(guī)則”（PROPERTIES AND UNITS IN THECLINIC LABORATORY SCIENCES I. SYNTAX AND SEMANTIC RULE使用 AU/ml（arbitrary unit ）作為濃度單位（該單位不是國際統(tǒng)一單位）。7. 開展曲霉抗體檢測需用什么儀器設(shè)備？答：需要使用的儀器包括：酶標(biāo)儀（450nm、恒溫箱（37C）、離心機(jī)、混8. 曲霉菌抗原抗體聯(lián)合檢測方案是什么?答：可參考如下方案第四節(jié) 新型隱球菌抗原測定1. 莢膜多糖抗原檢測用于診斷隱球菌感染的優(yōu)勢？答：新型隱球菌臨床表現(xiàn)、腦脊液常規(guī)、生

46、化檢測及頭顱影像學(xué)檢查均缺乏 特異性，與其它顱內(nèi)感染性疾病尤其是結(jié)核性腦膜炎難以鑒別，誤診率高，確診只能依賴于病原菌的檢出。診斷新型隱球菌感染常用有三種方法， 即墨汁染色顯 微鏡鏡檢法、培養(yǎng)法和抗原檢測法。印度墨汁染色鏡檢法敏感性差，陽性檢出率 約80%腦脊液或血液培養(yǎng)法雖然屬于診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但陽性檢出率約75%培養(yǎng)(2-10天)及鑒定時間長。莢膜多糖是新型隱球菌特有的分泌物，其分子組成與結(jié)構(gòu)區(qū)別于其他真菌和 細(xì)菌，是隱球菌存在的直接證據(jù)。在感染的初期，莢膜多糖就能夠在血清、腦脊 液、肺泡灌洗液和尿液中被檢測到，可作為隱球菌病早期診斷的標(biāo)志物。隨著病 情的發(fā)展，莢膜多糖的含量會隨之發(fā)生變化，可

47、作為病情監(jiān)測的指標(biāo)。莢膜多糖 抗原檢測快速、簡便，腦脊液和血清樣本抗原檢測的敏感性可達(dá)到97唏口 87%能實現(xiàn)早期快速診斷。2. 莢膜多糖抗原陽性能作為隱球菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)嗎?答：歐洲癌癥研究和治療組織和美國真菌病研究組 (EORTC/MSG)經(jīng)把莢膜 多糖作為診斷隱球菌病的標(biāo)準(zhǔn)之一。中國侵襲性真菌感染工作組經(jīng)反復(fù)討論， 并 參照歐洲癌癥研究和治療組織和美國真菌病研究組 (EORTC/MSG)關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，同樣 把血清/腦脊液中莢膜多糖陽性作為診斷隱球菌病的標(biāo)準(zhǔn)。3. 莢膜多糖定量檢測有什么臨床意義？答：莢膜多糖定量測定具有診斷和預(yù)測價值?？乖男r往往與疾病的程度密切相關(guān)，定量檢測莢膜多糖濃度有助于判

48、斷感染的嚴(yán)重程度或疾病的活動程度。莢膜多糖含量的動態(tài)監(jiān)測可作為病情轉(zhuǎn)歸、 預(yù)后和療效評價指標(biāo)?；颊咔v膜 多糖濃度降低表明治療有效，不降低說明治療不充分。4. 哪些標(biāo)本可檢出莢膜多糖？答：血清、腦脊液、肺泡灌洗液和尿液均可檢出莢膜多糖，但腦脊液敏感性高于血清和其它體液。5. 商品化的莢膜多糖抗原檢測試劑盒有哪些？答：目前，商品化的新型隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑盒國外產(chǎn)品有美國IMMY公司生產(chǎn)的 LATEX-CRYPTOCOCANSIGENDETECTIOSYSTEM乳膠凝集法） 和 CrAg Lateral Flow Assay（膠體金法）；伯樂（Bio-Rad）公司生產(chǎn)的 PASTOREX C

49、RYPTOLUS（乳膠凝集法）；國內(nèi)產(chǎn)品有天津貽諾琦（Bio-Enoche ）生物工程有 限公司（中美合資）生產(chǎn)的新型隱球菌莢膜多糖抗原檢測試劑盒（ELISA法）。6. 隱球菌莢膜多糖檢測試劑盒原理？答：國外產(chǎn)品乳膠凝集法試劑盒原理： 該檢測系統(tǒng)利用包被在乳膠顆粒中的 抗隱球菌抗體與含有隱球菌莢膜多糖抗原的樣本發(fā)生凝集反應(yīng)，通過凝集顆粒的大小進(jìn)行定性分析。貽諾琦（Bio-Enoche）公司試劑盒（ELISA）原理：該試劑盒采用競爭法， 先 將莢膜多糖包被在酶標(biāo)板上，再加入待檢血清（或腦脊液）和辣根過氧化物酶標(biāo) 記的莢膜多糖抗體，此時，待檢標(biāo)本中的莢膜多糖及莢膜多糖標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)板上 的莢膜多糖競

50、爭性結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點，再加入底物顯色，在酶標(biāo)儀450nm處測定吸光度值，測定值和待檢抗原的濃度呈負(fù)相關(guān)，可根據(jù)莢膜多糖標(biāo)準(zhǔn)品繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算待檢標(biāo)本中莢膜多糖的濃度。該試劑盒可進(jìn)行定量或定性分 析。7. 各種莢膜多糖檢測技術(shù)敏感性如何？答：由于方法學(xué)不同，各種檢測技術(shù)的靈敏度不同，依次為ELISA法膠體金法乳膠凝集法，ELISA法檢測靈敏度可達(dá)0.5ng/ml，腦脊液和血清樣本莢膜 多糖抗原檢測的敏感性可達(dá)到 97唏口 87%莢膜多糖抗原檢出的敏感性與菌株的 血清型有關(guān)，血清型 A/B/D可在0.5ng/ml時就可檢出，而血清型 C在25ng/ml 時才能被檢測到。8. 國產(chǎn)莢膜多糖

51、ELISA試劑盒性能怎樣？答：上述國產(chǎn)莢膜多糖ELISA試劑盒分析靈敏度0.5ng/ml ;特異性達(dá)99% 測范圍為0.32-32 ng/ml ;與美國IMMY公司新型隱球菌抗原檢測試劑盒（乳膠 凝集法）進(jìn)行對比試驗（166例樣本），陽性符合率86.67%,陰性符合率100%9. 開展甘露聚糖檢測需用什么儀器設(shè)備？答：需要使用的儀器包括：酶標(biāo)儀（450nm、恒溫箱（37C）、離心機(jī)、混參考文獻(xiàn)1、 Sulahian A, Touratier S，Ribaud P. False positive test for aspergillusan tige nemia related to con c

52、om ita nt adm ini strati on of piperacilli nand tazobactam . N Engl J Med ，2003，349(24) : 2366 2367.2、 M. Machetti, M. J. Majabo, E. Furfaro,et al. Kinetics of galactomannan in surgical patients receiving perioperative piperacillin/tazobactamprophylaxis. Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2006) 58, 806- 8103、Tyler Warkentien, MD. An Update on Cryptococcosis AmongHIV-lnfectedPerso ns. I nt J STD AIDS. 2010 October ; 21(10): 679- 684.4、 Clancy C J, Nguyen ML, Cheng S, et al.lmmunoglobulinG responses toa panel of Candida albicans antigen as accu