肝癌血行相關(guān)因子及檢測(cè)意義

1、肝癌血行相關(guān)因子及檢測(cè)意義山東中醫(yī)藥大學(xué)2006級(jí)研究生劉奎 指導(dǎo)者 徐瑞榮【摘要】早期微轉(zhuǎn)移是肝癌難以有效診治和病死率高的主要原因之一，因此早期檢測(cè)出外周血中的腫瘤細(xì)胞，對(duì)及早有效的綜合治療具有重要的臨床意義。血行微轉(zhuǎn)移是肝癌的主要轉(zhuǎn)移途徑，但血行微轉(zhuǎn)移的診斷仍然存在困難，主要是沒有找到能準(zhǔn)確反映早期微轉(zhuǎn)移的腫瘤相關(guān)因子。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Glypican-3 mRNA、OPN、AFPmRNA、AFP-L3與肝癌血行微轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，而傳統(tǒng)檢測(cè)肝癌的標(biāo)志物AFP、AFU、GGT2、AP、AIF、ALD-A、5-NPDV、VEGF等依然在肝癌的檢測(cè)中有著重要意義?，F(xiàn)將目前肝癌血行檢測(cè)的主要相關(guān)因子做

2、一概述?！娟P(guān)鍵詞】 肝癌 血行相關(guān)因子 檢測(cè)意義Factors related primary carcinoma of the liver blood test and significanceLiu Kui Guide XU Ruirong【Abstract】Early micro-metastasis is the effective diagnosis and treatment of primary carcinoma of the liver and one of the main causes of high mortality, early detection of the t

3、umor cells in peripheral blood of the early and effective treatment has important clinical significance. Blood-hepatocellular carcinoma metastasis is the main way to transfer, but the transfer of blood-diagnosis there are still difficulties, mainly find is not accurately reflect the early transfer o

4、f tumor-associated factor. In recent years found Glypican-3 mRNA, OPN, AFPmRNA, AFP-L3 blood and primary carcinoma of the liver micrometastases in a close relationship, and the traditional markers of primary carcinoma of the liver detection AFP, AFU, GGT2, AP, AIF, ALD-A, 5 ' - NPDV, VEGF, such

5、as in primary carcinoma of the liver detection still has important significance. Presently makes the present primary carcinoma of the liver blood line of examination's main multiple coefficient of correlation an outline.【Key words】primary carcinoma of the liver Blood related factors Examination

6、significance1. Glypican-3 mRNA Glypican-3 mRNA的概述 Glypican-3即磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因，是一種膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)， Glypican-3結(jié)構(gòu)特殊，影響多種生物效應(yīng)分子，對(duì)組織、器官的發(fā)生、發(fā)展起關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，幾乎在所有人類肝癌和黑色素瘤細(xì)胞上表達(dá)，而在胎盤和胎肝以外的正常組織不表達(dá)。Glypican-3在肝癌中過(guò)表達(dá),而在成人正常組織（如肝、肺、腎、心、腦、脾、胃、小腸、大腸、睪丸、膀胱及胰腺中亦均不表達(dá)1）、癌旁組織、肝炎、肝硬化組織中僅低表達(dá)或不表達(dá)。Zhu Z W等2證實(shí)Glypican-3 mRNA在正常肝

7、組織、肝灶性結(jié)節(jié)狀增生、肝硬化中低表達(dá)或不表達(dá)；相反在研究的30例肝癌患者中有20例顯著表達(dá)，在5例中適度表達(dá)；Glypican-3在肝癌患者中相對(duì)于在正常肝組織中的表達(dá)平均增加有顯著意義。Glypican-3被認(rèn)為是肝癌表達(dá)比較特有的基因。 Glypican-3 mRNA的檢測(cè)意義 柏凱等3通過(guò)檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者外周血Glypican-3，結(jié)果發(fā)現(xiàn)外周血Glypican-3 mRNA檢出率與腫瘤直徑、癌結(jié)節(jié)數(shù)目、臨床TNM分期、門靜脈癌栓、肝外轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（P <0.05）。、期患者陽(yáng)性率36% 遠(yuǎn)較、期患者陽(yáng)性率76%低（ P <0.05），說(shuō)明原發(fā)性肝癌早期即表現(xiàn)為全身性疾病

8、，可以發(fā)生腫瘤細(xì)胞的血液性播散。隨著臨床分期的增加，外周血單核細(xì)胞Glypican-3 mRNA檢出率有增高的趨勢(shì)，提示動(dòng)態(tài)觀察外周血中Glypican-3 mRNA 表達(dá)有助于判斷肝癌患者的預(yù)后。這和Nakano M等4報(bào)道的即使直徑<2 cm的高分化肝細(xì)胞癌，腫瘤細(xì)胞也可能侵蝕血管壁形成血行微轉(zhuǎn)移的結(jié)果基本相符。Glypican-3 mRNA在門靜脈癌栓的患者中表達(dá)高達(dá)90%，肝外轉(zhuǎn)移患者的外周血單核細(xì)胞Glypican-3 mRNA 100%陽(yáng)性，表明隨著腫瘤逐漸進(jìn)展，發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性增大。唐浩等5在大鼠肝細(xì)胞癌模型中得出：外周血Glypican-3。DING Guanghui等6

9、報(bào)道:41例AFP陰性肝癌中有30例為Glypican-3 mRNA陽(yáng)性,表達(dá)率為73.17。因此Glypican-3 mRNA在肝癌的早期發(fā)現(xiàn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中有重要價(jià)值，并可望成為肝癌特別是AFP陰性時(shí)肝癌的一個(gè)新的基因標(biāo)志。2. OPN OPN的概述OPN即骨橋蛋白（osteopornin），是一種分泌性磷酸化糖蛋白，以多種亞型存在于細(xì)胞內(nèi)外，結(jié)構(gòu)上它與多種基質(zhì)蛋白相似，功能上它具有細(xì)胞因子的特點(diǎn)，參與了機(jī)體多種病理過(guò)程。OPN含有特異的與細(xì)胞黏附有關(guān)的RGD(Arg-Gcy-Asp)序列，通過(guò)與其受體整合素、CD44等結(jié)合來(lái)促進(jìn)細(xì)胞的趨化黏附和遷移，從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移7。OPN及其

10、相關(guān)分子與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切.通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子與OPN啟動(dòng)子的應(yīng)答元件(RAE序列、Tcf-4結(jié)合序列、AP-1結(jié)合序列、RE-1序列等)相互作用,調(diào)控OPN的表達(dá)。OPN通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞黏附、激活生長(zhǎng)因子受體、促進(jìn)血管生成等多個(gè)環(huán)節(jié)參與腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程8。 OPN的檢測(cè)意義OPN參與了包括肝癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移，滿曉波等9報(bào)道在103例人肝細(xì)胞癌病例中69例肝癌組織中OPN基因表達(dá)水平高于癌旁組織,其中58例超過(guò)2倍以上，肝癌和癌旁組織中OPN平均表達(dá)水平具有明顯差異(P0.001)而在大鼠肝癌模型中隨著肝癌的發(fā)生和發(fā)展OPN表達(dá)水平逐漸上升，可見OPN在肝癌組織中高表達(dá)并且隨著肝癌血行

11、轉(zhuǎn)移而逐漸升高。崔伯康等10復(fù)發(fā)組血漿OPN濃度為(961.0±411.6)g/L，復(fù)發(fā)組與無(wú)復(fù)發(fā)組血漿OPN濃度比較有顯著性差異(P=0.039)。可見肝癌患者血漿中OPN濃度可以作為預(yù)測(cè)肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的參考因子。陸健等11認(rèn)為OPN在肝癌組織中顯著高表達(dá),且和早期復(fù)發(fā)血行微轉(zhuǎn)移相關(guān)，OPN可能參與了腫瘤血管生成的過(guò)程。因此檢測(cè)OPN有助于肝癌的診斷和復(fù)發(fā)。3. AFP、AFPmRNA及AFP-L3 AFP、AFPmRNA及AFP-L3的概述AFP是由Bregstrand等于1956年首次發(fā)現(xiàn)的血清蛋白成分，1963年Abelev等首先報(bào)道了它與肝細(xì)胞的密切關(guān)系。在正常情況下，這種蛋

12、白主要來(lái)自胚胎的肝細(xì)胞，胎兒出生約兩周后甲胎蛋白從血液中消失，因此正常人血清中AFP的含量尚不到20g/L。當(dāng)干細(xì)胞或生殖腺胚胎組織發(fā)生惡性病變時(shí)，有關(guān)基因重新被激活，使原來(lái)已喪失合成AFP能力的細(xì)胞又重新開始合成，以至血中AFP含量明顯升高，而且隨著病情惡化它在血清中的含量會(huì)急劇增加，AFP就成了診斷原發(fā)性肝癌的一個(gè)特異性臨床指標(biāo)。肝癌AFP陽(yáng)性率為70%-90%。在生殖腺胚胎瘤、少數(shù)轉(zhuǎn)移性腫瘤如胃癌以及孕婦、肝炎、肝硬化中AFP可呈假陽(yáng)性，但升高不如肝癌明顯。利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)肝癌患者外周血中AFPmRNA即甲胎蛋白信使核糖核酸的表達(dá)，AFPmRNA在健康志愿者、非肝癌惡性腫瘤患者外

13、周血中均為陰性；在肝細(xì)胞癌組外周血中AFPmRNA的檢出率明顯高于對(duì)照性乙型肝炎或肝硬化組。AFPmRNA檢出率與臨床分期、門靜脈癌栓、肝外轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。AFP-L3是AFP三種異質(zhì)體之一，通常AFP可分為三種異質(zhì)體，即AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3。AFP異質(zhì)體是AFP不均一的糖鏈異質(zhì)性，即氨基酸序列相同而糖鏈不同的AFP。 AFP、AFPmRNA及AFP-L3的檢測(cè)意義AFP仍是目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院診斷肝癌的主要指標(biāo)，陳克林等12采用逆轉(zhuǎn)錄和巢氏多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及SOUTHERN雜交技術(shù)以檢測(cè)肝癌患者有無(wú)血行微轉(zhuǎn)移，AFPmRNA的陽(yáng)性率為61.5。張開泰等13采用AFPmRNA作為

14、外周血肝癌手術(shù)后血行微轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物，AFPmRNA的陽(yáng)性率為56.7%。因此可以認(rèn)為AFPmRNA可作為定性診斷原發(fā)性肝癌的血液學(xué)指標(biāo)，也可作為肝癌細(xì)胞血行微轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物，并可判斷肝癌臨床分期、轉(zhuǎn)移傾向、預(yù)后和復(fù)發(fā)14。AFP variants中尤以AFP-L3與小扁豆凝聚素的親和力很高，其主要存在于肝癌細(xì)胞中，LiD等15指出AFP-L3在診斷肝癌方面是一個(gè)高特異性指標(biāo)，并且AFP-L3受慢性肝病等的影響小，Ando E等16研究發(fā)現(xiàn) 35%早期肝癌患者中可檢測(cè)出AFP-L3，并指出AFP-L3在早期肝癌檢測(cè)中有重要意義。因此AFP、AFPmRNA及AFP-L3在肝癌的早期診斷、分期及預(yù)后中

15、有著重要意義。4.其它因子4.1 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF） 徐洪雨等17報(bào)道: VEGF在原發(fā)性肝癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為65.63；原發(fā)性肝癌中腫瘤微血管密度（MVD）為30.96±12.32，其中VEGF表達(dá)陰性者M(jìn)VD為19.12±7.34，VEGF表達(dá)陽(yáng)性者M(jìn)VD為42.36±15.54，二者 相比有顯著差異（P0.01)，由此可見VEGF能促進(jìn)腫瘤中微血管形成,血管形成在原發(fā)性肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起到重要的作用. 劉吉奎等 18測(cè)定肝癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為82.8%，轉(zhuǎn)移組VEGF陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)以及MVD顯著多于無(wú)轉(zhuǎn)移組(P<0.01)，腫瘤包膜不

16、完整和無(wú)包膜組VEGF陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)顯著多于包膜完整組(P<0.01)，而且VEGF表達(dá)強(qiáng)度與MVD間關(guān)系密切，但腫瘤直徑5 cm與<5 cm兩組間未見顯著差異(P>0.05)，由此可見VEGF在肝癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。4.2 AFU、GGT2、AP 、AIF 、ALD-A 、5'-NPDV19AFU是一種溶酶體酸性水解酶，分類名為-L-巖藻糖苷巖藻糖水解酶；基本生理功能是催化含巖藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖苷的分解代謝。AFU廣泛存在于人體各組織細(xì)胞溶酶體和體液中，胎盤胎兒組織腦肺肝胰腎以及血清尿液唾液和淚液中均含有AFU 。Deuginer 等于 19

17、84 年發(fā)現(xiàn)AFU在原發(fā)性肝癌病人血清顯著升高，具有較高的診斷敏感性和特異性，對(duì)小肝癌的診斷敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血清 AFP，與血清 AFP 測(cè)定有良好的互補(bǔ)性。血清 AFU 活性與 AFP 水平不相關(guān)，兩者同時(shí)檢測(cè)，可明顯提高肝癌的發(fā)現(xiàn)率。GGT2（-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶同工酶) 用聚丙烯酰胺凝膠電泳可將血清-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)分出同工酶各系帶，其中以GGT2在原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌的陽(yáng)性率可提高到90%，特異性達(dá)97.1%。非癌性肝病和肝外疾病假陽(yáng)性率低于5%。GGT2與AFP無(wú)關(guān)，在低濃度AFP肝癌及假陰性肝癌中，也有較高的陽(yáng)性率。在小肝癌中GGT2陽(yáng)性率78.6%。AP（異常凝血酶原) 又稱-羧基凝

18、血酶原。肝癌細(xì)胞本身有合成和釋放谷氨酸羧化不全的異常凝血酶原的功能，用放免法測(cè)定AP，以250ug/L為陽(yáng)性，則肝細(xì)胞癌患者的陽(yáng)性率為67%，而良性肝病、轉(zhuǎn)移性肝癌時(shí)僅少數(shù)呈陽(yáng)性，因此對(duì)亞臨床肝癌有早期診斷價(jià)值。酸性同工鐵蛋白(AIF)、醛縮酶A(ALD-A),5-核苷酸磷酸二酯酶同工酶V (5'-NPDV)等在肝癌時(shí)增高，特異性強(qiáng)，AFP陰性時(shí)也升高，肝癌時(shí)陽(yáng)性率均在70%以上。堿性磷酸酶同工酶I(ALP-I)幾乎僅見于肝細(xì)胞癌，特異性強(qiáng)，但陽(yáng)性率低，僅24.8%。目前上述因子的檢測(cè)應(yīng)用最普遍的還是AFP，其在肝癌的早期診斷及預(yù)后有極重要的意義； Glypican-3 mRNA、OP

19、N、AFPmRNA及AFP-L3是目前研究的熱點(diǎn)，但在臨床的應(yīng)用中還未達(dá)到AFP的高度；而其它因子目前只能作為聯(lián)合檢測(cè)的一種。參考文獻(xiàn) mRNA在甲胎蛋白陰性肝癌中的表達(dá)及其意義J.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2001，18（2）：112-113.2 Zhu Z W,Friess H,Wang L,etal.Enhanced glypican-3 expression differentiates the majority of hepato-cellular carcinoma as from benign hepatic disorders J.Gut,2001,48(4):558-564.3 柏凱

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