精品資料（2021-2022年收藏的）生物制藥學(xué)

1、生物制藥學(xué)試題1一、名詞解釋。本題共10小題，滿(mǎn)分20分。1、生物制藥2、Cytokine3、互補(bǔ)決定區(qū)4、接觸抑制現(xiàn)象5、Immobilized enzyme6、轉(zhuǎn)化細(xì)胞7、愈傷組織8、HAMA9、t-PA10、包含體二、填空題。本題共7小題，滿(mǎn)分20分。 1、抗體同抗原結(jié)合決定于抗體分子的 區(qū)，異種免疫原性則決定于抗體的 區(qū)。2、按照生物工程學(xué)科范圍的不同，生物制藥分為 、 、 和 。3、常用的克隆載體有 、 、 和 。4、用木瓜蛋白酶處理抗體將得到1個(gè) 片段和2個(gè) 片段。5、固定化酶的方法有 、 和 。6、野生型農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒包括 、 和 三個(gè)區(qū)。7、檢測(cè)基因工程藥物中的內(nèi)毒素，傳統(tǒng)上采

2、用 法，現(xiàn)在多采用 法。三、單項(xiàng)選擇題。本題共10小題，滿(mǎn)分10分。 1、（）在動(dòng)物免疫時(shí)需要添加佐劑。A、顆粒性抗原 B、細(xì)胞性抗原C、可溶性抗原D、半抗原2、下列何種細(xì)胞不是用于生產(chǎn)的動(dòng)物細(xì)胞？（ ）A、原代細(xì)胞 B、傳代細(xì)胞C、轉(zhuǎn)化細(xì)胞D、胚性細(xì)胞3、（）發(fā)現(xiàn)發(fā)酵是由微生物引起的，從而使發(fā)酵技術(shù)成為一門(mén)科學(xué)。A、詹納 B、弗萊明C、巴斯德D、班廷4、下列不屬于多糖類(lèi)藥物的是（ ）。A、干擾素 B、硫酸軟骨素C、透明質(zhì)酸D、肝素5、下列哪個(gè)選項(xiàng)不屬于固定化酶的優(yōu)點(diǎn)。（ ）A、可反復(fù)使用 B、不影響酶的活性C、易與產(chǎn)物分離D、容易實(shí)現(xiàn)反應(yīng)的連續(xù)化6、插入失活篩選重組子是利用了載體上的（）。A

3、、抗性基因 B、lacZ基因C、熒光素標(biāo)記D、放射性標(biāo)記7、能使肝素失去活性的藥物是（ ）。A、魚(yú)精蛋白 B、硫酸軟骨素C、透明質(zhì)酸D、彈性蛋白酶8、免疫球蛋白不包括（ ）。A、IgA B、IgMC、IgDD、IgF9、適于花粉、花藥培養(yǎng)的培養(yǎng)基是（ ）。A、 MS培養(yǎng)基B、基礎(chǔ)培養(yǎng)基C、N6培養(yǎng)基D、B5培養(yǎng)基10、直接利用噬菌體DNA為載體以質(zhì)粒轉(zhuǎn)化方式導(dǎo)入到受體細(xì)胞中，此種基因?qū)胨拗骷?xì)胞的方式稱(chēng)為（ ）。A、轉(zhuǎn)化B、轉(zhuǎn)導(dǎo)C、轉(zhuǎn)染D、感染四、簡(jiǎn)答題。本題共6小題，滿(mǎn)分30分。 1、克隆載體應(yīng)具備的條件有哪些？2、基因工程制藥時(shí)獲取目的基因的方法有哪些？3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要的條件有哪些？

4、4、現(xiàn)代生物工廠(chǎng)是如何來(lái)生產(chǎn)酶制劑的？5、舉例說(shuō)明蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的分離純化方法。6、HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞的機(jī)理是什么？五、論述題。本題共2小題，滿(mǎn)分20分。 1、在基因工程制藥中要想提高外源基因在工程菌中的表達(dá)量應(yīng)該從哪些方面考慮？2、請(qǐng)畫(huà)出抗體分子的結(jié)構(gòu)，并據(jù)此說(shuō)明鼠源性單克隆抗體藥物的改造。答案1一、 名詞解釋1、 生物制藥是指利用生物體、生物組織及其代謝產(chǎn)物或生物過(guò)程生產(chǎn)藥物的技術(shù)。2、 細(xì)胞因子是由機(jī)體各種組織細(xì)胞分明的高活性的多肽或蛋白質(zhì)，能調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能，調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、調(diào)亡，并參予免疫和病理反應(yīng)。3、 在抗體可變區(qū)內(nèi)高度可變的區(qū)域，決定了抗體和抗原的特異結(jié)合。4

5、、 接觸抑制現(xiàn)象：貼壁細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)從接種到長(zhǎng)滿(mǎn)器壁底面后，由于細(xì)胞繁殖數(shù)量增多相互接觸，密度不再增加。5、 固定化酶，通過(guò)物理、化學(xué)方法處理使酶限制或固定于特定空間位置，使酶不易隨水流失而又能發(fā)揮催化作用。6、 動(dòng)物細(xì)胞經(jīng)自然或人為因素轉(zhuǎn)化為異倍體后，細(xì)胞壽命由有限轉(zhuǎn)為無(wú)限，這樣的細(xì)胞即為轉(zhuǎn)化細(xì)胞。7、 在人工培養(yǎng)基上由外植體長(zhǎng)出的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。8、 人抗鼠抗體，是由于人體內(nèi)引入了鼠源蛋白產(chǎn)生的。9、 組織型纖溶酶原激活劑，抗凝血藥，抑制纖溶酶的產(chǎn)生。10、 當(dāng)原核生物表達(dá)真核基因時(shí)由于原核生物與真核生物在蛋白質(zhì)修飾機(jī)制上的差異造成表達(dá)的蛋白產(chǎn)物一級(jí)結(jié)構(gòu)正確而不能正確折疊，使蛋白

6、質(zhì)溶解度下降，活性喪失。二、 填空1、V，C2、基因工程制藥、發(fā)酵工程制藥、細(xì)胞工程制藥、酶工程制藥。3、質(zhì)粒、噬菌體、粘粒（考斯質(zhì)粒）、人工染色體4、Fc； Fab5、載體結(jié)合法、共價(jià)交聯(lián)法、包埋法6、T-DNA區(qū)、Vir區(qū)和冠癭堿代謝酶編碼區(qū)7、家兔熱原法、鱟試劑法三、 選擇題1、C；2、D；3、C；4、A；5、B；6、A；7、A；8、D；9、C；10、C四、 簡(jiǎn)答題1、 克隆載體應(yīng)具備的條件有哪些？1具有針對(duì)受體細(xì)胞的親緣性或親和性（可轉(zhuǎn)移性） 2具有復(fù)制起始位點(diǎn)，能夠自主復(fù)制3具有較高的外源DNA的裝載能力 4具有多種單一的核酸內(nèi)切酶識(shí)別切割位點(diǎn) 5具有合適的篩選標(biāo)記 2、基因工程制藥

7、時(shí)獲取目的基因的方法有哪些？1. 從生物體內(nèi)提取DNA，構(gòu)建基因組DNA文庫(kù)，從中分離基因2. 以mRNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，構(gòu)建 cDNA文庫(kù)3. 聚合酶鏈反應(yīng)4. 化學(xué)合成法3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件一、細(xì)胞的生存環(huán)境1) 所有的與細(xì)胞接觸的設(shè)備、器材和溶液, 都必須保持無(wú)菌, 避免細(xì)胞外微生物的污染；無(wú)毒絕對(duì)不可有有害的物質(zhì), 避免即使是極微量的有害離子的摻入；2) 溫度: 37 3) O2：保證有適量的氧氣供應(yīng)4) CO25) 細(xì)胞培養(yǎng)的用水必須進(jìn)行特殊的處理,才能使用。6) pH: 7.2-7.47) 滲透壓二、細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需要培養(yǎng)基：動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求較高, 而且隨著細(xì)胞的種系

8、不同, 要求有很大差異。大致可以分成3類(lèi):天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基。4、現(xiàn)代生物工廠(chǎng)是如何來(lái)生產(chǎn)酶制劑的？1) 微生物發(fā)酵 2) 從發(fā)酵液中提取酶 用真空轉(zhuǎn)鼓過(guò)濾機(jī)將酶與發(fā)酵液的其他成分分離開(kāi)來(lái)。過(guò)濾機(jī)外涂有厚厚的一層硅藻土，水和酶可以滲透過(guò)去，而培養(yǎng)基和微生物卻被黏著在硅藻土表面上。3) 制劑 在工廠(chǎng)里，對(duì)酶做最后的劑型選擇。酶的最終用途決定產(chǎn)品以何種劑型出廠(chǎng)，液體酶或固體酶。液體洗滌劑一般用液體型酶。而多數(shù)酶制劑為固態(tài)酶，稱(chēng)作酶粒。4) 廢料處理5、舉例說(shuō)明蛋白質(zhì)類(lèi)藥物的分離純化方法。（1）按溶解度不同進(jìn)行分離的方法 蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。蛋白質(zhì)形成膠體的穩(wěn)定因素：

9、水化層和同種電荷，打破即沉淀。常用的有鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法（如抗體抗原）等。（2）按分子大小分離的方法 這類(lèi)方法有超濾法和透析法、分子篩層析法、密度梯度離心法等。其中透析法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和脫鹽。（3）按所帶電荷不同進(jìn)行分離的方法 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解質(zhì)，它們具有等電點(diǎn)，在離開(kāi)等電點(diǎn)的pH時(shí)不同蛋白便會(huì)帶不同的電荷。利用帶電性質(zhì)進(jìn)行分離。利用電學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分離的方法有離子交換柱層析法、電泳法（醋酸纖維薄膜電泳、PAGE、等電聚焦）等。（4）親和層析法 大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)（配基 ），如酶與底物（或抑制劑）、抗原與

10、抗體、激素與受體等，利用化合物的之間的特異的親合作用設(shè)計(jì)的層析分離技術(shù)稱(chēng)為親和層析。蛋白質(zhì)能與配基特異結(jié)合，親和層析分離專(zhuān)一性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便。6、細(xì)胞融合后可以產(chǎn)生脾脾、脾瘤、瘤瘤雜交細(xì)胞以及未融合的細(xì)胞，故需采用HAT選擇培養(yǎng)基篩選出脾瘤雜交細(xì)胞。HAT選擇培養(yǎng)基的成份H：次黃嘌呤 A：氨基喋呤T：胸腺嘧啶骨髓瘤細(xì)胞中不含HGPRT酶和TK酶，無(wú)法通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA，而正常合成DNA的途徑又被阻斷，因此瘤瘤融合細(xì)胞和瘤細(xì)胞因無(wú)法合成DNA而死亡。脾細(xì)胞中含有這兩種酶，但脾脾融合細(xì)胞和脾細(xì)胞不能在體外增殖。只有脾瘤融合細(xì)胞才能既能合成DNA又能體外生長(zhǎng)，故可以在HAT培養(yǎng)基上存活。五、論述題

11、1、1、外源基因的拷貝數(shù)一般來(lái)說(shuō)細(xì)菌內(nèi)基因拷貝數(shù)增加，基因的表達(dá)產(chǎn)物也增加。將外源基因克隆到高拷貝數(shù)的表達(dá)載體上，導(dǎo)致其上的外源基因拷貝數(shù)的增高。2、外源基因的表達(dá)效率 欲實(shí)現(xiàn)外源基因在原核細(xì)胞中高效地表達(dá)，應(yīng)考慮表達(dá)載體、外源基因的性質(zhì)、原核細(xì)胞啟動(dòng)子和SD序列、閱讀框架及密碼子組成等基本條件。3、表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性當(dāng)外源基因表達(dá)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)降解該蛋白質(zhì)的酶由于應(yīng)急反應(yīng)其產(chǎn)量會(huì)迅速增加。所以，即使原始表達(dá)量很高，由于很快在細(xì)胞體內(nèi)被降解，因而實(shí)際產(chǎn)量很低。 為提高表達(dá)產(chǎn)物在菌體內(nèi)的穩(wěn)定性，可以采用下列幾種方法： 組建融合基因，產(chǎn)生融合蛋白。許多融合蛋白與天然的真核蛋白相比較，在細(xì)菌體內(nèi)比較穩(wěn)定，

12、不易被細(xì)菌酶類(lèi)所降解。 利用大腸桿菌的信號(hào)肽或某些真核多肽中自身的信號(hào)肽，把真核基因產(chǎn)物運(yùn)輸?shù)桨麧{周質(zhì)的空隙中，而使外源蛋白不易被酶降解。4、宿主細(xì)胞的代謝負(fù)荷外源基因的大量表達(dá)，需利用宿主細(xì)胞內(nèi)的原料，會(huì)打破宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)平衡，造成宿主的負(fù)荷，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，進(jìn)而又影響基因的表達(dá)。另外，外源基因的表達(dá)產(chǎn)物屬于異己物質(zhì)，并可能對(duì)宿主細(xì)胞有毒性?？蓪⒓?xì)胞的生長(zhǎng)和外源基因的表達(dá)分成兩個(gè)階段，先不讓基因表達(dá)，當(dāng)宿主細(xì)胞的生物量達(dá)到飽和時(shí)，再誘導(dǎo)基因產(chǎn)物的合成，以減低宿主細(xì)胞的代謝負(fù)荷。5、工程菌的培養(yǎng)條件外源基因的高效表達(dá)，不僅涉及宿主、載體和克隆基因三者之間的相互關(guān)系，而且與其所處的環(huán)境條件息息相

13、關(guān)，所以必須優(yōu)化基因工程菌的發(fā)酵條件，進(jìn)一步提高基因表達(dá)工程水平。2、McAb 在免疫導(dǎo)向療法中存在的問(wèn)題（障礙）： A、McAb均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體（HAMA），加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)的半衰期只有56h，維持有效藥物作用靶組織時(shí)間； B、完整的抗體分子的相對(duì)分子質(zhì)量過(guò)大，難以穿透實(shí)體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。故要利用基因工程技術(shù)對(duì)McAb進(jìn)行改造以降低McAb的免疫源性；降低McAb的相對(duì)分子質(zhì)量。制備出了人鼠嵌合抗體、改型抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識(shí)別單位等多種類(lèi)型，基本上消除了抗體的鼠源性（免疫源性），相對(duì)分子質(zhì)量只有完整抗體分子的1/801/3。原理

14、：抗體同抗原結(jié)合的功能決定于抗體分子的可變區(qū)（V），同種性免疫源性則決定于抗體分子的穩(wěn)定區(qū)（C）。一、 人鼠嵌合抗體（chimeric antibody）在基因水平上把鼠源性單克隆抗體的H和L鏈的V區(qū)基因分離出來(lái)，分別與人Ig的H鏈和L鏈的C區(qū)基因連接，即成為人鼠嵌合抗體的H和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)出完整的Chimeric Antibody.二、 改型抗體(Reshaping antibody)Ig分子中參與構(gòu)成抗原結(jié)合部位的區(qū)域是 H和L鏈 V區(qū)中的互補(bǔ)性決定區(qū) (CDR區(qū))。如果用鼠源性單克隆抗體的CDR序列替換人 Ig分子中的CDR序列，則可使人的 Ig分子具有鼠源性單克

15、隆抗體的抗原結(jié)合特異性。抗體分子中鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫源性。這種改型抗體也稱(chēng)CDR移植抗體 (CDR grafting antibody)。三、 小分子抗體基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源性單克隆抗體的V區(qū)片段，其相對(duì)分子質(zhì)量?jī)H為原抗體的1/801/3。(1) Fab片段抗體：VH+CH1 (3)單鏈抗體：VH-Linker-VL(2) FV抗體：VH+VL (4)單域抗體：VH或VL生物制藥學(xué)試題2一、名詞解釋。本題共10小題，滿(mǎn)分20分。1、生物藥物2、McAb3、基因治療4、基因文庫(kù)5、Immobilized enzyme6、轉(zhuǎn)化細(xì)胞7、植物組織培養(yǎng)8、抗原決定簇9、IFN1

16、0、GMP二、填空題。本題共6小題，滿(mǎn)分20分。 1、體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞根據(jù)其生長(zhǎng)方式可分為 、 和 三類(lèi)。2、單個(gè)細(xì)胞基因表達(dá)產(chǎn)物的產(chǎn)量與 、 、 和 等因素有關(guān)。3、在HAT選擇培養(yǎng)基中，H代表 ； A代表 ； T代表 。4、用木瓜蛋白酶處理抗體將得到 個(gè) 片段和 個(gè) 片段。5、 單克隆抗體體外培養(yǎng)的方法有 、 和 。6、野生型Ti質(zhì)粒包括 、 和 三個(gè)區(qū)。三、單項(xiàng)選擇題。本題共10小題，滿(mǎn)分10分。 1、（）在動(dòng)物免疫時(shí)需要添加佐劑。A、顆粒性抗原 B、細(xì)胞性抗原C、可溶性抗原D、半抗原2、下列何種細(xì)胞不是用于生產(chǎn)的動(dòng)物細(xì)胞？（ ）A、原代細(xì)胞 B、傳代細(xì)胞C、轉(zhuǎn)化細(xì)胞D、胚性細(xì)胞3、單

17、子葉植物轉(zhuǎn)基因最常用到的方法是（）。A、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 B、基因槍轉(zhuǎn)化法C、葉盤(pán)法D、花粉管導(dǎo)入法4、下列何種藥物屬于抗腫瘤的酶類(lèi)藥物（ ）。A、谷氨酰氨酶 B、鏈激酶C、過(guò)氧化物酶D、彈性蛋白酶5、在原核表達(dá)時(shí)核糖體的結(jié)合位點(diǎn)是（ ）。A、啟動(dòng)子 B、轉(zhuǎn)錄終止子C、SD序列D、AUG起始密碼子6、原核表達(dá)時(shí)利用信號(hào)肽序列的表達(dá)方式是（ ）。A、融合表達(dá) B、非融合表達(dá)C、分泌表達(dá)D、包含體表達(dá)7、能使肝素失去活性的藥物是（ ）。A、魚(yú)精蛋白 B、硫酸軟骨素C、透明質(zhì)酸D、彈性蛋白酶8、免疫球蛋白不包括（ ）。A、IgA B、IgMC、IgDD、IgF9、下列屬于生長(zhǎng)素類(lèi)的植物激素是（ ）。B、

18、 2，4DB、玉米素C、腺嘌呤D、6BA10、下列載體按攜帶外源基因的能力從小到大的順序排列，順序正確的是（）。A、Plasmid< Cosmid< Phage< YACB、Plasmid< Phage < Cosmid < YACC、Plasmid< Cosmid< YAC < PhageD、Plasmid< YAC < Cosmid< Phage四、簡(jiǎn)答題。本題共5小題，滿(mǎn)分30分。 1、表達(dá)載體應(yīng)具備的條件有哪些？2、與真核生物相比，原核生物基因表達(dá)的特點(diǎn)有哪些？3、植物細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分有哪些？4、簡(jiǎn)述ELISA

19、實(shí)驗(yàn)的原理和步驟。5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的培養(yǎng)基可分為哪幾種？各有何特點(diǎn)？五、論述題。本題共2小題，滿(mǎn)分20分。 1、試述制備單克隆抗體藥物的工藝流程。2、請(qǐng)寫(xiě)出溶血和凝血的過(guò)程，并說(shuō)明抗凝血藥物的作用機(jī)理。答案2五、 名詞解釋11、 用微生物、微生物代謝產(chǎn)物、動(dòng)物毒素、人或動(dòng)物的血液或組織等直接制備或經(jīng)加工制成的，作為預(yù)防、診斷、治療疾病的制劑通稱(chēng)為生物制品。12、 單克隆抗體，針對(duì)一個(gè)抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。13、 是指采用一定的技術(shù)和方法將目的基因?qū)塍w內(nèi)以糾正病源基因從而達(dá)到治療效果的方法。 14、 人工構(gòu)建的大量含有特定生物個(gè)體全部基因的DNA片段的克隆。15、 固定

20、化酶，通過(guò)物理、化學(xué)方法處理使酶限制或固定于特定空間位置，使酶不易隨水流失而又能發(fā)揮催化作用。McAb16、 動(dòng)物細(xì)胞經(jīng)自然或人為因素轉(zhuǎn)化為異倍體后，細(xì)胞壽命由有限轉(zhuǎn)為無(wú)限，這樣的細(xì)胞即為轉(zhuǎn)化細(xì)胞。17、 在無(wú)菌條件下利用人工培養(yǎng)基和環(huán)境對(duì)植物體的器官、組織和細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。18、 抗原分子表面能與其抗體結(jié)合的部位。19、 干擾素，是人體細(xì)胞分泌的一類(lèi)活性蛋白質(zhì)，可以抗病毒、抗腫瘤、提高人體的免疫功能。20、 GMP：藥品質(zhì)量管理規(guī)范，國(guó)家規(guī)定的藥品生產(chǎn)企業(yè)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。六、 填空1、貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞（非粘附型細(xì)胞）、兼性貼壁細(xì)胞2、外源基因拷貝數(shù)、基因表達(dá)效率、表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性、宿主細(xì)

21、胞代謝負(fù)荷3、次黃嘌呤、氨基喋呤、胸腺嘧啶4、2 Fab；1 Fc5、懸浮培養(yǎng)、包埋培養(yǎng)、微囊化培養(yǎng)6、T-DNA區(qū)、Vir區(qū)和冠癭堿代謝酶編碼區(qū)七、 選擇題1、C；2、D；3、B；4、A；5、C；6、C；7、A；8、D；9、A；10、B八、 簡(jiǎn)答題1、表達(dá)載體1. 具有強(qiáng)啟動(dòng)子，能為RNA聚合酶所識(shí)別 2具有強(qiáng)終止子，使RNA聚合酶只轉(zhuǎn)錄目的基因而不轉(zhuǎn)錄其它無(wú)關(guān)基因。3所產(chǎn)生的mRNA 必須具有翻譯起始信號(hào)（原核細(xì)胞須有起始密碼AUG和SD序列），以便轉(zhuǎn)錄后能順利翻譯。4具有阻遏子，使啟動(dòng)子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，以獲得外源蛋白質(zhì)表達(dá)合成的最佳時(shí)機(jī)。 2、1) 原核生物只有一種R

22、NA聚合酶(真核生物有3種)，僅能識(shí)別原核基因啟動(dòng)子，而不能識(shí)別真核基因啟動(dòng)子。因而利用原核細(xì)胞表達(dá)真核基因時(shí)，一般應(yīng)使用原核啟動(dòng)子。2) 原核基因一般不含有內(nèi)含子(intron)，在原核細(xì)胞中缺乏mRNA轉(zhuǎn)錄后的加工系統(tǒng)。因此，在原核細(xì)胞中表達(dá)真核基因時(shí)，目的基因必須無(wú)內(nèi)含子序列，應(yīng)使用cDNA或人工合成基因。3) 原核基因的mRNA含有SD序列，該序列位于mRNA的5端起始密碼子的上游，能與16S核糖體RNA 3端互補(bǔ)結(jié)合，起始蛋白質(zhì)的合成。在真核生物的基因則缺乏該序列。 4) 原核細(xì)胞缺乏真核細(xì)胞對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后加工能力，利用原核細(xì)胞表達(dá)的目的蛋白不能進(jìn)行糖基化、磷酸化修飾，也不能進(jìn)行正

23、確的折疊等，因而表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性和功能并不能得到完全保證。在原核細(xì)胞表達(dá)外源基因，尤其是利用大腸桿菌高效表達(dá)真核生物基因時(shí)，表達(dá)產(chǎn)物通常在胞漿聚集，形成包含體(inclusion body)。包含體蛋白不具有該蛋白的所有生物學(xué)活性。 3、一、鹽：調(diào)節(jié)PH、滲透壓，酶的組成元素，包括大量和微量必需元素 大量元素：使用濃度大于30mg/L, N、P、K、Na、Ca等微量元素：使用濃度低于30mg/L, Cu、Mn、Zn、Co、Mo等鐵鹽：容易同其它鹽發(fā)生沉淀，單獨(dú)配制。二、營(yíng)養(yǎng)物： 主要有糖、氨基酸和維生素。 糖為培養(yǎng)物提供所需要的碳源，并有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。常用的是2%4%的蔗糖，有時(shí)也加入

24、葡萄糖和果糖等。 維生素植物自身合成維生素的量很少，必須加入B族維生素主要有硫胺素（維生素B1）、吡哆素（維生素B6）、煙酸（維生素B3）、泛酸（維生素B5）氨基酸甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和水解酪蛋白等。三、生長(zhǎng)物質(zhì) 調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育的微量化學(xué)物質(zhì)，常用的有生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分裂素兩類(lèi)。4、抗原和抗體特異結(jié)合成復(fù)合物后，再與酶標(biāo)記的二抗結(jié)合，酶又催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生特定的顏色。利用細(xì)胞培養(yǎng)板檢測(cè)不同的樣本，當(dāng)某樣本含有特定蛋白時(shí)，該孔即顯示特定的顏色，從而判斷為陽(yáng)性。包括以下步驟：包板；洗滌；加一抗；洗滌；加二抗；洗滌；顯色。5、一、天然培養(yǎng)基v 動(dòng)物血清、組織提取液、雞胚胎汁、水解乳蛋白

25、、膠原等v 優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高, 培養(yǎng)效果好v 缺點(diǎn)：來(lái)源有限、成本較高、不適合大規(guī)模生產(chǎn)。成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。 易發(fā)生支原體污染。 二、合成培養(yǎng)基主要成分：氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、核苷酸等v 優(yōu)點(diǎn)：組分和含量相對(duì)固定、易控制，可標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)；成本低，可大量生產(chǎn)供應(yīng)。 v 缺點(diǎn)：無(wú)法替代天然培養(yǎng)基中的一些未知成分，不能完全滿(mǎn)足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。 解決途徑合成培養(yǎng)基中添加小牛血清，彼此互補(bǔ)三、無(wú)血清培養(yǎng)基無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基的使用保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可重復(fù)性和穩(wěn)定性，減少了細(xì)胞污染，簡(jiǎn)化了提純和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序。適用于某種細(xì)胞株的培養(yǎng)液，很可能不適合

26、另一種細(xì)胞株的生長(zhǎng)。即使同源組織的不同細(xì)胞株，所需補(bǔ)加物也不同。 因此，無(wú)血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。五、論述題1、單克隆抗體的基本過(guò)程以研究的抗原對(duì)鼠進(jìn)行免疫，取脾細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合（PEG 融合）HAT培養(yǎng)基篩選融合細(xì)胞針對(duì)融合細(xì)胞產(chǎn)生的抗體進(jìn)行篩選克隆培養(yǎng)，分離，再克隆培養(yǎng)對(duì)單克隆抗體進(jìn)一步鑒定，大量制備2、抗血栓藥包括凝血因子抑制劑（肝素抑制凝血酶原激活劑的產(chǎn)生）和纖溶酶原激活劑 (尿激酶、tPA)生物制藥學(xué)試題3一、名詞解釋?zhuān)款}2分，共20分）1、 生物制藥2、 tPA3、 McAb4、 IFN5、 rHu CSF6、 細(xì)胞因子7、 IL8、 脫分化9、 佐劑10、

27、CDR二、填空題（每題2分，共20分）1、 生物藥物包括 、 和 。2、 按學(xué)科領(lǐng)域的不同，生物制藥可分為 、 、 和 。3、 植物培養(yǎng)基中含有 、 、 、 、 、 等成分。4、 植物激素包括 、 、 、 、 等五類(lèi)。5、 農(nóng)桿菌包括 和 兩類(lèi)。6、 體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞根據(jù)其生長(zhǎng)方式可分為 、 和 三類(lèi)。7、根據(jù)復(fù)制的方式（拷貝數(shù)）的不同，質(zhì)?？煞譃閮纱箢?lèi)型 和 ，其中 是基因工程中常用的類(lèi)型。8、原核表達(dá)載體可分為 、 和 三種類(lèi)型。9、篩選單克隆抗體陽(yáng)性克隆的方法有 、 和 。10、抗體的恒定區(qū)與 有關(guān)，而抗體的可變區(qū)與 有關(guān)。三、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共10分）1、 基因工程制藥中常用的

28、限制性?xún)?nèi)切酶是（）。A、I型 B、II型C、III型 D、IV型2、 Klenow酶與DNA聚合酶I相比不具有()的活性。A、53核酸內(nèi)切酶活性B、35核酸內(nèi)切酶活性C、53核酸外切酶活性D、35核酸外切酶活性3、 下列何種激素不屬于生長(zhǎng)素？A、2,4DB、IBAC、NAAD、6BA4、 植物激素（ ）是從經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理的鯡魚(yú)精細(xì)胞DNA中發(fā)現(xiàn)的。A、腺嘌呤 B、玉米素C、6芐基腺嘌呤D、激動(dòng)素5、下列何種DNA聚合酶是不依賴(lài)模板的DNA聚合酶？（）A、DNA聚合酶IB、DNA聚合酶I大片段C、逆轉(zhuǎn)錄酶D、末端轉(zhuǎn)移酶6、在下列酵母克隆載體中（）不能在染色體外自主復(fù)制。A、YIp質(zhì)粒 B、YR

29、p質(zhì)粒C、YEp質(zhì)粒D、YCp質(zhì)粒7、（）在動(dòng)物免疫時(shí)需要添加佐劑。A、顆粒性抗原 B、細(xì)胞性抗原C、可溶性抗原D、半抗原8、人鼠嵌合抗體是由（）組成的？A、人源抗體的V區(qū)+鼠源抗體的C區(qū) B、人源抗體的Fab區(qū)+鼠源抗體的Fc區(qū)C、人源抗體的C區(qū)+鼠源抗體的V區(qū) D、人源抗體的Fv區(qū)+鼠源抗體的Fc區(qū)9、下列何種藥物不屬于人工牛黃的成分？（ ）A、膽酸 B、膽紅素C、膽堿D、膽固醇10、能使肝素失去活性的藥物是（ ）。A、魚(yú)精蛋白 B、硫酸軟骨素C、透明質(zhì)酸D、彈性蛋白酶四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1 用于工業(yè)生產(chǎn)的動(dòng)物細(xì)胞有哪幾類(lèi)？各有何特點(diǎn)？2 與克隆載體相比表達(dá)載體應(yīng)具備哪些條件？

30、3 試述溶血和凝血的過(guò)程，并請(qǐng)說(shuō)明抗凝血藥物是如何發(fā)揮作用的？4請(qǐng)列舉第二代抗體藥物單克隆抗體藥物的優(yōu)缺點(diǎn)。五、論述題（每題10分，共30分）1、 試列舉蛋白質(zhì)類(lèi)藥物分離純化的方法。2、 試述研制單克隆抗體的工藝流程。3、 請(qǐng)說(shuō)明HAT選擇培養(yǎng)基篩選脾瘤雜交瘤細(xì)胞的機(jī)理。答案3一、名詞解釋1、 生物制藥是指利用生物體、生物組織及其代謝產(chǎn)物或生物過(guò)程生產(chǎn)藥物的技術(shù)。2、 組織型纖溶酶原激活劑，抗凝血藥，抑制纖溶酶的產(chǎn)生。3、 單克隆抗體，針對(duì)一個(gè)抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。4、 干擾素(Interferon)是人體細(xì)胞分泌的一類(lèi)活性蛋白質(zhì)，可以抗病毒、抗腫瘤、提高人體的免疫功能。

31、5、 重組人集落刺激因子，是一組控制粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及造血細(xì)胞增殖和分化的糖蛋白。6、 細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞分泌的高活性的多肽或蛋白質(zhì)，能調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能，參與各種細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡。包括細(xì)胞生長(zhǎng)因子和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子。7、 白細(xì)胞介素，由白細(xì)胞或其它體細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞和其它細(xì)胞間起調(diào)節(jié)和介導(dǎo)作用，是一類(lèi)重要的免疫調(diào)節(jié)劑，能刺激淋巴細(xì)胞的增殖，抗腫瘤。8、 在離體條件下，外植體分化的細(xì)胞轉(zhuǎn)變成分生狀態(tài)，形成胚性細(xì)胞團(tuán)（胚性愈傷組織）的現(xiàn)象。9、 佐劑定義：又稱(chēng)免疫增強(qiáng)劑，伴隨抗原物質(zhì)注射機(jī)體，可增強(qiáng)抗原的免疫原性，佐劑可使弱抗原物質(zhì)成為有效的抗原。10、 互補(bǔ)決定區(qū)

32、，在抗原V區(qū)上有三個(gè)，決定了抗體和抗原的特異結(jié)合。二、填空題11、 天然生化藥物、生物制品和生物技術(shù)藥物。12、 發(fā)酵工程制藥、基因工程制藥、細(xì)胞工程制藥和酶工程制藥13、 大量元素、微量元素、鐵鹽、碳源、維生素、氨基酸14、 生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素、脫落酸和乙烯。15、 根癌農(nóng)桿菌、發(fā)根農(nóng)桿菌16、 貼壁依賴(lài)型、非貼壁依賴(lài)型和兼性貼壁細(xì)胞17、 嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒和松弛型質(zhì)粒，松弛型質(zhì)粒18、 融合型表達(dá)載體、非融合型表達(dá)載體和分泌型表達(dá)載體19、 放射免疫、酶聯(lián)免疫、免疫熒光技術(shù)10、異種抗原性、與抗原的特異結(jié)合三、選擇題1、B； 2、C； 3、D； 4、C； 5、D； 6、A； 7、C； 8

33、、C； 9、C ； 10、A 四、簡(jiǎn)答題1、原代細(xì)胞：組織、器官粉碎消化獲得，很難保證細(xì)胞一致性，含多種細(xì)胞，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，獲得數(shù)目有限二倍體細(xì)胞：原代細(xì)胞經(jīng)傳代、篩選、克隆化后得到了純化的單形細(xì)胞?？蓚鞔鷶U(kuò)增，但壽命有限轉(zhuǎn)化細(xì)胞：染色體異倍化，細(xì)胞具有無(wú)限增殖的能力，更適于工業(yè)化生產(chǎn)，但有致癌的危險(xiǎn)。2、1. 具有強(qiáng)啟動(dòng)子，能為RNA聚合酶所識(shí)別 2具有強(qiáng)終止子，使RNA聚合酶只轉(zhuǎn)錄目的基因而不轉(zhuǎn)錄其它無(wú)關(guān)基因。3所產(chǎn)生的mRNA 必須具有翻譯起始信號(hào)（原核細(xì)胞須有起始密碼AUG和SD序列），以便轉(zhuǎn)錄后能順利翻譯。4具有阻遏子，使啟動(dòng)子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，以獲得外源蛋白質(zhì)表達(dá)合成

34、的最佳時(shí)機(jī)。3、抗血栓藥包括凝血因子抑制劑（肝素抑制凝血酶原激活劑的產(chǎn)生）和纖溶酶原激活劑 (尿激酶、tPA)4、具有良好的均一性和高度的特異性，單克隆抗體在疾病的診斷中得到廣泛應(yīng)用。但用于治療時(shí)有缺陷：（1） 是鼠源性的，在人體內(nèi)反復(fù)應(yīng)用會(huì)引起人抗鼠抗體（HAMA）反應(yīng)，發(fā)生排斥，從而降低療效，甚至可引起過(guò)敏反應(yīng)。（2） 分子量大，難以進(jìn)入相關(guān)組織發(fā)揮藥效。五、論述題1、（1）按溶解度不同進(jìn)行分離的方法 蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。蛋白質(zhì)形成膠體的穩(wěn)定因素：水化層和同種電荷，打破即沉淀。常用的有鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法（如抗體抗原）等。（2）按分子大小分

35、離的方法 這類(lèi)方法有超濾法和透析法、分子篩層析法、密度梯度離心法等。其中透析法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和脫鹽。（3）按所帶電荷不同進(jìn)行分離的方法 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶均為兩性電解質(zhì)，它們具有等電點(diǎn)，在離開(kāi)等電點(diǎn)的pH時(shí)不同蛋白便會(huì)帶不同的電荷。利用帶電性質(zhì)進(jìn)行分離。利用電學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分離的方法有離子交換柱層析法、電泳法（醋酸纖維薄膜電泳、PAGE、等電聚焦）等。（4）親和層析法 大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì)（配基 ），如酶與底物（或抑制劑）、抗原與抗體、激素與受體等，利用化合物的之間的特異的親合作用設(shè)計(jì)的層析分離技術(shù)稱(chēng)為親和層析。蛋白質(zhì)能與配基特異結(jié)合，親和層析分離專(zhuān)一性強(qiáng)，

36、操作簡(jiǎn)便。2、以研究的Ag對(duì)鼠進(jìn)行免疫，取脾細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合（PEG 融合）選擇培養(yǎng)基篩選融合細(xì)胞針對(duì)融合細(xì)胞產(chǎn)生的抗體進(jìn)行篩選克隆培養(yǎng)，分離，再克隆培養(yǎng)對(duì)單克隆抗體進(jìn)一步鑒定，大量制備3、細(xì)胞融合后可以產(chǎn)生脾脾、脾瘤、瘤瘤雜交細(xì)胞以及未融合的細(xì)胞，故需采用HAT選擇培養(yǎng)基篩選出脾瘤雜交細(xì)胞。HAT選擇培養(yǎng)基的成份H：次黃嘌呤 A：氨基喋呤T：胸腺嘧啶骨髓瘤細(xì)胞中不含HGPRT酶和TK酶，無(wú)法通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA，而正常合成DNA的途徑又被阻斷，因此瘤瘤融合細(xì)胞和瘤細(xì)胞因無(wú)法合成DNA而死亡。脾細(xì)胞中含有這兩種酶，但脾脾融合細(xì)胞和脾細(xì)胞不能在體外增殖。只有脾瘤融合細(xì)胞才能既能合成D

37、NA又能體外生長(zhǎng)，故可以在HAT培養(yǎng)基上存活。生物制藥學(xué)試題4一、名詞解釋?zhuān)款}2分，共20分）10、 生物制藥11、 植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)12、 EPO13、 McAb14、 補(bǔ)體系統(tǒng)15、 TNF16、 生物技術(shù)藥物17、 細(xì)胞因子18、 佐劑10、CDR二、填空題（每題2分，共20分）7、 生物藥物包括 、 和 。8、 按學(xué)科領(lǐng)域的不同，生物制藥可分為 、 、 和 。9、 利用體外培養(yǎng)法大量制備單克隆抗體的方法有 、 和 。10、 干擾素包括 、 、 和 等四種。11、 性抗原在動(dòng)物免疫時(shí)需要添加佐劑。12、 集落刺激因子包括 、 、 和 四種。7、抗體藥物的研究經(jīng)歷了三個(gè)階段，分別為 、

38、 和 。8、原核表達(dá)載體可分為 、 和 三種類(lèi)型。9、人鼠嵌合抗體是由 和 組成的10、抗體用木瓜蛋白酶處理后會(huì)被分解成 個(gè) 片段和 個(gè) 片段。三、選擇題（每題1分，共10分）5、 按照動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的分類(lèi)看，動(dòng)物培養(yǎng)基不包括（）。A、天然培養(yǎng)基 B、基礎(chǔ)培養(yǎng)基C、合成培養(yǎng)基 D、無(wú)血清培養(yǎng)基6、 Klenow酶與DNA聚合酶I相比不具有()的活性。A、53核酸內(nèi)切酶活性B、35核酸內(nèi)切酶活性C、53核酸外切酶活性D、35核酸外切酶活性7、 下列藥物中不具有抗凝血作用的是（）A、肝素B、透明質(zhì)酸C、尿激酶D、tPA8、 植物激素（ ）是從經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理的鯡魚(yú)精細(xì)胞DNA中發(fā)現(xiàn)的。A、腺嘌呤

39、B、玉米素C、6芐基腺嘌呤D、激動(dòng)素5、下列何種DNA聚合酶是不依賴(lài)模板的DNA聚合酶？（）A、DNA聚合酶IB、DNA聚合酶I大片段C、逆轉(zhuǎn)錄酶D、末端轉(zhuǎn)移酶6、在下列酵母克隆載體中（）不能在染色體外自主復(fù)制。A、YIp質(zhì)粒 B、YRp質(zhì)粒C、YEp質(zhì)粒D、YCp質(zhì)粒7、能使肝素失去活性的藥物是（ ）。A、魚(yú)精蛋白 B、硫酸軟骨素C、透明質(zhì)酸D、彈性蛋白酶8、免疫球蛋白不包括（ ）。A、IgA B、IgMC、IgDD、IgF9、最早被發(fā)現(xiàn)的植物天然細(xì)胞分裂素是（ ）。C、 激動(dòng)素B、玉米素C、腺嘌呤D、6BA10、下列載體按攜帶外源基因的能力從小到大的順序排列，順序正確的是（）。A、Plas

40、mid< Cosmid< Phage< YACB、Plasmid< Phage < Cosmid < YACC、Plasmid< Cosmid< YAC < PhageD、Plasmid< YAC < Cosmid< Phage四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1常見(jiàn)的植物轉(zhuǎn)基因的方法有哪些？2簡(jiǎn)述單克隆抗體藥物的優(yōu)缺點(diǎn)。3將基因工程的表達(dá)產(chǎn)物設(shè)計(jì)為融合蛋白主要有哪些意義？4基因工程制藥中的載體應(yīng)具備哪些條件？五、論述題（每題10分，共30分）4、 用于基因工程制藥的宿主細(xì)胞有哪些？并請(qǐng)寫(xiě)出它們各自的特點(diǎn)。5、 如何對(duì)基因工

41、程藥物實(shí)施全面質(zhì)量控制？6、 請(qǐng)畫(huà)出抗體的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖并作簡(jiǎn)要描述。答案4一、名詞解釋1、 生物制藥是指利用生物體、生物組織及其代謝產(chǎn)物或生物過(guò)程生產(chǎn)藥物的技術(shù)。2、 是指在無(wú)菌和人工控制營(yíng)養(yǎng)及環(huán)境條件對(duì)植物的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。3、 促紅細(xì)胞生成素。4、 單克隆抗體，針對(duì)一個(gè)抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。5、 補(bǔ)體系統(tǒng)（complement system）是由一系列蛋白質(zhì)分子組成的，它能參與破壞或者清除那些與抗體結(jié)合的抗原，包括與抗體結(jié)合的外源的細(xì)胞或細(xì)菌，屬體液免疫。6、 腫瘤壞死因子7、 采用現(xiàn)代生物技術(shù)人為地創(chuàng)造一些條件，借助某些微生物、植物或動(dòng)物來(lái)生產(chǎn)的藥物

42、。8、 是由免疫細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞分泌的高活性的多肽或蛋白質(zhì)，能調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能，參與各種細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡。包括細(xì)胞生長(zhǎng)因子和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子。9、 佐劑定義：又稱(chēng)免疫增強(qiáng)劑，伴隨抗原物質(zhì)注射機(jī)體，可增強(qiáng)抗原的免疫原性，佐劑可使弱抗原物質(zhì)成為有效的抗原。10、 互補(bǔ)決定區(qū)，在抗原V區(qū)上有三個(gè)，決定了抗體和抗原的特異結(jié)合。二、填空題1、 天然生化藥物、生物制品和生物技術(shù)藥物。2、 發(fā)酵工程制藥、基因工程制藥、細(xì)胞工程制藥和酶工程制藥3、 懸浮培養(yǎng)、包埋培養(yǎng)、微囊化培養(yǎng)4、 、5、 顆粒6、 粒細(xì)胞集落刺激因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子和多潛能集落刺激因子7、 多

43、克隆抗體、單克隆抗體、基因工程抗體8、 非融合型、融合型、分泌型9、 鼠可變區(qū)；人恒定區(qū)10、2 Fab；1 Fc三、選擇題1、B； 2、C； 3、B； 4、D； 5、D； 6、A； 7、A； 8、D； 9、B； 10、B 四、簡(jiǎn)答題1、主要有生物轉(zhuǎn)化法和物理轉(zhuǎn)化法兩類(lèi)。其中生物轉(zhuǎn)化法屬于間接轉(zhuǎn)化，包括農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和病毒載體轉(zhuǎn)化法，物理轉(zhuǎn)化法屬于直接轉(zhuǎn)化，包括聚乙二醇法、磷酸鈣法、電擊法和基因槍法。2、 由于具有良好的均一性和高度的特異性，單克隆抗體在疾病的診斷中得到廣泛應(yīng)用。但用于治療時(shí)有缺陷：1、是鼠源性的，在人體內(nèi)反復(fù)應(yīng)用會(huì)引起人抗鼠抗體（HAMA）反應(yīng)，發(fā)生排斥，從而降低療效，甚至可引

44、起過(guò)敏反應(yīng)。2、分子量大，難以進(jìn)入相關(guān)組織發(fā)揮藥效。3、1. 外源基因與宿主細(xì)胞高表達(dá)基因的N端序列融合，可以提高表達(dá)水平；2. 含有宿主細(xì)胞N端序列的融合蛋白比較穩(wěn)定，不易被宿主蛋白酶降解； 3. 融合蛋白之間加有接頭，經(jīng)過(guò)處理可切除N端的原核部分，獲得有生物活性的真核部分；4. 易純化和檢測(cè)：利用融合原核多肽的特性。4、（1） 有針對(duì)受體細(xì)胞的親緣性或親和性（可轉(zhuǎn)移性）（2） 具有復(fù)制起始位點(diǎn)，能夠自主復(fù)制（3） 具有較高的外源DNA的裝載能力 （4） 具有多種單一的核酸內(nèi)切酶識(shí)別切割位點(diǎn) （5） 具有合適的篩選標(biāo)記 五、論述題1、一、原核細(xì)胞1. 大腸桿菌 遺傳背景清楚，載體受體系統(tǒng)完備

45、，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，重組子穩(wěn)定，適用于外源DNA的擴(kuò)增和克隆、基因文庫(kù)的構(gòu)建、原核生物基因的高效表達(dá)，是DNA重組實(shí)驗(yàn)和基因工程的主要受體菌。其表達(dá)基因工程產(chǎn)物的形式多種多樣，有細(xì)胞內(nèi)不溶性表達(dá)（包含體）、胞內(nèi)可溶性表達(dá)、細(xì)胞周質(zhì)表達(dá)等，極少數(shù)情況下還可分泌到細(xì)胞外表達(dá)。產(chǎn)品多在細(xì)胞內(nèi)，提取時(shí)需破碎細(xì)胞。易形成包含體，需經(jīng)變性復(fù)性恢復(fù)其生理活性。原核無(wú)翻譯后修飾，蛋白產(chǎn)物不能糖基化，不能表達(dá)糖蛋白。大腸桿菌會(huì)產(chǎn)生很難除去的內(nèi)毒素。2. 枯草芽孢桿菌（枯草桿菌）遺傳背景清楚，蛋白質(zhì)分泌機(jī)制健全 ，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，不產(chǎn)內(nèi)毒素。遺傳欠穩(wěn)定，載體受體系統(tǒng)欠完備。適用于原核生物基因的克隆、表達(dá)以及

46、重組蛋白多肽的有效分泌?？莶菅挎邨U菌分泌能力強(qiáng)，可以將蛋白質(zhì)產(chǎn)物直接分泌到培養(yǎng)液中，不形成包含體。但該菌也不能使蛋白質(zhì)產(chǎn)物糖基化，另外由于它有很強(qiáng)的胞外蛋白酶，會(huì)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行不同程度的降解，因此它在外源基因表達(dá)的應(yīng)用中受到影響。3. 鏈霉菌抗生素的主要生產(chǎn)者，分子遺傳相對(duì)操作簡(jiǎn)便，不產(chǎn)內(nèi)毒素。遺傳不穩(wěn)定，生長(zhǎng)相對(duì)緩慢。主要用于抗生素的表達(dá)、抗生素生產(chǎn)菌株的改良。鏈霉菌是重要的工業(yè)微生物，近年來(lái)作為外源基因表達(dá)體系正日益受到人們的重視。其主要特點(diǎn)是：不致病、使用安全，分泌能力強(qiáng)，可將表達(dá)產(chǎn)物直接分泌到培養(yǎng)液中，具有糖基化能力，是理想的受體菌。二、真核細(xì)胞1. 酵母菌具有真核生物的特征，遺傳背景清楚

47、，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)簡(jiǎn)單，外源基因表達(dá)系統(tǒng)完善，遺傳穩(wěn)定。適用于外源DNA的擴(kuò)增、克隆、基因文庫(kù)的構(gòu)建以及真核生物基因的高效表達(dá)、真核生物基因表達(dá)調(diào)控的研究。是DNA重組實(shí)驗(yàn)和基因工程重要的真核性受體菌酵母菌是研究基因表達(dá)調(diào)控最有效的單細(xì)胞真核微生物現(xiàn)已在酵母中成功地建立了幾種有分泌功能的表達(dá)系統(tǒng)，能夠?qū)⑺磉_(dá)的產(chǎn)物直接分泌出酵母細(xì)胞外，從而大大簡(jiǎn)化了產(chǎn)物的分離純化工藝。表達(dá)產(chǎn)物能糖基化。在細(xì)菌系統(tǒng)中表達(dá)不良的真核基因，在酵母中表達(dá)良好。常用的酵母菌啤酒酵母又名面包酵母，應(yīng)用最久，一直被稱(chēng)為“真核生物中的大腸桿菌”現(xiàn)在常用畢赤酵母目前已有不少真核基因在酵母中獲得成功克隆和表達(dá)，如干擾素、乙肝表面抗

48、原基因等。2. 絲狀真菌 絲狀真菌是重要的工業(yè)菌株。已在約30種以上絲狀真菌中建立了DNA轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。 其特點(diǎn)是：有很強(qiáng)的蛋白質(zhì)分泌能力能正確進(jìn)行翻譯后加工，包括肽剪切和糖基化等，加工方式與高等真核生物相似是安全菌株，有成熟的發(fā)酵和后處理工藝3.昆蟲(chóng)細(xì)胞（家蠶）具有真核生物的特征，外源基因表達(dá)量高，繁殖相對(duì)較快，培養(yǎng)成本低廉，遺傳穩(wěn)定DNA重組操作系統(tǒng)欠完善，適用于真核生物基因的高效表達(dá)。4. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO） 與人的親緣關(guān)系近，表達(dá)和代謝途徑相似，分子重組表達(dá)系統(tǒng)健全，具有合適的糖基化修飾系統(tǒng)。適用于哺乳類(lèi)動(dòng)物和人的基因表達(dá)調(diào)控研究、基因藥物的生產(chǎn)，是DNA重組實(shí)驗(yàn)和基因工程的主要哺乳動(dòng)物受體。哺乳動(dòng)物細(xì)胞由于外源基因的表達(dá)產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化的細(xì)胞然后分泌到培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液成分處在離體條件下完全由人控制，從而使產(chǎn)物純化變得容易。哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌的基因產(chǎn)物是糖基化的，非常接近或類(lèi)似于天然產(chǎn)物