石榴根皮等9種中藥體外抗人芽囊原蟲的效果觀察

1、石榴根皮等9種中藥體外抗人芽囊原蟲的效果觀察                  作者：蘇水蓮，陳桂鳳，張瑞其，謝瓊【關(guān)鍵詞】  人芽囊原蟲；,石榴根皮；,胡黃連；,殺蟲效果；,形態(tài)摘要：目的探討石榴根皮等9種中草藥殺人芽囊原蟲的效果。方法采用不同濃度中草藥水提液進(jìn)行體外抗人芽囊原蟲實(shí)驗(yàn)，并用光鏡觀察作用后人芽囊原蟲的形態(tài)變化。結(jié)果隨著藥物作用時(shí)間的延長和藥物濃度的增加，石榴根皮、胡黃連、黃連、苦楝皮對人芽囊原蟲有不同程度的凋亡

2、現(xiàn)象，這些藥物對人芽囊原蟲的MIC值分別為 0.1，0.6，0.8，0.8 g/ml，光鏡觀察蟲體表膜凹陷，剝脫，破裂。低濃度胡黃連藥物作用蟲體后均轉(zhuǎn)變成包囊，而白頭翁、南瓜子、使君子、檳榔、苦參對人芽囊原蟲均無作用。結(jié)論 石榴根皮、胡黃連可直接作用于蟲體表膜，具有較強(qiáng)的殺人芽囊原蟲的作用。關(guān)鍵詞：人芽囊原蟲；  石榴根皮；  胡黃連；   殺蟲效果；   形態(tài)Abstract：ObjectiveTo study the effect of Psidium guajaual  and other eight Chinese

3、herbs on the Blastocysitis hominis. MethodsTrchomonacidal effect of Chinese herbs was investigated using various concentration of Chinese herbs water extract against Blastocysitis hominis in vitro.The morphological changes of the Blastocysitis hominis were observed by light microscope.ResultsWith pr

4、olongation of the time of drug action and increase of its concentration, Psidium guajaul, Picrorhra scrophulariitlora Pennell, Coptis chiennsis Franch and Melia azedarach Linn have the effect of apoptosis to Blastocystis hominis. Their lowest concentrations were respectively 0.1,0.4,0.6,0.8g/ml.We c

5、an observe the cell membrance hollowed,exfoliated  and ruptured. The Blastocystis hominis change into cyst with low concentration of Picrohica scrophulariitlora Pennell. And Pulsatilla chinenensis Bunge Regel, Cucurita moschata Ouch, Quisgualis indical, Areca actechata Duch and Sophora flavesce

6、ns Aic have no effect to Blastocystis hominis.ConclusionPsidium guajaual and Picrorhica scrophulariitlora Pennell destroyed cell membrane directly and exhibited effective trichomonacidal Blastocystis hominis action.Key words：Blastocystis hominis；  Psidium guajaual；  Picrorhica scrophularii

7、tlora Pennell；  Trichomonacidal effect;   Objective conformation     人芽囊原蟲(Blastocystis hominis 簡稱B.h)是近20年被人們所重視的與腹瀉相關(guān)的人體寄生原蟲。在我國，已將其所致疾病列為新發(fā)傳染病1，人芽囊原蟲病一般呈散在發(fā)病，但在贛南崇義縣于1996年發(fā)生過暴發(fā)流行2。我院2002級新生B.h感染率為10.09%（426/43）3。我們曾用甲硝唑?qū)Ω腥菊哌M(jìn)行治療，3個(gè)月后復(fù)查大多數(shù)陰轉(zhuǎn)效果不佳，且易復(fù)發(fā)。另有研究表明甲硝唑具有致畸和致癌作用

8、4。文獻(xiàn)報(bào)道石榴根皮性酸、味澀，具有澀腸、止血、殺蟲之功效5。主要治療細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾和多種感染性疾病。胡黃連等具有解毒殺蟲的功效6。為了提供、開發(fā)新的抗原蟲的中草藥實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，我們用了9種中草藥在體外觀察殺B.h的效果?，F(xiàn)報(bào)道如下。1  材料 1.1   B.h蟲株  蟲株分離自贛醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化科、兒科病人的糞便，在（36±0.5）的普通厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3天傳代1次，共傳代20次的培養(yǎng)液。1.2   藥物  實(shí)驗(yàn)用藥（購自本院附屬醫(yī)院中藥房及當(dāng)?shù)蒯t(yī)公司門市部），全部為中醫(yī)藥書中具有清熱解毒和驅(qū)蟲效果的

9、中草藥。1.3  培養(yǎng)基  Locke's雞蛋血清(LockeEggSerum ，LES) 雙相培養(yǎng)基5，成30°斜面置90 100烤箱加熱凝固制成。轉(zhuǎn)種前每管加5 ml洛氏液，14滅活的無菌新生小牛血清（購自中國杭州四季青生工程材料有限公司）及堿性抗生素溶液（0.4%氨芐青霉素，0.1%鏈霉素，0.000 6%兩性霉素B）即可轉(zhuǎn)種。2  方法2.1  藥液制備  將9種中草藥（干藥）各10 g，分別裝入250 ml三角燒瓶內(nèi)，各置50 ml蒸餾水中，浸泡過夜，然后放入80水浴箱中熱浸4 h。過濾除去藥渣，濾液分別用文火濃縮至

10、藥液濃度為1，4，6，8。3 000 r/min離心10 min，取上清，抽濾除菌，調(diào)整滲透壓，置無菌瓶中，4保存?zhèn)溆谩?.2  光學(xué)顯微鏡觀察   每種中草藥配制4個(gè)藥物濃度組，分別為0.1，0.4，0.6，0.8 g/ml，同時(shí)設(shè)無藥對照組。取出培養(yǎng)36h的人芽囊原蟲培養(yǎng)管，分別等量從培養(yǎng)基底層吸出20 l蟲體懸液滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。用血細(xì)胞記數(shù)器做計(jì)數(shù)觀察，計(jì)算出每mm3所含蟲數(shù)。每管蟲體濃度約為1×103個(gè)/ml, 然后用不同濃度的藥液1ml加入各培養(yǎng)管中，放置（36±0.5）培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)2，4，8，12 h后分別吸取各管蟲液

11、滴片鏡檢，用高倍鏡觀察蟲體活動(dòng)狀態(tài)，計(jì)算蟲體死亡率。培養(yǎng)24 h后對死亡率為100%的實(shí)驗(yàn)管進(jìn)行轉(zhuǎn)種，（36±0.5）繼續(xù)培養(yǎng)48 h，觀察是否有B.h存活，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。     3  結(jié)果同一作用時(shí)間，石榴根皮、胡黃連、黃連、苦楝皮組的B.h死亡率均高于對照組（P0.01），且蟲體死亡率隨藥物濃度增加而增高（P0.01）；同一藥物濃度，隨著作用時(shí)間延長，B.h死亡率也逐漸增高（P0.05）。高倍鏡下，石榴根皮組作用2 h后，1，4，6，8 g/ml濃度組蟲體全部凋亡，形態(tài)發(fā)生明顯改變。大部分蟲體胞膜邊緣模糊，蟲體凹陷裂解（圖）

12、。而胡黃連組作用2 h后1，4g/ml濃度組蟲體全部誘導(dǎo)成包囊（圖2）。作用8 h后6，8 g/ml濃度組蟲體全部死亡。再將石榴根皮及胡黃連蟲液組轉(zhuǎn)種培養(yǎng)24 h，均未見B.h生長?？嚅?、黃連對蟲體作用不強(qiáng)，而白頭翁、南瓜子、使君子、檳榔、苦參對人芽囊原蟲無作用。結(jié)果見表1。對照組蟲體完好無缺（圖3）。圖1  （略）圖2  （略）圖3  對照組（正常培養(yǎng)的人芽囊原蟲）（略）MIC測定：結(jié)果顯示石榴根皮、胡黃連對人芽囊原蟲凋亡最快，時(shí)間最短，MIC最低。而黃連、苦楝皮作用不強(qiáng)，檳榔、苦參、白頭翁、南瓜子、使君子對人芽囊原蟲均無作用。結(jié)果見表2。表1  9

13、種中草藥體外殺人芽囊原蟲效果（略）表2  9種中草藥B.h實(shí)驗(yàn)的MIC比較（略）4  討論中藥石榴根皮Psidium guajaual是落葉灌木或小喬木，具有澀腸止瀉止血、解毒殺蟲的功效。臨床常用于治療久痢、久瀉、便血、脫肛、崩漏、白帶、蟲積腹痛等癥6。近年研究表明，石榴根皮具有對多種細(xì)菌和流感病毒有抑制作用7。胡黃連是玄參科多年生長低矮草木植物，是一種常用藥材。有清熱、除濕、明目、補(bǔ)肝、益膽、殺蟲的效用。本研究證實(shí)，石榴根皮具有明顯的殺滅人芽囊原蟲的作用，0.1 g/ml濃度的藥物作用2 h對B.h均具有殺滅和裂解作用。胡黃連早期可誘導(dǎo)蟲體成囊，隨著藥物濃度的增加，作用時(shí)

14、間的延長，B.h死亡率增高，即殺蟲效果和藥物濃度及作用時(shí)間成正相關(guān)。0.6 g/ml濃度的藥物作用8 h人芽囊原蟲全部凋亡。且轉(zhuǎn)種后均無B.h生長。選擇合適的藥物濃度和作用時(shí)間進(jìn)行光鏡觀察是研究藥物作用機(jī)制的關(guān)鍵。據(jù)此，本次實(shí)驗(yàn)選用低濃度石榴根皮藥液，蟲體快速凋亡、裂解，充分顯示了石榴根皮的殺蟲效果，但無法觀察蟲體表膜受損的動(dòng)態(tài)變化過程，其確切機(jī)制值得進(jìn)一步研究。低濃度胡黃連藥液能充分觀察蟲體受藥物作用的變化，先將滋養(yǎng)體誘導(dǎo)成囊，然后在高濃度藥物作用后，蟲體迅速死亡。黃連、苦楝皮對人芽囊原蟲作用不強(qiáng)，而白頭翁、南瓜子、使君子、檳榔、苦參對人芽囊原蟲均無作用，故認(rèn)為石榴根皮、胡黃連水提液均有殺人

15、芽囊原蟲的作用。石榴根皮、胡黃連是一種常見中草藥，我國資源豐富，成本低廉，毒性低。本次實(shí)驗(yàn)為利用石榴根皮、胡黃連研制新的外用兼口服的高效低毒的抗人芽囊原蟲藥物奠定基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)：1  潘孝彰. 新發(fā)傳染病M.北京：人民衛(wèi)生出版社, 2004,153.2  吳國宏，熊以樹，曹鎬祿，等. 一起人芽囊原蟲病爆發(fā)流行的調(diào)查研究J.中國寄生蟲學(xué)防治雜志  2000，13(1)：25.3  蘇水蓮，陳桂鳳，騰敏昌,等.大學(xué)新生腸道寄生蟲感染情況調(diào)查J.中國寄生蟲學(xué)防治雜志，2003，16(6)：381.4  Goldman P. Metronidazole: p