青蒿琥酯逆轉(zhuǎn)K562A02細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥性機(jī)理的研究 醫(yī)學(xué)論文

1、青蒿琥酯逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥性機(jī)理的研究 醫(yī)學(xué)論文 本文由中國(guó)論文范文收集整理。 目的： 研究 青蒿琥酯逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性及其作用機(jī)制。 方法 ：以對(duì)阿霉素敏感的K562細(xì)胞作為對(duì)照，用MTT法觀察在有或無(wú)阿霉素存在條件下青蒿琥酯對(duì)培養(yǎng)的K562/A02細(xì)胞干預(yù)48 h后的生長(zhǎng)抑制情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)100 gml-1青蒿琥酯作用48 h前后K562/A02細(xì)胞 P糖蛋白（Pgp）平均熒光強(qiáng)度（MFI）的強(qiáng)弱,生化方法檢測(cè)100 gml-1青蒿琥酯作用48 h前后K562/A02細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）的含量。 結(jié)果：(1)在不含阿霉素情況下，青蒿琥酯對(duì)K

2、562及K562/A02細(xì)胞的IC50分別為13.80 gml-1和13.62 gml-1（P0.05），在阿霉素存在情況下，青蒿琥酯對(duì)K562/A02細(xì)胞抑制作用明顯增加（P0.01）；(2)與K562細(xì)胞Pgp的表達(dá)相比,K562/A02細(xì)胞Pgp高表達(dá),青蒿琥酯處理前后K562/A02細(xì)胞的MFI無(wú)差別（P0.05）；(3)青蒿琥酯處理后K562/A02細(xì)胞內(nèi)GSH含量較處理前明顯下降（P0.05）。結(jié)論：青蒿琥酯對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用，且可逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥，其機(jī)制可能是通過(guò)干擾細(xì)胞內(nèi)GSHGSH轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)功能的發(fā)揮，而非對(duì)Pgp表達(dá)的 影響

3、 。 青蒿琥酯；多藥耐藥；K562/A02細(xì)胞；谷胱甘肽 多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是指腫瘤細(xì)胞對(duì)一種化療藥物出現(xiàn)耐藥的同時(shí),對(duì)其他結(jié)構(gòu)不同、作用靶位不同的化療藥物亦產(chǎn)生抗藥性，是腫瘤化療失敗和復(fù)發(fā)的根源。 目前 尋找低毒、高效的耐藥逆轉(zhuǎn)劑已經(jīng)成為腫瘤 治療 研究的方向。K562/A02 細(xì)胞是經(jīng)阿霉素逐步誘導(dǎo)、具有MDR表型的穩(wěn)定細(xì)胞系。我們?cè)谘芯壳噍镧タ鼓[瘤的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，K562/A02細(xì)胞同K562細(xì)胞一樣均對(duì)青蒿琥酯敏感，并且青蒿琥酯的存在可逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性，其不影響K562/A02細(xì)胞Pgp的表達(dá)而顯著降低K562/A02細(xì)

4、胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。 1 材料和方法 11 細(xì)胞系及細(xì)胞培養(yǎng)人紅白血病細(xì)胞株K562及K562/A02細(xì)胞由東南大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。K562細(xì)胞接種于含10%小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液,K562/A02細(xì)胞接種于含2 gml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液,置于37 、5%CO2 培養(yǎng)箱中,23 d傳代1 次。 1.2 主要藥物及試劑青蒿琥酯（廣西桂林制藥二廠，批號(hào) 010901），臨用前溶于5的NaHCO3溶液中，然后用RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋；四氮唑藍(lán)（MTT，Gibco公司）；二甲基亞砜（DMSO，Sigma公司）；Pg

5、p 單抗(PEUIC2美國(guó)Coulter 公司)；GSH測(cè)定試劑盒、考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。 1.3 青蒿琥酯對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞增殖的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562及K562/A02細(xì)胞,調(diào)細(xì)胞濃度為1.0105 ml-1 。青蒿琥酯分別用含10%小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液及含2 gml-1阿霉素、10%小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液稀釋,作用終濃度依次為100、50、25、12.5、6.25、3.125 gml-1。將各濃度青蒿琥酯分別與0.1 ml培養(yǎng)細(xì)胞加入96 孔平底培養(yǎng)板中，每組樣本設(shè)5個(gè)復(fù)孔。37 、5%CO2 飽和濕度下培養(yǎng)48

6、 h。在終止培養(yǎng)前4 h每孔加入MTT 20 l(5 mgml1),繼續(xù)培養(yǎng)4 h后離心10 min,棄上清液,加入DMSO 150 l，放在平板振蕩器上振蕩溶解甲10 min；將培養(yǎng)板置ELSA酶標(biāo)儀在570 nm波長(zhǎng)處測(cè)每孔的光密度（OD）值并記錄。 計(jì)算 抑制率并利用何爾恩法1計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）。抑制率（1-實(shí)驗(yàn)組OD對(duì)照組OD）100。 14 青蒿琥酯對(duì)K562/A02細(xì)胞 Pgp 表達(dá)的影響無(wú)菌收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562及K562/A02細(xì)胞,細(xì)胞濃度為2106 ml-1。PBS 洗滌,PEUIC2 4 避光反應(yīng)30 min,PBS洗滌后重懸,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞Pgp平均熒光

7、強(qiáng)度（MFI），設(shè)不加PEUIC2組作為自身陰性對(duì)照。K562/A02細(xì)胞經(jīng)100 gml-1青蒿琥酯處理48 h后無(wú)菌收集，配成濃度為2106 ml-1的細(xì)胞懸液。按上述方法測(cè)Pgp的MFI。 15 青蒿琥酯對(duì)K562/A02細(xì)胞內(nèi)GSH含量的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562及K562/A02細(xì)胞,調(diào)細(xì)胞濃度為1.0105 ml-1 ，分為K562 細(xì)胞無(wú)藥組、K562/A02細(xì)胞無(wú)藥組及K562/A02 細(xì)胞藥物（100 gml-1青蒿琥酯）處理組。培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞,PBS 洗滌后調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1106 ml-1,取2 ml破碎細(xì)胞,離心后留取上清。實(shí)驗(yàn)按試劑盒說(shuō)明書操作,顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光度

8、,于595 nm波長(zhǎng)處測(cè)定蛋白,412 nm波長(zhǎng)處測(cè)定GSH含量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次。計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組蛋白含量及細(xì)胞內(nèi)GSH 含量。 16 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x-s表示，兩組間采用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性 分析 。 2 結(jié) 果 21 青蒿琥酯對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞增殖的影響青蒿琥酯對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞抑制率見(jiàn)表。在不含阿霉素情況下，青蒿琥酯對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞的IC50分別為13.80 gml-1和13.62 gml-1（P0.05），但是在阿霉素存在情況下，青蒿琥酯對(duì)K562/A02細(xì)胞的IC50為2.64 gml-1，差異非常顯著（P0.01），說(shuō)明青蒿琥酯可以逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥，兩者具有協(xié)同性。表1 青蒿琥酯對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞的抑制率 關(guān)鍵詞:研究,細(xì)胞,K562/A02,K562,培養(yǎng),醫(yī)學(xué)論文,青蒿琥酯逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥性機(jī)理的研究 內(nèi)容摘要:本文由中國(guó)