不同支氣管擴(kuò)張藥物治療哮喘時(shí)β受體及細(xì)胞因子的變化

1、    不同支氣管擴(kuò)張藥物治療哮喘時(shí)受體及細(xì)胞因子的變化            作者：時(shí)間：2007-11-22 12:49:00                          

2、0;                      作者：方智野， 鄭明星， 鄧海燕， 王健【摘要】  目的：了解不同種類支氣管擴(kuò)張藥物治療哮喘時(shí)受體的變化以及相關(guān)細(xì)胞因子的變化。方法：選取穩(wěn)定期哮喘患者和健康志愿者為研究對(duì)象，對(duì)哮喘患者分別應(yīng)用溴化異丙托品、2受體激動(dòng)劑、聯(lián)合應(yīng)用溴化異丙托品和2受體激動(dòng)劑、茶堿。用放射性配基結(jié)合分析法測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞受體的變化，測(cè)定血清白介素5

3、（interleukin-5，IL-5）、白介素12（interleukin-12，IL-12）含量。結(jié)果：健康對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞受體密度比哮喘各組顯著升高(P<0.01)。沙丁胺醇組和聯(lián)合用藥組治療后受體密度較治療前下降顯著(P<0.01)。溴化異丙托品組和茶堿組治療前后受體密度變化不顯著。健康對(duì)照組血清IL-5比哮喘各組顯著低(P<0.01)，血清IL-12比哮喘各組顯著增高(P<0.01)。哮喘各組治療后IL-5均比治療前顯著降低(P<0.01)，哮喘各組治療后IL-12均比治療前顯著升高(P<0.01)。結(jié)論：長(zhǎng)期應(yīng)用2受體激動(dòng)劑會(huì)導(dǎo)致受體下調(diào)，長(zhǎng)

4、期應(yīng)用溴化異丙托品和茶堿對(duì)受體無(wú)影響。溴化異丙托品、2受體激動(dòng)劑和茶堿都能抑制Th2類細(xì)胞因子的過(guò)度分泌，調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞群功能失衡。 【關(guān)鍵詞】  哮 喘哮喘治療中，溴化異丙托品與受體激動(dòng)劑聯(lián)合應(yīng)用起協(xié)同作用，可增強(qiáng)療效1，其原因是否與受體上調(diào)有關(guān)未見(jiàn)報(bào)道。本研究單用及聯(lián)合應(yīng)用抗膽堿能制劑、2受體激動(dòng)劑治療哮喘，用放射性配基結(jié)合分析法測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞受體的變化，測(cè)定血清白介素5、白介素12含量，分析受體變化及其與血清白介素5、白介素12含量的相關(guān)性。1  對(duì)象和方法1.1  檢測(cè)對(duì)象：健康志愿者10人，哮喘患者40例，男女不限，年齡1960歲，接受觀察時(shí)40例患

5、者均處于哮喘輕度發(fā)作期，支氣管哮喘的診斷和病情評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)中華呼吸病學(xué)會(huì)哮喘診治指南。隨機(jī)分為4組：溴化異丙托品治療60d組10人;沙丁胺醇治療60d組10人;聯(lián)合吸入溴化異丙托品和沙丁胺醇60d組10人;茶堿60d組10人;對(duì)照組10人(健康志愿者)。1.2  給藥方法：患者給藥方法：溴化異丙托品治療組：定量霧化器吸入40g,4次/d。沙丁胺醇治療組：定量霧化吸入400g,4次/d。聯(lián)合吸入溴化異丙托品和沙丁胺醇組：先吸入溴化異丙托品，后吸入沙丁胺醇。茶堿組：口服氨茶堿0.1g，3次/d。1.3  標(biāo)本留取和測(cè)定：對(duì)哮喘患者，分別于治療前、治療后60d靜脈取血。檢測(cè)前24

6、h禁煙、酒、茶、咖啡及辛辣食物。運(yùn)用放射配體結(jié)合法測(cè)定人外周血淋巴細(xì)胞受體密度淋巴細(xì)胞分離：于靜息30min后取坐位肘靜脈血6ml，肝素抗凝、加2倍生理鹽水稀釋沿管壁加入淋巴細(xì)胞分離液3ml，水平式離心機(jī)2000r/min離心2min后，再用生理鹽水洗滌兩次，吸取沉淀放在少量配制液(Tris液+MgCl2+維生素C)在-70保存。淋巴細(xì)胞膜制備：取出標(biāo)本（以下各步驟操作均在冰浴進(jìn)行）打成勻漿，加2ml配制液，用Teflon勻漿器勻漿1min，移至另一塑料試管中待測(cè)。人外周血淋巴細(xì)胞受體測(cè)定：總結(jié)合及非特異性結(jié)合均為雙復(fù)管（以下各步均在冰浴中進(jìn)行）。測(cè)定管中加入100L配制液; 非特異性結(jié)合管中

7、加入0.1g/L心得安100L，各管中加入放射性配基（25ICYP）約50萬(wàn)脈沖數(shù)(min-1)0.1ml及膜碎片標(biāo)本200L，放在37水溫箱搖床內(nèi)水浴30min,用細(xì)胞收集器將以上復(fù)合物抽濾至玻璃纖維薄膜上，將各標(biāo)本的濾膜分別加入記數(shù)管，用記數(shù)儀測(cè)脈沖值min-1，蛋白量用微量Lowry法測(cè)定，最后用下式算出每克蛋白的受體pmol數(shù)：受體密度=(測(cè)定管脈沖值-非特異性結(jié)合管脈沖值)/（測(cè)量效率×配基比活度×標(biāo)本蛋白）。其中測(cè)量效率（75%）和配基比活度0.6均為常數(shù)。1.4  白介素5(IL-5)、白介素12(IL-12)的測(cè)定：取哮喘患者外周靜脈血，肝素抗凝。

8、IL-5測(cè)定采用固相酶放大敏感免疫法(EASIA),操作參照試劑盒(Medgenix Diagnostics S.A.，Belgium)說(shuō)明進(jìn)行。1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：各組間受體含量差異及IL-5、IL-12含量差異顯著性檢驗(yàn)用方差分析。用配對(duì)t檢驗(yàn)檢測(cè)治療前后受體含量及IL-5、IL-12含量差異。資料的整理及統(tǒng)計(jì)分析由SPSS軟件處理。P0.05，P0.01為差異有顯著性。2  結(jié)  果2.1  健康對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞受體密度比哮喘各組顯著升高(P<0.01)。沙丁胺醇組和聯(lián)合用藥組治療后受體密度較治療前下降顯著(P<0.01)。溴化異

9、丙托品組和茶堿組治療前后受體密度變化不顯著。見(jiàn)表1。表1  各組治療前后外周血淋巴細(xì)胞受體密度比較略      2.2  健康對(duì)照組血清IL-5比哮喘各組顯著低(P<0.01)，血清IL-12比哮喘各組顯著高(P<0.01)。哮喘各組治療后IL-5均比治療前顯著降低(P<0.01)，哮喘各組治療后IL-12均比治療前顯著升高(P<0.01)。見(jiàn)表2。表2  各組治療前后血清IL-5和IL-12含量比較略     3  討  論

10、60;    Szentivanyi首先提出了哮喘發(fā)病的受體阻斷學(xué)說(shuō)2,許多作者利用配基結(jié)合法證實(shí)哮喘病人外周血淋巴細(xì)胞中受體數(shù)目明顯減少,且與疾病的嚴(yán)重性相關(guān)。本研究結(jié)果表明,哮喘患者受體含量明顯低于健康對(duì)照者,與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致。     受體激動(dòng)劑是治療支氣管哮喘發(fā)作最有效的藥物3，它能迅速控制癥狀。長(zhǎng)期、高劑量、常規(guī)吸入激動(dòng)劑是不合適的，甚至是有害的，長(zhǎng)期應(yīng)用激動(dòng)劑，可引起受體下調(diào)，降低控制哮喘的能力4。研究表明，外周血淋巴細(xì)胞受體密度與肺組織受體密度呈正相關(guān)，因此前者可視為后者的間接指標(biāo)5。哮喘患

11、者長(zhǎng)期應(yīng)用激動(dòng)劑治療后，循環(huán)中的中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞受體密度下降，導(dǎo)致療效減低。本研究的結(jié)果也證實(shí)長(zhǎng)期應(yīng)用沙丁胺醇后受體下調(diào)。      對(duì)應(yīng)用受體阻斷藥后誘發(fā)的支氣管痙攣，溴化異丙托品可收到平喘療效。而應(yīng)用膽堿能激動(dòng)劑后的支氣管痙攣激動(dòng)劑效果差6，這其中原因未明，可能與受體和M受體間相互作用有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，應(yīng)用溴化異丙托品后受體密度無(wú)顯著變化。這表明溴化異丙托品治療哮喘與受體無(wú)關(guān)，并不能上調(diào)受體。本研究中，溴化異丙托品與沙丁胺醇合用后受體仍有下降。這表明雖然溴化異丙托品與受體激動(dòng)劑合用有協(xié)同作用，但作用機(jī)理并不是拮抗受體激動(dòng)劑的受體下調(diào)

12、作用。溴化異丙托品與受體激動(dòng)劑聯(lián)合應(yīng)用起協(xié)同作用，可增強(qiáng)療效1。有研究顯示哮喘氣道M受體亢進(jìn)而受體下調(diào)7，溴化異丙托品與受體激動(dòng)劑聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)療效可能與糾正M受體/受體失衡有關(guān)。      本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘患者血漿中IL-5升高，IL-l2降低，表明哮喘中存在Th亞群功能失衡，Th2細(xì)胞功能亢進(jìn)。Th1/Th2細(xì)胞失衡可能是支氣管哮喘發(fā)病中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，或始動(dòng)因素。Th1和Th2細(xì)胞中某一亞群功能亢進(jìn)，另一亞群功能將降低，引起異常免疫應(yīng)答。哮喘患者免疫應(yīng)答的平衡被破壞，使Th2亢進(jìn)，Th1功能低下。Th1/Th2功能失衡介導(dǎo)了哮喘IgE依

13、賴的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)及嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)為主的慢性氣道炎癥。哮喘被認(rèn)為是T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫紊亂8。      本研究發(fā)現(xiàn)溴化異丙托品治療后血清IL-5和IL-12有顯著變化，表明M受體阻斷后對(duì)體內(nèi)炎性介質(zhì)釋放有影響，致Th2類介質(zhì)起上調(diào)作用而對(duì)Th1類介質(zhì)起下調(diào)作用，能糾正Th1/Th2功能失衡，有氣道抗炎作用，但其具體的機(jī)制尚不明。    本研究中，應(yīng)用沙丁胺醇后血清IL-5降低而IL-12升高，與治療前比較差異顯著，這表明受體激動(dòng)劑能調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)的釋放。盡管長(zhǎng)期應(yīng)用受體激動(dòng)劑會(huì)導(dǎo)致受體下調(diào)，但這并不影響其抗炎作用。

14、60;     應(yīng)用茶堿后受體的變化不顯著，但同樣能升高IL-12和降低IL-5，調(diào)節(jié)Th亞群功能失衡，這表明茶堿類藥物治療哮喘與受體的變化無(wú)關(guān)，其機(jī)理與調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)的釋放有關(guān)。      綜上所述，長(zhǎng)期應(yīng)用2受體激動(dòng)劑會(huì)導(dǎo)致受體下調(diào)，長(zhǎng)期應(yīng)用溴化異丙托品和茶堿對(duì)受體無(wú)影響。溴化異丙托品、2受體激動(dòng)劑和茶堿都能抑制Th2類細(xì)胞因子的過(guò)度分泌，調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞群功能失衡。聯(lián)合應(yīng)用不同作用機(jī)理的支氣管擴(kuò)張藥可能具有協(xié)同作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Rodrigo G, Rodrigo C, Burscht

15、in O. A meta-analysis of the effects of ipratropium bromide in adults with acute asthma. Am Med，1999，107:363-702 Szentivanyi A. The beta adrenergic theory of the atopic abnormity in bronchia asthmaJ Allergy,1968,42:203.3 Godfrey S, Bar-Yishay E. Exercise-induced asthma. Respir Med，1993，87:331-44.4 S

16、ears MR, Taylor DR, Print CG, et al. Regular inhaled beta-agonist treatment in bronchial asthma. Lancet，1990，336:1391-65 Tan KS, Grove A, Cargill RI, et al. Effects of inhaled fluticasone propionate and oral prednisolone on lymphocyte beta 2-adrenoceptor function in asthmatic patients. Chest，1996，109(2):343-7.6 Wills-Karp M, Gilmour MI. Increased cholinergic