山莨菪堿對創(chuàng)傷性肺損傷細胞因子及其mRNA表達的影響

1、    山莨菪堿對創(chuàng)傷性肺損傷細胞因子 及其mRNA表達的影響        【摘要】目的研究山莨菪堿(654-2)對創(chuàng)傷性急性肺損傷(ALI)家兔血漿中腫瘤壞死因子-(TNF-)、白細胞介素-6(IL-6)的含量及其在內臟組織中mRNA表達的影響。方法用ELISA和RT-PCR方法測定24只大耳白兔血漿中TNF-、IL-6的含量及其在內臟組織中mRNA的表達。結果創(chuàng)傷性ALI家兔與正常組比較，血漿中TNF-、IL-6的含量升高(P0.05)，內臟組織中TNF-、I

2、L-6 mRNA的表達顯著增多(P0.01)。654-2治療后明顯降低ALI家兔血漿中TNF-、IL-6的含量(P0.05)，抑制內臟組織TNF-、IL-6 mRNA的表達(P0.05)。結論654-2能有效抑制ALI家兔多種組織TNF-、IL-6 mRNA表達，降低血漿中TNF-、IL-6的含量?！娟P鍵詞】山莨菪堿；急性肺損傷；腫瘤壞死因子-；白細胞介素-6；基因表達 Significance of anisodamine on cytokine activity and the expression of cytokine mRNA in traumatic acute lung inju

3、ryYIN Wen*，LIANG Jihe, HU Xiaoming，et al.（*Departement of Emergency,XinJing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, China）【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of Anisodamine on contents of TNF-、IL-6 in plasma and their mRNA expression in lung、 liver、 heart and kindney

4、 tissues of traumatic acute lung Injury(ALI).MethodsELISA and RT-PCR were used to detect contents of TNF-、IL-6 in plasma and their mRNA expression in lung、liver、heart and kidney tissues of traumatic ALI rabbits.ResultsAs compared with normal group, the contents of TNF-,IL-6 in plasma(P0.05) and thei

5、r mRNA expression in tissues (P0.01) significantly increase. Anisodanine treatment can significantly decrease the contents of TNF-、IL-6 in plasma (P0.05),inhibit the expression of TNF-、IL-6 mRNA in lung、liver、heart and kidney tissues of traumatic ALI rabbits(P0.05).ConclusionAnisodamine seems to be

6、effective in decreasing contents of TNF-、IL-6 in plasma and their mRNA expression in multiple organ and tissues.【Key words】 Anisodamine;Acute lung injury;Tumor necrosis factor-;Interleukin-6;Gene expression我們采用復制創(chuàng)傷性急性肺損傷(acute lung injury,ALI)模型1，觀察山莨菪堿(654-2)治療前后血漿中腫瘤壞死因子-(TNF-)、白細胞介素-6(IL-6)含量及上述細

7、胞因子在肺、肝、心、腎組織中mRNA表達的變化，探討654-2對創(chuàng)傷性ALI的保護作用及可能機制。材料與方法1.動物分組：健康大耳白兔(本校動物中心提供)24只，6月齡，體重2.02.5 kg，雌雄不限，3%戊巴比妥25 mg/kg體重靜脈麻醉，隨機分為3組：(1)創(chuàng)傷模型組(M)8只，兔仰臥固定于撞擊臺上，以沖擊速度5.7 m/s，力75.8 N/cm2沖撞能量約204 J使胸壁壓縮40%，約3 cm，兔非撞擊側胸壁被硬板支撐，兔體只可擠壓，不能移位，隨后靜脈注射大腸桿菌內毒素50 g/kg體重。(2)654-2治療組(T)8只，按M組制成創(chuàng)傷性ALI，即刻給予654-2 2 mg/kg體重

8、靜注，隨即以每小時1 mg/kg體重靜脈維持。(3)正常對照組(C)8只，無特殊處理。2.觀察指標與方法：(1)TNF-、IL-6含量：各組動物均于0、0.5、1、1.5、2、4、6、12 h經頸動脈采血用ELISA方法進行TNF-、IL-6含量測定(TNF-、IL-6試劑盒由我校免疫教研室提供，按說明書操作)。(2)TNF-、IL-6 mRNA表達：各組動物于創(chuàng)傷后12 h處死，留取肺、肝、心、腎組織。各組織總mRNA提取采用Chomczyniski建立的酸酚-氯仿非超速離心一步法2(試劑盒為美國Promega產品)。采用RT-PCR技術對肺、肝、心、腎組織mRNA進行擴增。25個循壞后行常

9、規(guī)瓊脂糖電泳，以-actin為內參對照進行像分析，結果以各組的校正光密度值與-actin的校正光密度值之比值表示。3.統(tǒng)計學方法：t檢驗。結果表1組別撞擊后時間(h)00.511.524612M0.22±0.100.67±0.22*1.06±0.26*#1.51±0.28*#1.01±0.31*#0.37±0.180.31±0.120.25±0.08T0.20±0.090.37±0.110.47±0.10*0.49±0.09*0.46±0.12*0.37±

10、0.120.34±0.110.34±0.10C0.18±0.090.20±0.100.19±0.100.18±0.120.19±0.110.22±0.110.24±0.110.20±0.12     注：與C組比較，*P0.01，*P0.05；與T組比較，#P0.05表2類同 表2組別撞擊后時間(h)00.511.524612M0.14±0.090.19±0.100.27±0.120.31±0.080.49±

11、;0.12*#0.50±0.13*#0.60±0.21*0.47±0.12*#T0.18±0.090.22±0.120.18±0.100.22±0.090.19±0.080.25±0.080.55±0.12*0.22±0.08C0.14±0.060.19±0.060.18±0.070.17±0.070.17±0.120.14±0.070.17±0.090.14±0.08   &

12、#160; 表3組別TNF-IL-6肺肝心腎肺肝心腎M1.70±0.22*1.60±0.30*0.80±0.22*1.18±0.42*1.40±0.08*1.30±0.30*0.80±0.33*0.90±0.18*T1.30±0.30*#1.20±0.23*#0.60±0.18*#0.93±0.39*#1.03±0.18*#1.01±0.19*#0.50±0.23*#0.40±0.28#C0.75±0.280.71±

13、0.170.36±0.400.52±0.140.75±0.350.73±0.230.36±0.300.41±0.22     注：與C比較,*P0.05,*P0.01;與M比較,#P0.01,#P0.01 討論本實驗模型組動物血漿中TNF-含量于傷后0.5 h開始升高，1.5 h達峰值，2 h開始下降，612 h降到對照組水平。而IL-6在創(chuàng)傷后2 h開始升高，46 h達峰值，之后逐漸下降，12 h仍明顯高于對照組，TNF-較早于IL-6在血漿中出現(xiàn)且升幅較大，提示它們的因果關系。TNF-可能是

14、ALI的啟動因子，啟動了IL-6、IL-8等細胞因子群，使合成、分泌增多，從而擴大了級聯(lián)反應。能誘導PMN在肺等組織聚集、粘附、釋放IL-6和IL-8等炎性介質，引起SIRS進而導致多器官功能衰竭綜合征，說明ALI是MODS的一個重要部分。模型組動物肺、肝、心、腎RT-PCR結果顯示TNF-、IL-6 mRNA表達明顯上調，提示由內源性細胞因子作為致病遞質在多器官功能衰竭綜合征的發(fā)病過程中起關鍵性作用，說明TNF-、IL-6參與了創(chuàng)傷后內臟功能損害的發(fā)生發(fā)展過程。本實驗結果顯示，654-2能顯著降低模型組血漿中TNF-、IL-6的含量及幅度，不同程度抑制它們在肺、肝、心、腎等組織中的表達?？梢?，創(chuàng)傷性ALI早期應用654-2治療可能有助于減輕TNF-、IL-6等細胞因子mRNA的過量表達、產生及其介導的急性炎癥反應，避免創(chuàng)傷性ALI的發(fā)生、發(fā)展。基金項目：國家自然科學基金資助項目(39770736)作者單位：尹文（710032西安，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院急診科）虎曉岷（710032西安，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院急診科）張松濤（710032西安，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院急診科）蔡春（710032西安，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院急診科）梁繼河（胸心外科）張金山（第四軍醫(yī)大學基礎