實(shí)驗(yàn)八 絨毛細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察

1、實(shí)驗(yàn)八  絨毛細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 初步掌握絨毛細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察。2. 了解人類染色體的形態(tài)和計(jì)數(shù)分析方法。實(shí)驗(yàn)原理人類細(xì)胞染色體標(biāo)本制備常用的材料為外周血淋巴細(xì)胞、培養(yǎng)的體細(xì)胞和骨髓細(xì)胞等。而絨毛組織細(xì)胞具有活躍的增殖力，取材后不需經(jīng)過體外培養(yǎng)的無菌處理，此時(shí)用有絲分裂阻斷劑秋水仙素處理細(xì)胞，可使正在分裂的細(xì)胞停止在中期，再經(jīng)低滲、固定等處理，便可得到較多可供分析的中期染色體。絨毛細(xì)胞是在受精卵分裂胚胎發(fā)育過程中形成的，其遺傳物質(zhì)與胎兒相同。在孕4555天絨毛細(xì)胞具有較高的分裂活性，可用其自然分裂細(xì)胞制備染色體標(biāo)本，具有早期、快速、簡便和準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。適用

2、于臨床的細(xì)胞遺傳學(xué)的產(chǎn)前診斷研究等。實(shí)驗(yàn)用品1. 材料：絨毛組織。2. 器材：顯微鏡、離心機(jī)、恒溫水浴箱、眼科鑷子、眼科剪子、5ml離心管、吸管、試管架、玻璃筆、載玻片、吸水紙。3. 試劑：培養(yǎng)皿、rpmi-1640培養(yǎng)液、秋水仙素（2µg /ml）、0.075mol/l kcl溶液、無菌生理鹽水、檸檬酸鈉、60%冰乙酸、甲醇冰乙酸（31）固定液、giemsa染液、磷酸緩沖液（ph6.8）。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法1. 秋水仙素處理：選取分芽多、末端粗鈍的絨毛枝23枝剪下、用生理鹽水漂洗、再將絨毛枝放入含有終濃度2µg /ml秋水仙素的5ml rpmi-1640培養(yǎng)液或hanks液的

3、離心管中、37溫育處理約30分鐘。2. 吸去培養(yǎng)液，加入37預(yù)熱的1%檸檬酸鈉和0.075mol/l kcl（11）低滲液4ml 37下處理1015分鐘。3. 加入1ml固定液混勻后吸去上清液。4. 加入3ml固定液固定30分鐘，（甲醇冰乙酸31）。5. 吸去上清液，加60%冰乙酸1ml解離1.52分鐘再加入3ml甲醇，處理2分鐘，吸出絨毛枝。6. 以800r/min離心5分鐘，棄上清液。7. 加5滴固定液，混勻制成細(xì)胞懸液，冰濕片滴片、干燥。8. giemsa染色68分鐘。9. 鏡下觀察25個(gè)分裂相并進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)及性別鑒定。注意事項(xiàng)1. 絨毛組織取出后應(yīng)立即放入固定液中。2. 觀察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)選擇成株的絨毛絲或分散的合體細(xì)胞進(jìn)行檢查。3. 可記數(shù)細(xì)胞應(yīng)是胞漿、胞核著色清晰，如標(biāo)本胞漿不透明或胞核腫脹，可能是由于：（1）酒精濃度不夠，脫水不徹底；（2）酸化、堿化不當(dāng)；（3）細(xì)胞本身已退變。4. 胞核染色不正常，而呈藍(lán)色或黑色，則是染色時(shí)間過長。5. 如果胞漿著色不鮮艷，可能是染液配制不合適。實(shí)驗(yàn)報(bào)告與思考題繪圖 繪制染色體核型圖。思考題1