結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支造成心肌缺血模型的實(shí)驗(yàn)研究

1、現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)2011年第38卷第10期ModernPreventiveMedicine，2011，Vol.38，NO.10·1899·文章編號(hào)：1003-8507（2011）10-1899-02中圖分類號(hào)：R542.2；R-332文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A【實(shí)驗(yàn)技術(shù)及其應(yīng)用】結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支造成心肌缺血模型的實(shí)驗(yàn)研究王旺，吳曉華，黃文摘要：目的研究改進(jìn)建立大鼠急性心肌梗死模型的方法，提高造模效率并驗(yàn)證該模型的穩(wěn)定性。方法分別采用傳統(tǒng)方法（方法一）和改進(jìn)方法（方法二）制作模型，用胸壁損傷大小、血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、心肌梗死面積及28d存活率來評(píng)價(jià)兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。結(jié)果改進(jìn)的模型優(yōu)于傳統(tǒng)

2、方法，且對(duì)心臟血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)沒有顯著影響。結(jié)論結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支造成心肌缺血模型穩(wěn)定，可應(yīng)用于心肌缺血相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究中。關(guān)鍵詞：左冠狀動(dòng)脈前降支；心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?；大鼠；?shí)驗(yàn)研究EXPERIMENTALSTUDYONLIGATINGLEFTANTERIORDESCENDINGARTERYOFRATSTOFORMULATINGMYOCARDIALISCHEMIAMODELWANGWang，WUXiao-hua，HUANGWen.（NanobiomedicalTechnologyandMembraneBiologyresearchcenterofSichuanUniversity，Chengd

3、u610041，China）Abstract：ObjectiveTheexperimentaimedtoputforwardanewmethodinthepreparationformodelofmyocardialis-chemiainrats.MethodsThenewandthetraditionalmethodswerecomparedbystudyingtheinjuryinsurgery，hemodynam-ics，areaofinfarction，recoveryofautonomousrespirationpostsurgeryandsurvivalratein28dayspo

4、stsurgery.ResultsThenewmethodtoprepareforacuteMImodelinratsisbetterthanthetraditionalandcouldbeusedinstudyingthepathophys-iologyofcardiology.ConclusionThenewmethodisprioritytothetraditionalone.Keywords：Ligatingleftanteriordescendingartery；Acutemyocardialischemia；Rats；Experimentalstudy左冠狀動(dòng)脈前降支（LAD）結(jié)扎

5、造成急性心肌梗死是最常用的大鼠急性心肌梗死的造模方法，也是研究心肌缺血損傷公認(rèn)的模型1，2。但在暴露出心臟的手術(shù)路徑中，不同的方式，可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的過程和結(jié)果產(chǎn)生一定的影響?；诖?，我們采用文獻(xiàn)報(bào)道開胸方法（方法一）與本實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)開胸方法（方法二）兩種模型。以組織損傷大小，心臟血流動(dòng)力學(xué)，超聲心動(dòng)圖，心臟梗死面積以及4h及28d存活率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。比較兩種造模方法優(yōu)缺點(diǎn)，并分析總結(jié)制作大鼠急性心肌梗死模型的常見注意要點(diǎn)。進(jìn)手術(shù)方法制作大鼠急性心肌梗死模型。設(shè)定呼吸機(jī)參數(shù)為：呼吸頻率為60次min，潮氣量為10mlkg體重，吸呼比為21，吸入氣體為95%氧氣與5%二氧化碳的混合氣體。大鼠采用3%戊巴

6、比妥鈉腹腔注射（50mgkg）麻醉后，采用不同手術(shù)方案，暴露心臟上左冠狀動(dòng)脈前降支（LAD）的結(jié)扎點(diǎn)進(jìn)行心肌缺血實(shí)驗(yàn)。1.2.2考察指標(biāo)肌肉損傷大小血流動(dòng)力學(xué)血清LDH含量反應(yīng)肌肉損傷大小。術(shù)左心室插管4，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血流動(dòng)力學(xué)指后6h肝門靜脈取血3ml，按試劑盒操作說明測(cè)定LDH含量。標(biāo)：左室收縮壓（LVSP），左室壓最大上升和下降速率（±dp1材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用雄性SPF級(jí)SD大鼠（成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公dtmax），左室舒張壓（LVDP），左室舒張末期壓（LEVDP），等容舒張期左室壓下降的時(shí)間常數(shù)（T），心率（HR）。司提供），體重（240±20）g。分

7、別使用傳統(tǒng)手術(shù)方法3和改基金項(xiàng)目：國家“十一五”科技支撐計(jì)劃課題（2006BAD01B03）；國家自然科學(xué)基金（20972105）；四川省科技支撐（2008SZ0024）作者簡(jiǎn)介：王旺（1982-），男，在讀碩士，研究方向：心急缺血再灌注損傷相關(guān)研究通訊作者：黃文，博士生導(dǎo)師，研究方向：天然產(chǎn)物藥物化學(xué)方向，1.2.3超聲心動(dòng)圖探頭置于其左胸，在取得滿意的胸骨旁左心室短軸二維圖像后，在乳頭肌水平將M型取樣線垂直于室間隔和左心室后壁獲得M型超聲心動(dòng)圖，根據(jù)ASE推薦法測(cè)定舒張末期及收縮末左心室內(nèi)徑（EDD、ESD）及室間隔和后壁厚度。應(yīng)用Teichholtz公式法計(jì)算左心室射血分?jǐn)?shù)（EF）及左心

8、室短軸縮短分?jǐn)?shù)（FS）5。每組原始數(shù)據(jù)取連續(xù)3個(gè)心動(dòng)周期的平均值。E-mail：huangwen作者單位：四川大學(xué)納米生物醫(yī)學(xué)技術(shù)與膜生物學(xué)研究所，四川大學(xué)華西醫(yī)院腫瘤生物治療國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川大學(xué)再生醫(yī)學(xué)中心，四川大學(xué)華西醫(yī)院中藥藥理研究室實(shí)驗(yàn)室，成都，61004.5心肌梗死面積伊文思藍(lán)和TTC雙重染色6，確定梗死統(tǒng)計(jì)成功完成建模，觀察大面積比例。24h及28d大鼠存活率·1900·現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)2011年第38卷第10期ModernPreventiveMedicine，2011，Vol.38，NO.10鼠的24h及28d大鼠存活情況。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所

9、有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0，P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。22.1結(jié)果血清LDH含量方法二組血清LDH的含量低于方法一組。各組血清LDH含量見表1。! #() ! *+$ ," $" " "% " " & $圖1各實(shí)驗(yàn)組大鼠術(shù)后28d存活情況3討論心肌梗死是威脅人類死亡的重要原因之一。同時(shí)，心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停茄芯咳祟愊嚓P(guān)疾病病理生理機(jī)制、新藥的研發(fā)評(píng)價(jià)，疾病的診斷和治療一個(gè)重要的工具。提高造模的可重復(fù)性和穩(wěn)定性，延長(zhǎng)模型動(dòng)物存活率是建立心肌梗死動(dòng)物模型的核心問題。本研究采用與傳統(tǒng)模型進(jìn)

10、行比較，以手術(shù)損傷大小、心臟血流動(dòng)力學(xué)、超聲心動(dòng)圖、心臟梗死面積以及4h及2.2血流動(dòng)力學(xué)與超聲心動(dòng)圖結(jié)扎LAD后3h，心臟射血功能顯示降低。無論是超聲心28d存活率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，來評(píng)價(jià)改進(jìn)模型的優(yōu)越性。乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶，廣泛存在于真核細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，在機(jī)械外力等損傷細(xì)胞后可釋放入血7。改進(jìn)模型血清動(dòng)圖參數(shù)還是左室壓最大上升速率均顯示心臟收縮功能的降低。見表2。n = 10 #$% #$ ()* +,234" & ! " "LDH的水平顯著低于傳統(tǒng)模型組，由此推測(cè)改進(jìn)手術(shù)操作對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的打擊較小。同時(shí)，縮小的開胸切口節(jié)約了手術(shù)時(shí)間，同時(shí)對(duì)外層皮膚切口縫

11、合也能使胸腔良好密閉。此外，兩種手術(shù)方法最大的區(qū)別在于開胸的方式。改進(jìn)手術(shù)方法由于不需要在心臟上操作，因此對(duì)心電圖，心肌梗死面積，血流動(dòng)力學(xué)的結(jié)果不會(huì)產(chǎn)生直接影響。因此，可以顯著提高大鼠的28d存活率。本研究改進(jìn)了一種較為穩(wěn)定的大鼠急性心肌缺血損傷的模型。此手術(shù)通過方法減少手術(shù)打擊，縮短手術(shù)時(shí)間，可操作性強(qiáng)，從而延長(zhǎng)模型動(dòng)物存活率，并有望成為急性心肌缺血損傷的新模型。! " ! " !ÁÁÁÂÂÂ& "ÁÂÁÂ-./01234 5& & 67

12、89-.:012.3心肌梗死面積結(jié)扎缺陷后的3h心臟已經(jīng)在缺血區(qū)發(fā)生明顯的梗死，占參考文獻(xiàn)：1XiaoqiaoZ，RongM，ZhigangY，etal.Protectiveeffectofulinas-缺血區(qū)面積的近30%。而方法一與方法二對(duì)于心肌梗死面積的大小并沒有影響。此外，AAR/左心室面積在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組中較一致的數(shù)據(jù)顯示造模尤其是選擇結(jié)扎點(diǎn)的成功。見表3。tatinagainstischemia-reperfusioninjuryinratsmallboweltrans-plantationJ.TransplantProc，2004，36（5）：1564-1566.2孫敬方.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方

13、法學(xué)M北京：人民衛(wèi)生出版社，20013693梁子敬，陳力華.制備大鼠心肌缺血模型操作對(duì)心電圖的影響 3 3.5 h ×10n = 10J.現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志，1996，2（3）：182-184.4李亞輝，程顯聲，何建國.右頸總動(dòng)脈逆行插管測(cè)量大鼠左心室壓J.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志，2001，9（9）：191-201.5BurrellLM，ChanR，PhillipsPA，CalafioreP，TonkinAM，ÁÂJohnstonCIValidationofanechocardiographicassessmentofcar-diacfunctionfollowingmoderatesizemyocardialinfarctionintheratJ.ClinExpPharmacolPhysiol，1996，23：570-572物模型J.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2005，22（7）：876-878.!" "#$%&( "