蘆薈凝膠對大鼠Ⅱ度放射性皮炎創(chuàng)面愈合及表皮生長因子、堿性成纖

1、    蘆薈凝膠對大鼠度放射性皮炎創(chuàng)面愈合及表皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子表達的(1)    目的 探討蘆薈凝膠對大鼠度放射性皮炎創(chuàng)面愈合及表皮生長因子(EGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)表達的影響。方法 建立大鼠度放射性皮炎模型，制備蘆薈凝膠。實驗動物分兩組：自然愈合組(對照組)；蘆薈凝膠組(實驗組)。通過免疫組化染色及圖像分析，測定傷后2、6、10、18、24d的創(chuàng)面愈合率及創(chuàng)面組織中EGF、bFGF的表達。結果 創(chuàng)面愈合率：蘆薈凝膠組在10、18、24d各時相點的創(chuàng)面愈合率較自然愈合組高，差異

2、有顯著性(P<0.05)，尤以24d時相點差異最明顯(P<0.01)。EGF的表達：蘆薈凝膠組總體的EGF表達量高于自然愈合組，差異有顯著性(P<0.05)；蘆薈凝膠組傷后10、18d時EGF表達高于自然愈合組，差異有顯著性意義(P<0.05)。bFGF的表達：蘆薈凝膠組總體的bFGF表達量高于自然愈合組，差異有顯著性(P<0.05)；蘆薈凝膠組傷后18、24d時bFGF表達高于自然愈合組，差異有顯著性意義(P<0.05)。結論 蘆薈凝膠外涂對大鼠度放射性皮炎創(chuàng)面的愈合有促進作用，其機制可能與促進EGF、bFGF的表達有關。關鍵詞：蘆薈；度放射性皮炎；表皮生

3、長因子；堿性成纖維細胞生長因子Effect of aloe gel on the wound healing rate and the expression of EGFand bFGF of radiative dermatitis erythematase in rats ABSTRACT: Objective To study the effect of aloe gel on the wound healing rate and the expression of epidermal growth factor (EGF) and basic fibroblast growth fac

4、tor (bFGF) of radiative dermatitis erythematase in rats. Methods The rat models of radiative dermatitis erythematase (vesicular reaction) were established. With the normal healing group as the control group, aloe gel was used on the radiative dermatitis erythematase of rats in the experimental group

5、. At the 2, 6, 10, 18 and 24d postinjury, the protein of EGF and bFGF were stained immunohistochemically and analysed; the wound healing rate was also measured. Results The wound healing rate: the wound healing rate of experiment groups was significantly higher than that of the control group at 10th

6、 day and 18th day (P<0.05). At the 24th day postinjury, there is significant difference between the two groups(P<0.01); Expression of EGF: the total expression of EGF in experiment groups was significantly higher than that of control groups (P<0.05), so was at 10th day and 18th day. Express

7、ion of bFGF: the total expression of bFGF experiment groups was significantly higher than that of control groups. The significant difference was also found at 18th day and 24th day (P<0.05). Conclusion The aloe gel can promote the wounds of radiative dermatitis erythematase healing significantly.

8、 The expression of EGF and bFGF may be mechanism of accelerating the wounds healing.KEY WORDS: aloe; dermatitis erythematase; EGF; bFGF在腫瘤放射治療中，放射性皮炎是最常見的不良反應之一1，影響著治療的順利完成，故防治放射性皮炎的藥物備受關注。目前國內(nèi)外對蘆薈凝膠抗放射性皮炎的臨床研究較多，結果是肯定的，但機理性基礎研究較少。我們采用免疫組織化學方法和圖像分析技術，檢測表皮生長因子(epidermal growth factor, EGF)、堿性成纖維細胞生長因

9、子(basic fibroblast growth factor, bFGF)在大鼠度放射性皮炎組織中的表達，探討蘆薈凝膠防治放射性皮炎的機理。1 材料與方法1.1 主儀器和試劑 兔抗人EGF單克隆抗體(武漢博士德生物制品公司)，兔抗人bFGF單克隆抗體(Santa Cruz Inc.)；加速器 CL1800(美國制造)，Q550CW 圖像信號采集與分析系統(tǒng)(德國制造)。1.2 蘆薈凝膠的制作 美國蘆薈1株，購于西安植物園。取新鮮蘆薈葉200g，洗凈，在粉碎機中粉碎成漿狀，密封包存。每4d制作1次。1.3 大鼠10%度放射性皮炎模型的建立 采用6Mev電子線，吸收計量率400cGy/min ，

10、照射距離1m ，吸收劑量40Gy，一次照射，對大鼠裸露的背部產(chǎn)生10%度放射性皮炎。1.4 實驗動物及分組 清潔SpragueDawley大鼠55只，體質量(220±20)g ，均雄性，由西安交通大學醫(yī)學院動物中心提供。照射后的大鼠隨機分成兩組：對照組(自然愈合組)25只，實驗組(蘆薈凝膠組)25只。實驗組鮮蘆薈凝膠外涂輻射傷口區(qū)，每日兩次。對照組有感染情況時，用抗生素外涂。另取5只大鼠進行假照射，作為正常對照組。輻射傷后2、6、10、18、24d各活殺大鼠5只，正常對照組5只大鼠2d活殺。首先將創(chuàng)面描記在半透明紙上，再取輻射傷口區(qū)的中間組織1cm×1cm大小，20%(體積

11、分數(shù))甲醛固定，保存。1.5 創(chuàng)面愈合程度表示 將創(chuàng)面描記在半透明紙上，再以此為模板，將質地均勻的硬紙片剪成圖樣大小，以硬紙片重量間接地表示創(chuàng)面面積大小。創(chuàng)面愈合率(%)=(開始照射面面積未愈合創(chuàng)面面積)/開始照射面面積。 1.6 免疫組化及圖像分析 EGF、bFGF以細胞黃染為陽性。從每張免疫組化染色切片中隨機選取5個視野，輸入Q550CW 圖像信號采集與分析系統(tǒng)測量陽性細胞的平均灰度值，以此反映傷口局部EGF、bFGF的表達量。陽性細胞的平均灰度值與EGF、bFGF的表達量成反比。1.7 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)儲存于計算機內(nèi)，用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，對實驗結果進行t檢驗，以P<0.

12、05為差異有顯著性。2 結果2.1 創(chuàng)面愈合率比較 實驗組在10、18、24d時相點創(chuàng)面愈合率高于對照組,兩組間差異具有顯著性(P<0.05)，且24d時相點差異最為顯著(P<0.01，表1)。2.2 EGF的表達 實驗組EGF在2、6d時相點表達增高不明顯，在10、18d時相點表達明顯增高，兩組間差異有顯著意義(P<0.05)，24d時相點又接近對照組(表2)。實驗組EGF的總體灰度值(128.81±13.27)低于對照組(131.71±9.46)，即EGF總體表達高于對照組，差異有顯著意義(t=2.37,P<0.05)。  &

13、#160;         作者：劉小平，盧金利，吳素歌，楊芳，李明眾【關鍵詞】表皮生長因子摘目的探討蘆薈凝膠對大鼠度放射性皮炎創(chuàng)         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡上收集整理餅投稿至本站的，論文版權屬原作者，請不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學習之用，否者后果自負，如果此文侵犯您的合法權益，請聯(lián)系我們。    2.3 bFGF的表達 實驗組bFGF表達稍遲于

14、EGF，在2、6、10d時相點表達增高不明顯，在18、24d時相點表達明顯增高,兩組間差異有顯著意義(P<0.05，表3)。實驗組bFGF的總體灰度值(123.82±10.58)低于對照組(140.31±8.29)，即bFGF的總體表達高于對照組，差異有顯著意義(t=2.25，P<0.05)。表1 創(chuàng)面愈合率的比較（略）Table 1 The wound healing rate at different time表2 創(chuàng)面各時相點EGF表達情況(灰度值)（略）Table 2 The expression of EGF at different time表3 創(chuàng)

15、面各時相點bFGF表達情況(灰度值)（略）Table 3 The expression of bFGF at different time3 討論創(chuàng)傷愈合的組織修復過程是由炎細胞反應、修復細胞反應、細胞外基質反應和細胞因子(生長因子)作用等幾個基本環(huán)節(jié)(素)相互網(wǎng)絡聯(lián)動而實現(xiàn)的。關于電離輻射創(chuàng)傷愈合延緩的研究已有不少文獻報道，所提出的基本原因可概括為：炎癥反應削弱，細胞增殖受抑，生長因子表達減少，細胞外基質反應減弱，局部組織缺血缺氧，傷部并發(fā)感染、出血、水腫等。蘆薈的抗輻射作用受到學者的重視，同時蘆薈的抗輻射作用也越來越被人們應用在日常生活及臨床中,但其作用機理尚不清楚。表皮生長因子(EGF)

16、為有絲分裂刺激原，可以加快細胞分裂，促進增殖，還可以改變細胞的趨化性，增加細胞遷移。本實驗結果顯示，兩組EGF蛋白陽性表達的細胞分布一致，主為巨噬細胞、真皮成纖維細胞、毛囊上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞，這些部位是創(chuàng)面修復細胞的增殖活躍部位，與文獻報道相一致2。蘆薈凝膠組創(chuàng)面EGF的表達量于傷后10d達到高峰，早于對照組，而且EGF的表達總量明顯高于對照組的表達總量，提示蘆薈促進了EGF的合成和分泌。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)在正常組織中表達很弱，在創(chuàng)傷愈合時明顯增加。本實驗中，對照組與實驗組bFGF蛋白陽性表達的細胞同為巨噬細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞，與文獻報道相一致3。實驗組創(chuàng)面bFGF蛋

17、白陽性表達在傷后18、24d明顯高于對照組，且其表達總量亦明顯高于對照組，提示蘆薈對bFGF的合成和分泌有促進作用。同時，結果還顯示，實驗組創(chuàng)面愈合率的提高在時間上與EGF、bFGF表達增高相一致。研究表明，在皮膚的輻射損傷中內(nèi)源性EGF和 bFGF的合成細胞主是巨噬細胞、成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞等，并借助自分泌和旁分泌方式，參與損傷部位的細胞代謝和增殖，促進創(chuàng)面修復。而輻射引起這些細胞在數(shù)量和功能上的下降是內(nèi)源性EGF和 bFGF減少的主原因，能促使這三種細胞修復和增殖的方法均能提高輻射損傷中內(nèi)源性EGF和 bFGF的合成和分泌46。蘆薈多糖(ACM)能激活巨噬細胞，通過增強誘導型一氧化氮合

18、酶(iNOs)mRNA的表達而增加NO的合成，刺激巨噬細胞分泌細胞因子(IL1、IL6、TNF等)、釋放NO，刺激巨噬細胞表面分子的表達以及引起細胞形態(tài)的改變，從而發(fā)揮其生物活性7。NO不但可以激活巨噬細胞，而且可以調節(jié)血管收縮功能，還具有促進內(nèi)皮細胞的遷移、增殖并影響受損內(nèi)皮細胞的修復等8。皮膚成纖維細胞受到大劑量照射后，細胞釋放超氧陰離子自由基呈顯著增高，其增高與照射劑量呈正相關；細胞超氧化物歧化酶(SOD)活力明顯下降，且與照射劑量呈負相關。這是輻射引起成纖維損傷和凋亡的基礎9。研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)修飾過的MAP不僅可以活化巨噬細胞，而且可以刺激成纖維細胞的生長，預防紫外線輻射導致的免疫抑制10。

19、本實驗結果提示蘆薈凝膠可能通過改善巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞和表皮細胞的數(shù)量和功能，促進內(nèi)源性EGF和 bFGF的合成和分泌，從而加速輻射創(chuàng)面的愈合。參考文獻：1谷銑之，殷蔚伯，劉泰福. 腫瘤放射治療學 M. 北京:北京醫(yī)科大學、中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社, 1993: 691693.2劉毅，鐘曉玲，田文艷. 內(nèi)源性EGF促進深二度燙傷創(chuàng)面愈合的作用機制 J. 西北國防醫(yī)學雜志, 2001, 22(3):214216.3屈紀富，程天民，許霖水,等. 放創(chuàng)復合傷時創(chuàng)傷局部bFGF和NGF含量的變化及意義 J. 中華放射醫(yī)學與防護雜志, 2002, 22(3):158160.4劉發(fā)全.輻射損傷與修復的研究近況 J. 國外醫(yī)學放射醫(yī)學核醫(yī)學分冊, 2000, 24(4):186188.5屈紀富，程天民，許霖水,等. 全身放射損傷對皮膚傷口成纖維細胞增殖的影響 J. 中華放射醫(yī)學與防護雜志，2002, 22(3):152155.6宋述強，程天民，林 遠. 電離輻射對傷口液中細胞因子的影響及苯妥因鈉的作用 J. 第三軍醫(yī)大學