臨床基因檢測實驗室建設(shè)要求

1、如文檔對你有用，請下載支持！臨檢實驗室建設(shè)標(biāo)準與要求一、高通量測序（NGS實驗室簡介1.1 NG弦驗室又叫高通量測序檢測實驗室。NGS1下一代測序技術(shù)（NExtGeneratioSequenciN（W高通量測序技術(shù)的簡稱。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)SANGE惻序（稱為一代測序技術(shù)）革命性的改變，可同時對幾十萬到幾百萬條核酸分子進行序列測定，同時高通量測序使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能,也稱為深度測序（DEEPSEQuENcIN）G。1.2 由于NGSK術(shù)對所檢測的核酸模板進行大量擴增，容易出現(xiàn)實驗室污染導(dǎo)致檢測結(jié)果準確性下降；另外NGSJ術(shù)要求高、影響因素多，實驗過程處理

2、不當(dāng)易導(dǎo)致檢測結(jié)果準確性下降或檢測失敗。因此臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)驗收和規(guī)范化管理是NGSK術(shù)本身需要,也是在臨床上順利應(yīng)用該技術(shù)前提。二、NG弦驗室臨床應(yīng)用的基本條件2.1 必須擁有符合臨檢中心相關(guān)規(guī)定的標(biāo)準NGSS驗室。2.2 檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準NGSS驗室設(shè)置要求：高通量測序儀及配套服務(wù)器；高通量測序檢測試劑盒；通用電腦；自動分析軟件，實驗室樣本信息管理系統(tǒng)等。2.3 檢測人員必須通過專門的技能培訓(xùn)，并獲得省級以上衛(wèi)生計生行政部門頒發(fā)的臨床基因擴增檢驗技術(shù)上崗證書。NGSS驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標(biāo)準化操作程序（SOP、建立系列質(zhì)量管理文件等，確保實驗室日常運行符合國

3、家衛(wèi)生部的要求，確保檢測結(jié)果準確確保實驗室衛(wèi)生安全，確保實驗室長期穩(wěn)定運行。2.4 NGS臨床應(yīng)用必須在無菌無塵環(huán)境下進行操作。三、NG弦驗室建設(shè)基本要求主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。3.2 標(biāo)準的各區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)將檢測過程分成試劑準備、樣本制備、PCFT增和高通量測序四個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個檢測實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。可打開緩沖區(qū)和PCR擴增區(qū)的排風(fēng)

4、扇往外排氣，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。3.3 消毒在每個實驗區(qū)和緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在各區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。3.4 機械連鎖不銹鋼傳遞窗試劑和標(biāo)本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。3.5 地面地面建議使用PVC®材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800MM<800MM接縫需要小于2MM。3.6 照明燈具要選用凈化燈具，能達到便于清洗、不積塵的

5、特點。3.7 平面布局如文檔對你有用，請下載支持！NGS?驗室應(yīng)根據(jù)自己的檢驗項目、所采用的檢測技術(shù)平臺和工作量來決定分區(qū)的多少及各區(qū)域的空間大小，至少具體需要多少個區(qū)，同樣是“個體化”的，以“工作有序、互不干擾、防止污染、報告及時”作為基本原則。四、各項目實驗室建設(shè)標(biāo)準產(chǎn)前篩查與產(chǎn)前診斷（全基因組低拷貝測序技術(shù)）1.實驗室平面圖測序區(qū)文庫擴增 與檢測區(qū)標(biāo)本與文 庫制備區(qū)試劑準備區(qū)手壓力Pa溫度相對濕度如M檢JH由川力工后支藤淀量標(biāo)本與文庫制備區(qū)3.技術(shù)參數(shù)文觥陽與樓涌區(qū)專用走廊緩沖區(qū)+5Pa+一淵序區(qū)一電電廿.而上端附件及w，試劑準冬冬，+15PaJ標(biāo)本與文庫制根/3城主實驗室300LX,其

6、備區(qū)1+10Pa20-25C40%60%1余房間200300LX文庫擴增與檢測區(qū)-5Pa測序區(qū)-10Pa4.分區(qū)功能4.1 試劑準備室主要功能：在NGS±程中使用到的試劑的配制、分裝和保存。4.2 標(biāo)本與文庫制備區(qū)主要功能：血液處理、血漿制備、DNM取、DNAt段化、DNA羊品的純化、DN順度檢測、末端修復(fù)、接頭連接、構(gòu)建樣本的測序文庫。4.3 文庫擴增與檢測區(qū)主要功能：文庫構(gòu)建后的PCRT增與純化、文庫濃度檢測、文庫的混合及混合后的質(zhì)檢分析。4.4 測序區(qū)主要功能：測序模板制備（乳液PCRf磁珠富集回收）、上機測序、數(shù)據(jù)分析、報告審核及發(fā)放。5.儀器配置5.1 試劑準備室主要儀器設(shè)

7、備：加樣器、冰箱、分析天平、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈和超凈工作臺等。5.2 標(biāo)本與文庫制備區(qū)主要儀器設(shè)備：冷凍離心機、微量臺式離心機、掌上三管離心機、渦旋震蕩器、垂直混合儀、移液器、可移動紫外燈、生物安全柜、冰箱、托盤天平、Qubit2.0核酸定量儀、電腦（可連接互聯(lián)網(wǎng)）、條形碼打印機、普通打印機、掃描槍、磁力架等。5.3 文庫擴增與檢測區(qū)主要儀器設(shè)備：PCRZ、QPC股、Qubit2.0核酸定量儀、可移動紫外燈、超凈工作臺、冰箱、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、UPS冰箱、移液器、磁力架等。5.4 測序區(qū)主要儀器設(shè)備：高通量測序儀、PC電腦、打印機、UPS恒溫金屬浴、純水

8、儀、冰箱、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、移液器、超凈工作臺、可移動紫外燈、磁力架、PCRZ等。胚胎植入前遺傳學(xué)診斷（全基因組低拷貝測序）1.實驗室平面圖電泳區(qū)海序區(qū)文庫檢測區(qū)空Ft向空氣湎向空氣旅向,縫沖同C?糖沖闔管沖周f -Qr專用走廊擴增一區(qū)WG3制備區(qū)1 -試捌準備區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向飛緩沖向3Q 一13鐐沖回 ?二0 一an分區(qū)壓力溫度相對濕度照明專用走廊0Pa20-25C40%60%主實驗室300LX,其余房間200300LX緩沖區(qū)+5Pa試劑準備室+15PaWG制備室+10pa擴”區(qū)-5pa標(biāo)本檢測區(qū)-10Pa測序區(qū)-15Pa電泳區(qū)0Pa4.分區(qū)功能4.1試劑準備室主要功能：

9、在NGS±程中使用到的試劑的配制、分裝和保存。4.2 WG制備區(qū)主要功能：基因組DN解放、全基因組DNAT增。4.3 電泳區(qū)主要功能：DNA電泳檢測及結(jié)果反饋、DNA丁斷等4.4 擴增一區(qū)主要功能：DNA>t段的末端修復(fù)與純化、 平移。接頭連接與純化、文庫混合、缺口如文檔對你有用，請下載支持！4.5 文庫檢測區(qū)主要功能：文庫濃度質(zhì)檢分析。4.6 測序區(qū)主要功能：測序模板制備（乳液PC叫磁珠富集回收）、上機測序、數(shù)據(jù)分析、報告審核及發(fā)放。5.儀器配置5.1 試劑準備區(qū)主要儀器設(shè)備：冰箱、分析天平、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈和超凈工作臺等。5.2 電泳區(qū)主要儀

10、器設(shè)備：電泳儀、微波爐、凝膠成像儀、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.3 WG制備區(qū)主要儀器設(shè)備：PC雙、超凈工作臺、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.4 擴增一區(qū)主要儀器設(shè)備：PC雙、可移動紫外燈、超凈工作臺、冰箱、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、UPS移液器、磁力架等。5.5 文庫檢測區(qū)主要儀器設(shè)備：QPCRZ、Qubit2.0核酸定量儀、可移動紫外燈、超凈工作臺、冰箱、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、冰箱、移液器等。5.6 測序區(qū)如文檔對你有用，請下載支持！主要儀器設(shè)備：高通量測序儀、PC電腦、打印機、UPS恒溫金屬浴、純水儀、冰箱、微量臺式離心機

11、、渦旋振蕩器、移液器、超凈工作臺、可移動紫外燈、磁力架、PC&等。遺傳病診斷十月中瘤診斷與治療（雜交捕獲測序技術(shù)+SangefRM序驗證）1 .實驗室平面圖圖5:月中瘤診斷實驗室平面圖2 .技術(shù)流程圖圖6:月中瘤診斷技術(shù)流程圖圖7:一代測序?qū)嶒灹鞒虉D3.技術(shù)參數(shù)分區(qū)壓力溫度相對濕度照明潔凈走廊0Pa20-25C40%60%主實驗室1300LX,其余房間200300LX緩沖區(qū)+5Pa試劑準備室+15Pa標(biāo)本與文庫制備區(qū)+10PaDNA丁斷區(qū)+10Pa雜父捕獲區(qū)（擴”區(qū)）-5Pa文庫擴增區(qū)（擴增二區(qū)）-10Pa文庫檢測區(qū)-10Pa測序區(qū)-15Pa電泳區(qū)0Pa4.分區(qū)功能4.1 試劑準備區(qū)主

12、要功能：在NGS±程中使用到的試劑的配制、分裝和保存。4.2 標(biāo)本與文庫制備區(qū)主要功能：樣本接收、樣本前處理、全基因組DNAI取以及各種樣本DNA戈者RNA勺提取、DNAt段化、DNA屯化、DNA&度測定、DNAt段的末端修復(fù)與純化、接頭連接與純化。4.3 DNA丁斷區(qū)主要功能：DNA打斷（片段化）。4.4 電泳區(qū)主要功能：片段化DNAt泳檢測及結(jié)果反饋。4.5 雜交捕獲區(qū)（擴增一區(qū)）主要功能：目的DNAt段的雜交捕獲與純化，Sanger測序目的片段擴增與純化、Sanger測序PCRttf準備。4.6 文庫擴增區(qū)（擴增二區(qū)）主要功能：雜交捕獲后擴增與純化、文庫濃度質(zhì)檢分析、及

13、Sanger測序的PCRT增反應(yīng)與純化。4.7 測序區(qū)主要功能：測序模板制備（乳液PCRf磁珠富集回收）、上機測序、及Sanger測序。如文檔對你有用，請下載支持！5. 儀器配置5.1 試劑準備區(qū)主要儀器設(shè)備：加樣器、冰箱、分析天平、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈和超凈工作臺等。5.2 標(biāo)本與文庫制備區(qū)主要儀器設(shè)備：微量臺式離心機、掌上三管離心機、恒溫金屬浴、移液器、可移動紫外燈、生物安全柜、冰箱、托盤天平、Qubit2.0核酸定量儀、PCR儀、電腦（可連接互聯(lián)網(wǎng)）、條形碼打印機、普通打印機、掃描槍等。5.3 DNA丁斷區(qū)主要儀器設(shè)備：CovarisS220超聲波打斷儀、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.4 電泳區(qū)主要儀器設(shè)備：電泳儀、微波爐、凝膠成像儀、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.5 雜交捕獲區(qū)（擴增一區(qū)）主要儀器設(shè)備：PCRK、可移動紫外