藥敏紙片的制備

1、32.2.2配制方法A.按抗菌藥物原液中藥物百分含量的要求，計(jì)算出純抗菌藥物的重量，方法是：抗菌藥物終濃度終體積。例：要配制mg/mL的慶大霉素毫升，所需要的純抗菌藥物質(zhì)量為mgB.根據(jù)純抗菌藥物的重量和抗菌藥物原粉的百分比計(jì)算出所需抗菌藥物原粉的重量，方法是：純抗菌藥物的質(zhì)量抗菌藥物原粉的百分含量。如:某慶大霉素原粉的含水量為4.19，則需要慶大霉素原粉的質(zhì)量為64000（14.19）6.68104mg=66.8mg=0.0668gC.各種抗菌藥物按上述表進(jìn)行溶解后定容。D.無(wú)菌條件下過(guò)濾，4保存?zhèn)溆谩?.3藥敏紙片的制備2.3.1空白紙片的制備用打孔機(jī)將制作直徑為6毫米左右的圓形濾紙，按5

2、0張一份，將制作好的濾紙分裝到小西林瓶里，用牛皮紙封瓶口進(jìn)行高壓（121，15min）,烘干備用。2.3.2抗菌藥紙片的制備不同細(xì)菌對(duì)不同抗菌藥紙片的藥物含量要求標(biāo)準(zhǔn)菌種抗微生物藥紙片含藥量（mg）腸桿菌科氨芐西林10美洛西林75哌拉西林100替卡西林75頭孢唑啉30頭孢噻吩30慶大霉素10阿米卡星30卡那霉素30奈替米星30鏈霉素10四環(huán)素30多西環(huán)素304米諾環(huán)素30環(huán)丙沙星或左氧氟沙星5吉米沙星5諾氟沙星10氧氟沙星5西諾沙星100奈啶酸30磺胺藥250或300甲氧芐啶5A.根據(jù)不同藥物藥敏紙片的藥物含量要求，計(jì)算出50片藥敏紙片需要的藥物總含量，方法是：每張藥敏紙片的含藥量。如：制備一

3、份（片）含藥量為mg的慶大霉素，所需的抗菌藥物總質(zhì)量為5mgB.藥物總含量除以抗菌藥物原液的濃度，得出50片藥敏紙片需要的抗菌藥物原液的總體積，抗菌藥物總質(zhì)量抗菌藥物原液濃度。如：制備一份慶大霉素藥敏紙片所需的抗菌藥物原液的體積是5390625m即390.625mC.在無(wú)菌條件下，將各抗菌原液加入裝有紙片的小西林瓶中，用紙密封瓶口。D.置西林瓶37烘箱，將含藥物的紙片烘干。E.在無(wú)菌條件下，取一片烘干后的藥敏紙片加入到滅菌的肉湯中，檢查是否有細(xì)菌污染，并用西林瓶蓋將西林瓶密封，并置4保存。F.16小時(shí)后觀察是否有細(xì)菌污染，將有污染的藥敏紙片剔除，并重新再做；無(wú)污染的可用作紙片擴(kuò)散法。3.注意事

4、項(xiàng)配抗菌藥物原液前要清楚抗菌藥物原粉的百分含量、批號(hào)和生產(chǎn)廠家。配制抗菌藥物原液時(shí)，可能會(huì)遇到抗菌藥物難溶的現(xiàn)象，這就要求用相應(yīng)的助溶劑溶解。抗菌藥物原液的終體積要用容量瓶定容。單位的換算（如強(qiáng)力霉素，含量887IU/mg，計(jì)算配制mg/mL的強(qiáng)力霉素毫升，需要多少克強(qiáng)力霉素原粉？）抗生素的效價(jià)通常以重量或國(guó)際單位（IU)來(lái)表示。青霉鈉1mg=1667IU或1IU0.6mg5青霉素鉀1mg=1559IU或1IU0.625mg制霉菌素1mg=3700IU其他抗生素多以重量為單位或1mg=1000IU抗菌藥物原液的終濃度可增大到5120mg/mL，這可縮減加入紙片中的抗菌藥物原液的體積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，

5、有時(shí)要求紙片的抗菌藥物含量較低，加入的抗菌藥物原液的量過(guò)少，不足以將50片紙片全部潤(rùn)濕時(shí)，應(yīng)將抗菌藥物原液用相應(yīng)的滅菌PBS稀釋到0.5mL，混勻后再加入西林瓶?jī)?nèi)。制作紙片時(shí)，要多做幾份進(jìn)行高壓，以備試驗(yàn)失敗重做時(shí)，節(jié)約時(shí)間。藥敏紙片在37烘干，可能需要一到兩天的時(shí)間，切勿將紙片放入高溫中烘干，以防藥物失效。密封紙片后，可放入4冰箱保存或置陰暗干燥處保存，切勿受潮。二.藥敏試驗(yàn)方法常用的藥物敏感試驗(yàn)有紙片法，試管法、挖洞法、挖溝法、瓊脂稀釋法和泡沫塑料片法，紙片法是生產(chǎn)中常用的藥敏試驗(yàn)方法，具有簡(jiǎn)便、易行、出結(jié)果快的特點(diǎn)，適合于基層實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展。1材料普通瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、藥敏紙片（自制）、滅菌試

6、管、滅菌棉拭和鑷子、被試細(xì)菌、滅菌生理鹽水2方法A.挑取單菌落接種于3mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37培養(yǎng)16小時(shí)。B.用無(wú)菌生理鹽水將培養(yǎng)好的菌液做1:20稀釋。C.用無(wú)菌棉拭蘸取稀釋過(guò)的菌液，在試管壁上擠去多余液體，涂于營(yíng)養(yǎng)瓊脂表面，每次旋轉(zhuǎn)平板60度，共涂3次，使整個(gè)平板涂布均勻，分別涂布兩塊平板。D.平板放置35分鐘后，用無(wú)菌鑷子取藥敏紙片，貼于一平板表面，并輕壓一下紙片，使6其貼平，紙片間相距3mm左右。E.于另一平板上，平均劃分為6個(gè)區(qū)域，并在每個(gè)區(qū)域中貼同樣的藥敏紙片。F.37培養(yǎng)1618小時(shí)，用尺子量取抑菌圈的直徑3次，計(jì)算其平均值即為試驗(yàn)結(jié)果。另一方面，量取貼有同樣紙片的平板上的抑菌圈的

7、直徑，看直徑大小是否一致，檢查所做的藥敏紙片的含藥量是否一致。3結(jié)果判斷結(jié)果判定可參照以下標(biāo)準(zhǔn)抗微生物藥抑菌圈直徑（mm）耐藥中介敏感氨芐西林1314-1617美洛西林1718-2021哌拉西林1718-2021替卡西林1415-1920頭孢唑啉1415-1718頭孢噻吩1415-1718慶大霉素1213-1415阿米卡星1415-1617卡那霉素1314-1718奈替米星1213-1415鏈霉素1112-1415四環(huán)素1415-1819多西環(huán)素1213-1516米諾環(huán)素1415-1819左氧氟沙星1314-1617環(huán)丙沙星1516-2021吉米沙星1516-1920諾氟沙星1213-1617氧氟沙星1213-1516西諾沙星1415-18197奈啶酸1314-1819磺胺藥1213-1617甲氧芐啶1011-15164.注意事項(xiàng)嚴(yán)格控制細(xì)菌培養(yǎng)的時(shí)間，以防過(guò)多的細(xì)菌而影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。涂布已