腸道病原菌的分離與鑒定一ppt課件

1、腸道病原菌的分別與鑒定一腸道病原菌的分別與鑒定一l培育基的制備及常用培育基培育基的制備及常用培育基l細菌的培育法細菌的培育法l EMB培育基的制備培育基的制備l 腸道病原菌的分別與鑒定一腸道病原菌的分別與鑒定一l血清學檢測血清學檢測-肥達氏反響肥達氏反響培育基的制備培育基的制備(一一)肉湯培育基肉湯培育基資料：鮮牛肉、蛋白胨、氯化鈉、資料：鮮牛肉、蛋白胨、氯化鈉、pH試紙、試紙、10碳酸氫鈉、試管、碳酸氫鈉、試管、三角燒瓶、蒸餾水等。三角燒瓶、蒸餾水等。方法方法 1將新穎牛肉將新穎牛肉500g切碎或攪碎，加水切碎或攪碎，加水1000ml，放，放4冰箱或冷冰箱或冷處浸泡過夜，然后煮沸處浸泡過夜，

2、然后煮沸30min，放涼，使剩余的脂肪凝固，再，放涼，使剩余的脂肪凝固，再用絨布或濾紙過濾，將濾液補足為原量。用絨布或濾紙過濾，將濾液補足為原量。 21000ml肉水中肉水中參與蛋白胨參與蛋白胨10g、氯化鈉、氯化鈉5g，加熱溶解。，加熱溶解。 3用精細用精細pH試紙測酸堿度，用試紙測酸堿度，用10碳酸氫鈉校正碳酸氫鈉校正pH為為7.2左左右。過堿時，可用右。過堿時，可用10醋酸校正之。醋酸校正之。 4分裝于試管中或三角燒瓶中，分裝于試管中或三角燒瓶中，15磅磅(121)高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌2030min。 高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器(二二)普通瓊脂培育基普通瓊脂培育基資料：肉水、蛋白胨

3、、氯化鈉、瓊脂、無菌平皿、滅菌試管、資料：肉水、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、無菌平皿、滅菌試管、三角燒瓶等。三角燒瓶等。方法方法 1按上記數(shù)量把肉水、蛋白胨、氯化鈉和瓊脂放到三角燒按上記數(shù)量把肉水、蛋白胨、氯化鈉和瓊脂放到三角燒瓶中，加熱溶化。瓶中，加熱溶化。 2用用pH試紙測酸堿度，用試紙測酸堿度，用10碳酸氫鈉校正碳酸氫鈉校正pH為為7.2左右。左右。 315磅高壓蒸氣滅菌磅高壓蒸氣滅菌2030min。 4趁熱將溶化的培育基倒入滅菌平皿內(nèi)，每個平皿倒入約趁熱將溶化的培育基倒入滅菌平皿內(nèi)，每個平皿倒入約15ml，凝固后即成普通瓊脂平板培育基；如趁熱將培育基倒，凝固后即成普通瓊脂平板培育基；如趁熱將

4、培育基倒入滅菌試管內(nèi)，再將試管斜放實驗臺上，凝固后即成普通瓊入滅菌試管內(nèi)，再將試管斜放實驗臺上，凝固后即成普通瓊脂斜面培育基。脂斜面培育基。(三三)血液瓊脂培育基血液瓊脂培育基 有些細菌其營養(yǎng)要求較高，在普通瓊脂有些細菌其營養(yǎng)要求較高，在普通瓊脂培育基上生長不良，可用血液瓊脂培育基進培育基上生長不良，可用血液瓊脂培育基進展培育。展培育。資料資料 普通瓊脂培育基普通瓊脂培育基 血液血液(脫纖維羊血或兔血脫纖維羊血或兔血) 方法方法 1加熱溶化普通瓊脂培育基。加熱溶化普通瓊脂培育基。 2待冷至待冷至50左右時，參與無菌的脫纖維左右時，參與無菌的脫纖維血液，混勻血液，混勻(留意勿使產(chǎn)生泡沫留意勿使產(chǎn)

5、生泡沫)。 3分注于滅菌試管或平皿中制成血斜面和分注于滅菌試管或平皿中制成血斜面和血平板培育基。血平板培育基。E.M.B瓊脂培育基的制備瓊脂培育基的制備l成分成分l 蛋白胨蛋白胨 10gl 磷酸氫二鉀磷酸氫二鉀 2gl 瓊脂瓊脂 20gl 乳糖溶液乳糖溶液(20) 50mll 伊紅溶液伊紅溶液(2) 20mll 美藍溶液美藍溶液(0.5) 20mll 蒸餾水蒸餾水 1000mll制法制法l 將蛋白胨和磷酸氫二鉀加溫溶化于蒸餾水中將蛋白胨和磷酸氫二鉀加溫溶化于蒸餾水中l(wèi) 校正校正pH值為值為7.6參與瓊脂參與瓊脂l 煮沸溶化過濾后分裝三角瓶中，每瓶定量分裝煮沸溶化過濾后分裝三角瓶中，每瓶定量分裝

6、l 15磅磅30min高壓滅菌高壓滅菌l 以無菌操作法按量參與經(jīng)以無菌操作法按量參與經(jīng)10磅磅20min高壓滅菌的乳糖、伊紅美高壓滅菌的乳糖、伊紅美蘭液，混勻后傾注平皿備用。蘭液，混勻后傾注平皿備用。E.M.B培育基培育基l原理原理l 大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸，使培育基大腸桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸，使培育基pH值下降，值下降，伊紅與美藍相結合成一種復合物，酸性環(huán)境中，菌伊紅與美藍相結合成一種復合物，酸性環(huán)境中，菌體帶正電，易與伊紅結合，故菌落呈紫黑色或紫紅體帶正電，易與伊紅結合，故菌落呈紫黑色或紫紅色，并有金屬光澤。堿性環(huán)境中伊紅與美藍不結合，色，并有金屬光澤。堿性環(huán)境中伊紅與美藍不結合，病原菌不分解

7、乳糖，不產(chǎn)酸故菌落為無色半透明。病原菌不分解乳糖，不產(chǎn)酸故菌落為無色半透明。其次，伊紅、美藍有抑制革蘭氏陽性菌生長的作用。其次，伊紅、美藍有抑制革蘭氏陽性菌生長的作用。l用途用途l 用于分別腸道致病菌，是一種鑒別培育基。并用于分別腸道致病菌，是一種鑒別培育基。并有弱的選擇作用。有弱的選擇作用。肥達氏反響l肥達氏反響通常用知的傷寒桿菌肥達氏反響通常用知的傷寒桿菌“O、“H菌液和甲、菌液和甲、乙型副傷寒桿菌乙型副傷寒桿菌“H菌液與病人血清作定量凝集實驗菌液與病人血清作定量凝集實驗(試試管法管法)，以檢測病人血清中有無相應抗體存在，根據(jù)抗體，以檢測病人血清中有無相應抗體存在，根據(jù)抗體含量多少及增長情

8、況用于傷寒、副傷寒病的輔助診斷。含量多少及增長情況用于傷寒、副傷寒病的輔助診斷。l資料資料l 待檢可疑傷寒病人血清待檢可疑傷寒病人血清(1:10稀釋稀釋)l 診斷菌液：傷寒桿菌診斷菌液：傷寒桿菌“O (O)l 傷寒桿菌傷寒桿菌“H (OH)l 甲型副傷寒桿菌甲型副傷寒桿菌“H (PA)l 乙型副傷寒桿菌乙型副傷寒桿菌“H (PB)l 生理鹽水生理鹽水 l 吸管，小試管等。吸管，小試管等。 方法方法l本實驗四人一組，每人取本實驗四人一組，每人取6只小試管，排成一列，計四列只小試管，排成一列，計四列為一完好實驗。分別標明每列管號和診斷菌液如為一完好實驗。分別標明每列管號和診斷菌液如“O、“OH、“PA、“PB。按下表先向每管加生理鹽水。按下表先向每管加生理鹽水0.5ml，再加，再加10倍稀釋病人血清倍稀釋病人血清0.5ml于第于第l管，做順序的管，做順序的等倍稀釋，最后參與等量的診斷菌液，充分混勻，置等倍稀釋，最后參與等量的診斷菌液，充分混勻，置37 24h，再放室溫，