關(guān)于五龍顆粒對(duì)變態(tài)反應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜組織白細(xì)胞介素mRNA

1、關(guān)于五龍顆粒對(duì)變態(tài)反應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜組織白細(xì)胞介素mRNA表達(dá)的影響    【摘要】  目的 通過五龍顆粒對(duì)脾虛型變態(tài)反應(yīng)性鼻炎(AR)大鼠白細(xì)胞介素-2、4、6 mRNA表達(dá)影響的研究,為健脾益氣固表的五龍顆粒治療AR提供理論依據(jù)。方法 采用病證結(jié)合的方法造模,用RT-PCR法檢測(cè)鼻黏膜白細(xì)胞介素mRNA的表達(dá)。結(jié)果 五龍顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠鼻黏膜處白細(xì)胞介素-2、4、6 mRNA的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用,升高的白細(xì)胞介素-4、6下降,降低的白細(xì)胞介素-2恢復(fù)。結(jié)論 五龍顆粒可

2、能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2、4、6 mRNA的表達(dá),對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠發(fā)揮治療作用( 【關(guān)鍵詞】  五龍顆粒；變應(yīng)性鼻炎；白細(xì)胞介素-2 mRNA；白細(xì)胞介素-4 mRNA；白細(xì)胞介素-6 mRNA     Abstract：Objective To study the effect of Wulong granules on the expression of IL-2&

3、#160;mRNA, IL-4 mRNA and IL-6 mRNA in allergic rhinitis (AR) rats in Spleen Qi deficiency type. To establish the clinic treatment principle-tonify Spleen and reinforce Qi 

4、;of AR through the lab study. Methods Established AR model with combination of disease and Zheng, checked the expression of IL-2 mRNA, IL-4 mRNA and IL-6 mRNA of

5、0;nasal mucosa were detected with RT-PCR. Results Wulong granules can adjust the expression of mRNA of AR rats' nasal mucosa. It can descend the ascensus of IL-4 

6、;mRNA, IL-6 mRNA and the drop of IL-2 mRNA. Conclusion Wulonggranules can show treatment effect to AR rats through adjusting the expression of cell factors such as I

7、L-2 mRNA, IL-4 mRNA and IL-6 mRNA.    Key words：Wulong-granules；allergic rhinitis；IL-2 mRNA；IL-4 mRNA；IL-6 mRNA     變態(tài)反應(yīng)性鼻炎(AR)常與哮喘、蕁麻疹等變態(tài)反應(yīng)性疾病并存,其屬于型變態(tài)反應(yīng)。中醫(yī)多認(rèn)為內(nèi)因?yàn)榕K腑功能失調(diào),臟腑虛損,正氣不足,腠理疏松,衛(wèi)表不固；外因多為風(fēng)寒、異氣之

8、邪侵襲鼻竅而致,寒邪束于皮毛,陽(yáng)氣無從泄越,故噴而上出為嚏。本實(shí)驗(yàn)從脾虛型AR入手,采用RT-PCR方法,從基因水平上研究五龍顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠鼻黏膜白細(xì)胞介素-2、4、6 (IL-2、IL-4、IL-6)mRNA表達(dá)的影響,探討五龍顆粒對(duì)脾虛型AR的影響及對(duì)該型AR的治療機(jī)制。 1  實(shí)驗(yàn)材料 1.1  動(dòng)物     SD大鼠42只,3月齡,體重180220 g,雌雄各半,四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供,合格證號(hào)0012110。飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)微生物與免疫實(shí)驗(yàn)中心,室內(nèi)溫度控制在20

9、25 。 1.2  藥物及試劑    五龍顆粒,華神集團(tuán)提供,藥液原藥材含量2.5 g/mL。息斯敏,西安楊森生產(chǎn),用藥前研磨成粉,用生理鹽水配成0.03%的混懸液。卵白蛋白：美國(guó)Sigma公司生產(chǎn),洛陽(yáng)華美生物工程公司分裝(醫(yī)藥學(xué)/臨床醫(yī)學(xué)論文 2  實(shí)驗(yàn)方法 2.1  分組及造模     SD大鼠自由喂養(yǎng)1周后,將大鼠按體重、性別隨機(jī)分為7組,每組6只。即空白組、脾虛AR模型組、脾虛AR中藥組、脾虛AR西藥組、AR模型組、AR中藥組

10、、AR西藥組。    脾氣虛模型：用飲食不節(jié)加游泳疲勞過度綜合因素傷脾方法1。飲食不節(jié)：病證結(jié)合的脾虛AR模型組、脾虛AR中藥組、脾虛AR西藥組動(dòng)物喂飼甘蘭每只1015 g/d,自由飲水；雙日豬脂2 mL/只灌胃,自由進(jìn)食、飲水,共8 d。過勞傷氣：以上各組動(dòng)物在上述處理的當(dāng)日放入20 水池中游泳至疲勞過度(以經(jīng)驅(qū)趕無力游泳或欲溺水為指征),1次/d,共8 d。    AR模型：按照安氏2報(bào)道的方法造模,實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物以卵白蛋白0.30 mg作抗原,氫氧化鋁粉

11、末30 mg作佐劑,加生理鹽水1 mL形成混懸液,腹腔內(nèi)注射,隔日1次,共7次。腹腔注射免疫完成后,在治療的同時(shí),每日給藥1 h后再予以5%卵白蛋白溶液半量激發(fā),即5%卵白蛋白溶液10 L,每側(cè)5 L滴入大鼠雙側(cè)前鼻孔；模型組只激發(fā)不給藥。空白組以生理鹽水代替卵白蛋白,其余方法和步驟不變。 2.2  給藥     造模結(jié)束后,即22 d后開始給藥,給藥時(shí)間為7 d。每日以成人臨床劑量8倍的五龍顆粒(中藥組)及息斯敏混懸液(西藥組)灌胃,1次/d?？瞻捉M、AR模型組、

12、脾虛模型AR組：正常喂養(yǎng),不給藥物。 2.3  觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 2.3.1  鼻黏膜IL-2 mRNA表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)  實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,在超凈工作臺(tái)上取鼻黏膜用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法,進(jìn)行IL-2 mRNA(信使RNA)水平表達(dá)的檢測(cè)。具體方法如下：國(guó)際權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)中(http：//)查詢相關(guān)SD大鼠基因全序列；用引物設(shè)計(jì)軟件Primer&#

13、160;5.0設(shè)計(jì)出候選引物對(duì)；綜合比較,找出最佳引物對(duì)；委托寶生物工程(大連)有限公司合成IL-2 mRNA引物：5'-CACTGACGCTTGTCCTCC- 3',3'-TTCGTCCGGTGTC TTAAC-5',采用美國(guó)TriZol試劑(Ne.15596-018)一步法提取總RNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)PCR反應(yīng),反應(yīng)結(jié)果通過凝膠電泳系統(tǒng)檢測(cè)。由于反應(yīng)眾多,為保障不同反應(yīng)之間的可比性,采用不同反應(yīng)產(chǎn)物帶的相對(duì)熒光強(qiáng)度比值進(jìn)行橫向比較,確定不同基因在不同樣本的相對(duì)表達(dá)程度。 2.3.2  鼻黏膜IL-4 mR

14、NA表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)  測(cè)試方法同IL-2 mRNA,引物設(shè)計(jì)為：5'-TGCTGTCACCCTGTTCTG-3', 3-GATGCTCCCTTTATGAACG-5。 2.3.3  鼻黏膜IL-6 mRNA表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)  測(cè)試方法同IL-2 mRNA,引物設(shè)計(jì)為：5'-CCACTGCCTTCCCTACTT-3', 3'-TATTGTTCTTTCTGTTTCGGTC-5'。 2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  

15、60; 計(jì)量資料采用x±s表示；組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)；方差齊性檢驗(yàn)用Homageneity of variance test；如果方差齊者采用LSD法,方差不齊采用Tamhane's T2法。數(shù)據(jù)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。 3  結(jié)果 (見表1)表1  五龍顆粒對(duì)AR大鼠鼻黏膜組織IL-2、IL-4、IL-6 mRNA表達(dá)的影響(略) 注：與空白組比較,P<0.05,P<0.01；與脾虛AR模型組比較,P

16、<0.05,P<0.01；與AR模型組比較,P<0.05。 4  討論    熊大經(jīng)教授在多年的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),單純的肺氣虛寒型鼻鼽并不多見,而肺脾兩虛型鼻鼽患者在臨床上更為常見；認(rèn)為肺氣虛弱,衛(wèi)氣衛(wèi)外功能必然減弱；而脾氣虛弱,后天生化乏源,則不能助肺固表,以至邪干肺系,故治療應(yīng)從健脾入手,健脾益氣,培補(bǔ)中土,從而達(dá)到培土生金、益氣固表之目的。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病與遺傳密切相關(guān),帶有與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病相關(guān)基因的特應(yīng)型(atopic type)個(gè)體,并且本病的發(fā)生與宿主的免疫紊亂有關(guān)3。從而確立了本病的治療關(guān)鍵在于

17、恢復(fù)機(jī)體的正常免疫機(jī)能狀態(tài),改善特應(yīng)型體質(zhì)。因此,選用黨參、黃芪、白術(shù)、茯苓、山藥等補(bǔ)中益氣、健脾除濕；僵蠶、蟬蛻宣肺通竅、通絡(luò)止癢；枸杞子、五味子益腎止涕,組成五龍顆粒?？v觀全方,通過補(bǔ)中益氣、健脾宣肺益腎,兼顧先天、后天,從而達(dá)到消除癥狀、改善體質(zhì)的目的。    引起AR最重要的因素是變應(yīng)原引起TH細(xì)胞的分化過程。在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)至少存在兩種以上的TH細(xì)胞,它們分別合成不同的細(xì)胞因子。TH1細(xì)胞產(chǎn)生IL-2、TNF-和IFN-等,TH2細(xì)胞分泌IL-4、IL-5、IL-10和IL-13等。決定TH2分化的主要因素是IL-4,IL-4是由活化的TH2細(xì)胞

18、經(jīng)抗原或絲裂原刺激而產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子,除了TH2細(xì)胞外,自然殺傷細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞也分泌IL-4。其生物效應(yīng)主要包括：誘導(dǎo)人B細(xì)胞產(chǎn)生IgE、IgG1；誘導(dǎo)殺傷T細(xì)胞和LAK細(xì)胞的殺傷活性,誘導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞表達(dá)MHC-類抗原；調(diào)節(jié)造血細(xì)胞的增殖和分化4。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M鼻黏膜組織IL-4 mRNA的表達(dá)明顯升高,用藥后治療各組明顯下降,表明五龍顆?？梢砸种艻L-4 mRNA的表達(dá),其可能抑制TH2細(xì)胞、NK細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞分泌IL-4,從而抑制IgE的合成,阻斷變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的發(fā)作。    現(xiàn)已證明,IL-2在人體免

19、疫方面起著重要的作用。IL-2能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和自然殺傷 (nature killer,NK)細(xì)胞殺傷性,并可直接調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞分化增殖5。這些細(xì)胞表面均表達(dá)IL-2R,IL-2可與細(xì)胞表面的IL-2R結(jié)合而影響這些免疫細(xì)胞的功能。IL-2在哮喘中作用的研究報(bào)道尚有分歧,IL-2能直接促進(jìn)T細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂,T細(xì)胞產(chǎn)生IL-4需要IL-2,IL-2可上調(diào)IL-4誘導(dǎo)的IgE合成,Maggi等認(rèn)為IL-2可能在B細(xì)胞合成IgE中起重要作用。相反有報(bào)道IL-2能抑制正常人和過敏患者外周血單個(gè)核細(xì)胞由IL-4誘導(dǎo)的IgE、IgG4合成。Romano等6發(fā)現(xiàn),特應(yīng)癥患者外周血單個(gè)

20、核細(xì)胞產(chǎn)生IL-2很少,Tac抗原表達(dá)很少,提示有IL-2產(chǎn)生缺陷。對(duì)IL-2在變應(yīng)性疾病及脾虛證中的變化和作用,目前認(rèn)識(shí)尚不一致,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,五龍顆粒對(duì)AR及脾虛引起的IL-2 mRNA的表達(dá)降低具有明顯的恢復(fù)升高作用。    IL-6由多種細(xì)胞合成和分泌,包括活化的T細(xì)胞和B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等,是一種抑制病毒復(fù)制的細(xì)胞因子,曾稱為IFN-2。其生物學(xué)作用主要可增強(qiáng)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2和表達(dá)IL-2受體；誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞分化。另外,IL-6刺激肝細(xì)胞合成急性期反應(yīng)蛋白,可引起急性期炎癥反應(yīng),被稱為前炎癥細(xì)胞因子。有研究表明

21、型變態(tài)反應(yīng)患者,由變應(yīng)原誘導(dǎo)的鼻黏膜晚期反應(yīng)標(biāo)本表達(dá)IL-6和IL-8 mRNA細(xì)胞數(shù)明顯增加。其之所以選用攻擊后24 h標(biāo)本作為研究模型,是因?yàn)榇藭r(shí)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量達(dá)最高7。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,模型組鼻黏膜組織IL-6 mRNA的表達(dá)明顯升高,用藥后治療各組顯著下降；AR鼻黏膜在發(fā)作期伴有明顯的炎癥反應(yīng)；五龍顆?？赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)IL-6 mRNA的表達(dá)對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠鼻黏膜晚期炎癥反應(yīng)起到抑制作用。  【參考文獻(xiàn)】  1 李德新.脾虛證對(duì)生物膜結(jié)構(gòu)與功能影響的實(shí)驗(yàn)研究J.遼寧中醫(yī)雜志,1993,20(6)：39.2&

22、#160;安云芳.變應(yīng)性鼻炎鼻黏膜P物質(zhì)受體的研究J.中華耳鼻咽喉科雜志,1998,33(3)：139141.3 劉永祥.淺談中醫(yī)免疫學(xué)J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志,1999, 7(1)：5152.4 Mosmann TR,Cherwinski H,Bond MV,et al.Two types of murine helper T cell clone.I.Defintion according to profiles&

23、#160;of lymphokine activities and secreeted proteinsJ.Immunol,1986,136：2348.5 Symons. Soluble IL-2 recoptoe in rheumatoid orthritis, correlation with disease activity IL-1 and IL-2 inhibitionJ. I

24、mmunol,1988,141：2612.6 Romano MF, Valerio G, Turco MC, et al. Defect of CD2- and CD3- mediated activation pathways in T cells of atopic patients：role of interleukin 2J.Cell

25、60;Immunol,1992,139：91.7 Jacobsen M R, Varney V, Sudderick R, et al. Immunohistology of allegen-induced latenasal responsesJ.Allergy Clin Immunol, 1991,87：304. 免費(fèi)論文下載中心  【摘要】  目的 通過五龍顆粒對(duì)脾虛型變

26、態(tài)反應(yīng)性鼻炎(AR)大鼠白細(xì)胞介素-2、4、6 mRNA表達(dá)影響的研究,為健脾益氣固表的五龍顆粒治療AR提供理論依據(jù)。方法 采用病證結(jié)合的方法造模,用RT-PCR法檢測(cè)鼻黏膜白細(xì)胞介素mRNA的表達(dá)。結(jié)果 五龍顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠鼻黏膜處白細(xì)胞介素-2、4、6 mRNA的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用,升高的白細(xì)胞介素-4、6下降,降低的白細(xì)胞介素-2恢復(fù)。結(jié)論 五龍顆?？赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2、4、6 mRNA的表達(dá),對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠發(fā)揮治療作用。  【關(guān)鍵詞】  五龍顆粒；變應(yīng)性鼻炎；白細(xì)胞介素-2

27、60;mRNA；白細(xì)胞介素-4 mRNA；白細(xì)胞介素-6 mRNA Effects of Wulong Granules on the Interlerkin mRNA Expression of Nasal Mucosa in Alergic Rhinitis Rats  FU Wen-yang, XIE Hiu, XIONG Da-jing 1.Shen

28、zhen Hospital of TCM, Shenzhen 518000, China；2.Chendu University of TCM, Chengdu 610075, China     Abstract：Objective To study the effect of Wulong granules on the expres

29、sion of IL-2 mRNA, IL-4 mRNA and IL-6 mRNA in allergic rhinitis (AR) rats in Spleen Qi deficiency type. To establish the clinic treatment principle-tonify Spleen and 

30、;reinforce Qi of AR through the lab study. Methods Established AR model with combination of disease and Zheng, checked the expression of IL-2 mRNA, IL-4 mRNA and IL-

31、6 mRNA of nasal mucosa were detected with RT-PCR. Results Wulong granules can adjust the expression of mRNA of AR rats' nasal mucosa. It can descend the ascensus

32、 of IL-4 mRNA, IL-6 mRNA and the drop of IL-2 mRNA. Conclusion Wulonggranules can show treatment effect to AR rats through adjusting the expression of cell factors&#

33、160;such as IL-2 mRNA, IL-4 mRNA and IL-6 mRNA.    Key words：Wulong-granules；allergic rhinitis；IL-2 mRNA；IL-4 mRNA；IL-6 mRNA     變態(tài)反應(yīng)性鼻炎(AR)常與哮喘、蕁麻疹等變態(tài)反應(yīng)性疾病并存,其屬于型變態(tài)反應(yīng)。中醫(yī)多認(rèn)為內(nèi)因?yàn)榕K腑功能失調(diào),臟腑虛損,正氣

34、不足,腠理疏松,衛(wèi)表不固；外因多為風(fēng)寒、異氣之邪侵襲鼻竅而致,寒邪束于皮毛,陽(yáng)氣無從泄越,故噴而上出為嚏。本實(shí)驗(yàn)從脾虛型AR入手,采用RT-PCR方法,從基因水平上研究五龍顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性AR大鼠鼻黏膜白細(xì)胞介素-2、4、6 (IL-2、IL-4、IL-6)mRNA表達(dá)的影響,探討五龍顆粒對(duì)脾虛型AR的影響及對(duì)該型AR的治療機(jī)制。 1  實(shí)驗(yàn)材料 1.1  動(dòng)物     SD大鼠42只,3月齡,體重180220 g,雌雄各半,四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供,合格證號(hào)0012110。飼養(yǎng)于成都中醫(yī)

35、藥大學(xué)微生物與免疫實(shí)驗(yàn)中心,室內(nèi)溫度控制在2025 。 1.2  藥物及試劑    五龍顆粒,華神集團(tuán)提供,藥液原藥材含量2.5 g/mL。息斯敏,西安楊森生產(chǎn),用藥前研磨成粉,用生理鹽水配成0.03%的混懸液。卵白蛋白：美國(guó)Sigma公司生產(chǎn),洛陽(yáng)華美生物工程公司分裝。TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0試劑,寶生物工程(大連)有限公司生產(chǎn)。PCR引物,寶生物工程(大連)有限公司合成。 2  實(shí)驗(yàn)方法 2.1  分組及造

36、模     SD大鼠自由喂養(yǎng)1周后,將大鼠按體重、性別隨機(jī)分為7組,每組6只。即空白組、脾虛AR模型組、脾虛AR中藥組、脾虛AR西藥組、AR模型組、AR中藥組、AR西藥組。    脾氣虛模型：用飲食不節(jié)加游泳疲勞過度綜合因素傷脾方法1。飲食不節(jié)：病證結(jié)合的脾虛AR模型組、脾虛AR中藥組、脾虛AR西藥組動(dòng)物喂飼甘蘭每只1015 g/d,自由飲水；雙日豬脂2 mL/只灌胃,自由進(jìn)食、飲水,共8 d。過勞傷氣：以上各組動(dòng)物在上述處理的當(dāng)日放入20 水池中游泳至疲勞過度(以經(jīng)驅(qū)趕無力

37、游泳或欲溺水為指征),1次/d,共8 d。    AR模型：按照安氏2報(bào)道的方法造模,實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物以卵白蛋白0.30 mg作抗原,氫氧化鋁粉末30 mg作佐劑,加生理鹽水1 mL形成混懸液,腹腔內(nèi)注射,隔日1次,共7次。腹腔注射免疫完成后,在治療的同時(shí),每日給藥1 h后再予以5%卵白蛋白溶液半量激發(fā),即5%卵白蛋白溶液10 L,每側(cè)5 L滴入大鼠雙側(cè)前鼻孔；模型組只激發(fā)不給藥?？瞻捉M以生理鹽水代替卵白蛋白,其余方法和步驟不變。 2.2  給藥   

38、  造模結(jié)束后,即22 d后開始給藥,給藥時(shí)間為7 d。每日以成人臨床劑量8倍的五龍顆粒(中藥組)及息斯敏混懸液(西藥組)灌胃,1次/d?？瞻捉M、AR模型組、脾虛模型AR組：正常喂養(yǎng),不給藥物。 2.3  觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 2.3.1  鼻黏膜IL-2 mRNA表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)  實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,在超凈工作臺(tái)上取鼻黏膜用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法,進(jìn)行IL-

39、2 mRNA(信使RNA)水平表達(dá)的檢測(cè)。具體方法如下：國(guó)際權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)中(http：//)查詢相關(guān)SD大鼠基因全序列；用引物設(shè)計(jì)軟件Primer 5.0設(shè)計(jì)出候選引物對(duì)；綜合比較,找出最佳引物對(duì)；委托寶生物工程(大連)有限公司合成IL-2 mRNA引物：5'-CACTGACGCTTGTCCTCC- 3',3'-TTCGTCCGGTGTC TTAAC-5',采用美國(guó)TriZol試劑(Ne.15596-018)一步法提取總RNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)PCR反應(yīng),反應(yīng)結(jié)果通過凝膠電泳系統(tǒng)檢測(cè)

40、。由于反應(yīng)眾多,為保障不同反應(yīng)之間的可比性,采用不同反應(yīng)產(chǎn)物帶的相對(duì)熒光強(qiáng)度比值進(jìn)行橫向比較,確定不同基因在不同樣本的相對(duì)表達(dá)程度。 2.3.2  鼻黏膜IL-4 mRNA表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)  測(cè)試方法同IL-2 mRNA,引物設(shè)計(jì)為：5'-TGCTGTCACCCTGTTCTG-3', 3-GATGCTCCCTTTATGAACG-5。 2.3.3  鼻黏膜IL-6 mRNA表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)  測(cè)試方法同IL-2 mRNA,引物設(shè)計(jì)為：5'-CCACTG

41、CCTTCCCTACTT-3', 3'-TATTGTTCTTTCTGTTTCGGTC-5'。 2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法    計(jì)量資料采用x±s表示；組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)；方差齊性檢驗(yàn)用Homageneity of variance test；如果方差齊者采用LSD法,方差不齊采用Tamhane's T2法。數(shù)據(jù)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。 3  結(jié)果 (見表1)表1 

42、 五龍顆粒對(duì)AR大鼠鼻黏膜組織IL-2、IL-4、IL-6 mRNA表達(dá)的影響(略) 注：與空白組比較,P<0.05,P<0.01；與脾虛AR模型組比較,P<0.05,P<0.01；與AR模型組比較,P<0.05。 4  討論    熊大經(jīng)教授在多年的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),單純的肺氣虛寒型鼻鼽并不多見,而肺脾兩虛型鼻鼽患者在臨床上更為常見；認(rèn)為肺氣虛弱,衛(wèi)氣衛(wèi)外功能必然減弱；而脾氣虛弱,后天生化乏源,則不能助肺固表,以至邪干肺系,故治療應(yīng)從健脾入手,健脾益氣,培補(bǔ)中土,從而達(dá)到培土

43、生金、益氣固表之目的?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病與遺傳密切相關(guān),帶有與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病相關(guān)基因的特應(yīng)型(atopic type)個(gè)體,并且本病的發(fā)生與宿主的免疫紊亂有關(guān)3。從而確立了本病的治療關(guān)鍵在于恢復(fù)機(jī)體的正常免疫機(jī)能狀態(tài),改善特應(yīng)型體質(zhì)。因此,選用黨參、黃芪、白術(shù)、茯苓、山藥等補(bǔ)中益氣、健脾除濕；僵蠶、蟬蛻宣肺通竅、通絡(luò)止癢；枸杞子、五味子益腎止涕,組成五龍顆粒?？v觀全方,通過補(bǔ)中益氣、健脾宣肺益腎,兼顧先天、后天,從而達(dá)到消除癥狀、改善體質(zhì)的目的。    引起AR最重要的因素是變應(yīng)原引起TH細(xì)胞的分化過程。在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)至少存在兩種以上的TH細(xì)胞,

44、它們分別合成不同的細(xì)胞因子。TH1細(xì)胞產(chǎn)生IL-2、TNF-和IFN-等,TH2細(xì)胞分泌IL-4、IL-5、IL-10和IL-13等。決定TH2分化的主要因素是IL-4,IL-4是由活化的TH2細(xì)胞經(jīng)抗原或絲裂原刺激而產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子,除了TH2細(xì)胞外,自然殺傷細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞也分泌IL-4。其生物效應(yīng)主要包括：誘導(dǎo)人B細(xì)胞產(chǎn)生IgE、IgG1；誘導(dǎo)殺傷T細(xì)胞和LAK細(xì)胞的殺傷活性,誘導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞表達(dá)MHC-類抗原；調(diào)節(jié)造血細(xì)胞的增殖和分化4。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M鼻黏膜組織IL-4 mRNA的表達(dá)明顯升高,用藥后治療各組明顯下降,表明五龍顆?？梢砸种艻L-4 mRN

45、A的表達(dá),其可能抑制TH2細(xì)胞、NK細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞分泌IL-4,從而抑制IgE的合成,阻斷變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的發(fā)作。    現(xiàn)已證明,IL-2在人體免疫方面起著重要的作用。IL-2能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和自然殺傷 (nature killer,NK)細(xì)胞殺傷性,并可直接調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞分化增殖5。這些細(xì)胞表面均表達(dá)IL-2R,IL-2可與細(xì)胞表面的IL-2R結(jié)合而影響這些免疫細(xì)胞的功能。IL-2在哮喘中作用的研究報(bào)道尚有分歧,IL-2能直接促進(jìn)T細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂,T細(xì)胞產(chǎn)生IL-4需要IL-2,IL-2可上調(diào)IL-4誘導(dǎo)的IgE合成

46、,Maggi等認(rèn)為IL-2可能在B細(xì)胞合成IgE中起重要作用。相反有報(bào)道IL-2能抑制正常人和過敏患者外周血單個(gè)核細(xì)胞由IL-4誘導(dǎo)的IgE、IgG4合成。Romano等6發(fā)現(xiàn),特應(yīng)癥患者外周血單個(gè)核細(xì)胞產(chǎn)生IL-2很少,Tac抗原表達(dá)很少,提示有IL-2產(chǎn)生缺陷。對(duì)IL-2在變應(yīng)性疾病及脾虛證中的變化和作用,目前認(rèn)識(shí)尚不一致,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,五龍顆粒對(duì)AR及脾虛引起的IL-2 mRNA的表達(dá)降低具有明顯的恢復(fù)升高作用。    IL-6由多種細(xì)胞合成和分泌,包括活化的T細(xì)胞和B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等,是一種抑制病毒復(fù)制的細(xì)胞因子,曾稱為IFN-2。其生物學(xué)作用主要可增強(qiáng)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2和