幾種類型的分光光度計

1、2.3 分光光度法2.3.1 分光光度法概述1.1.目視比色法目視比色法 以比較溶液顏色深淺，從而確定被測定組分含量的方法，稱為目視比色法。 目視比色法的準(zhǔn)確度和精密度受視力條件影響很大，一般相對誤差約在520的范圍。常用的目視比色法（常用的目視比色法（1 1） 最常用的目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法。 取一套比色管，于各管中分別加入一系列不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在測定條件下進(jìn)行顯色定容。此時一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的管中顯出由淺到深的色階。 被測溶液在同一條件下顯色。 將被測溶液管與標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行比較(從管口垂直向下觀察)，若與其中某一管顏色相同可認(rèn)為被測溶液濃度與此管濃度相等，若被測溶液顏色介于兩標(biāo)準(zhǔn)顏色之間，可

2、認(rèn)為被測溶液濃度等于兩管濃度的平均值。常用的目視比色法（常用的目視比色法（2 2） 這種方法設(shè)備和操作簡單，液層厚，對于很稀的溶液亦可以辨色，故靈敏度高,可在白光下進(jìn)行，不符合比爾定律的試液亦可以進(jìn)行測定。 但由于經(jīng)顯色反應(yīng)后溶液往往不穩(wěn)定.標(biāo)準(zhǔn)色階須臨時配制，故有時采用穩(wěn)定的有色物質(zhì)如K2CrO7(橙色)、CuSO4(藍(lán)色)、CoSO4(粉紅色)等配制標(biāo)準(zhǔn)色階。2.2.分光光度法分光光度法 光度可用光電比色計或分光光度計進(jìn)行測量。 測定時常用的是校正曲線法或比較法。 （1）校正曲線法 校正曲線法，又稱工作曲線或標(biāo)準(zhǔn)曲線法。 當(dāng)溶液厚度b固定時，吸光度A與溶液濃度c成正比.取一系列不同濃度標(biāo)準(zhǔn)

3、溶液（57圖），分別測定其吸光度，以濃度c為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，作校正曲線.試液用同樣條件顯色，測定吸光度，從曲線上求得試液濃度。（2）比較法 比較法又稱單對照法。 根據(jù)兩個液層厚度相同而濃度不同的同一種有色溶液，它們的濃度與吸光度成正比： A標(biāo)=K1c標(biāo) A試=K2c試 由于有色溶液性質(zhì)一致，入射光波長也一致，因此K1=K2,故有：A標(biāo) /A試 =c標(biāo) /c試 故： c試 A試c標(biāo)/A標(biāo) 采用比較法時，c標(biāo)與c試必須相近，結(jié)果才可靠。光度法的優(yōu)點 與目視比色法相比，光度法的優(yōu)點： 1. 用光電儀器進(jìn)行測量可消除輕度色盲、眼睛疲勞等主觀誤差。2. 有其他物質(zhì)共存時，可選適當(dāng)?shù)娜肷涔夂蛥⒈热?/p>

4、液來消除干擾，提高選擇性。3. 對于大批試樣分析，校正曲線可簡化手續(xù)，提高分析速度。2.3.2.測量條件的選擇(1)（1）選擇合適的入射光 由于溶液對光的吸收是有選擇性的，因此必須選擇溶液吸收最大的波長作為入射光的波長。 （2）控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶?用光度計測量吸光度，都存在著誤差。當(dāng)測量小于0.2和大于0.7吸光度時，誤差會迅速增加。為了使測量誤差落在0.20.7之間，可以控制試樣的稱取量。對于組分含量高的試樣，可減少稱取量，或是稀釋;對于含量低的溶液可增加稱樣量或濃縮的方法來提高濃度。2.3.2.測量條件的選擇（2）（3）選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤?參比溶液的作用在于用它來抵消比色皿及試劑對入射光

5、的反射和吸收，也可以抵消一些有色干擾離子的影響。2.3.2.測量條件的選擇（3） 參比溶液的選擇方法：1、如果試液、顯色劑及其他試劑都無色，可選用蒸餾水作為 參比溶液；2、若顯色劑無色而試液中存在有色干擾物，可用不加顯色劑的被測溶液作參比溶液；3、若試液無色而顯色劑和其他試劑有色，則可用試劑空白作參比溶液。2.3.3分光光度計的結(jié)構(gòu) 分光光度計種類和型號繁多，但其基本結(jié)構(gòu)和原理相似，主要由下列4個部分組成：（1）光源（2）單色器（3）吸收池（4）檢測器和讀數(shù)裝置光源 可見光分光光度法使用的光源常為612V的鎢絲燈，它可以發(fā)出波長約為320nm2500nm的連續(xù)光譜. 若紫外光譜法，則采用氘燈，

6、它能夠產(chǎn)生 200320nm的連續(xù)光譜。單色器（1） 單色器的作用是獲得單色光。1、濾光片常用的濾光片是由有色玻璃（或其他材料）構(gòu)成，使通過的光與濾光片的顏色相同。為了表示濾光片的質(zhì)量，可制作透光率波長曲線（即透光曲線），以峰高的一半與曲線相交波長范圍（光譜半寬度）來表示單色光的質(zhì)量。半寬度愈窄，單色光愈純。選擇濾光片，必須使能被溶液吸收最大的光通過，也就是濾光片顏色是溶液的補色。 單色器（2）2. 棱鏡 分光光度計常用棱鏡作為單色器。棱鏡獲得單色光的純度與棱鏡色散率和出口狹縫寬度有關(guān)。可見光區(qū)用玻璃棱鏡（對可見光有較大色散率），紫外區(qū)則用石英棱鏡（玻璃吸收紫外光）。3. 光柵，是在鍍鋁的光學(xué)

7、玻璃上刻了許多相距很小、等距又相平行，并具有反射面的溝槽構(gòu)成的一種單色器。檢測器和讀數(shù)裝置 （一） 檢測器和讀數(shù)裝置都是光電轉(zhuǎn)換元件，目的是把透過光信號轉(zhuǎn)換成電流信號，并加以測量。1、硒光電池 是一種光敏半導(dǎo)體元件，經(jīng)常使用的是硒光電池。硒光電池適用于波長范圍380750nm的光，在540580nm處靈敏度最高。它產(chǎn)生的光電流較大，可毋須放大，直接用靈敏電流計測量。 光電池使用時間過長或受強光照射時會導(dǎo)致靈敏度下降，稱為“疲勞現(xiàn)象”，故使用時須注意不可令光源未經(jīng)單色器調(diào)節(jié)便直接照射光電池，出現(xiàn)疲勞現(xiàn)象時可放置暗處使其恢復(fù)。檢測器和讀數(shù)裝置 （2）2. 光電管. 是一個二極真空管由一個陽極和一個光敏陰極組成。3. 光電倍增管。 是利用光敏陰極把光信號放大的裝置。 4. 讀數(shù)裝置。 讀數(shù)裝置常用的是微安計或檢流計。幾種類型的分光光度計（一）幾種類型的分光光度計（一）圖27 721分光光度計 幾種類型的分光光度計（二）幾種類型的分光光度計（