臨床常見病原體檢查

1、整理課件1第九章第九章 臨床病原體檢測(cè)臨床病原體檢測(cè) 整理課件2提提 綱綱第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)整理課件3教學(xué)目的與要求：教學(xué)目的與要求：了解掌握臨床病原體檢查的主要內(nèi)容（標(biāo)本采集、標(biāo)本驗(yàn)收、藥敏檢查、耐藥性檢測(cè)、臨床常見病原體、病毒性肝炎、性傳播疾病、醫(yī)院感染）、

2、檢測(cè)原理以及臨床實(shí)際應(yīng)用的重要意義。整理課件4重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)與難點(diǎn)標(biāo)本采集的原則及各種檢查方法的適用范圍及其優(yōu)缺點(diǎn)藥物敏感的常用試驗(yàn)方法及其特點(diǎn)耐藥菌檢測(cè)試驗(yàn)各種類型臨床常見病原體的檢查甲、乙、丙型肝炎的檢測(cè)方法各種性傳播疾病病原體的檢測(cè)方法、篩選試驗(yàn)、確診試驗(yàn)及金標(biāo)準(zhǔn)院內(nèi)感染定義整理課件5提提 綱綱第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第

3、六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)整理課件6臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的特殊性臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的特殊性依賴于細(xì)菌生長(zhǎng)依賴于細(xì)菌生長(zhǎng)l采集時(shí)間采集時(shí)間 （發(fā)燒？）（發(fā)燒？）l運(yùn)送方式運(yùn)送方式 （密閉與否，保溫與否？）（密閉與否，保溫與否？）l感染的細(xì)菌種類及生長(zhǎng)特征感染的細(xì)菌種類及生長(zhǎng)特征 （苛養(yǎng)菌）（苛養(yǎng)菌）l病人是否使用抗生素病人是否使用抗生素 （抗生素的影響）（抗生素的影響）l其他：消毒劑，白細(xì)胞吞噬等其他：消毒劑，白細(xì)胞吞噬等容易受環(huán)境中的細(xì)菌污染容易受環(huán)境中的細(xì)菌污染l采集方法采集方法 （無菌操作，避免污染）（無菌操作，避免污染）l放置時(shí)間放置時(shí)間 （及時(shí)運(yùn)送，避免細(xì)菌死亡）

4、（及時(shí)運(yùn)送，避免細(xì)菌死亡）整理課件7基本原則基本原則1：正確的標(biāo)本類型和采集部位以反映有效病程：正確的標(biāo)本類型和采集部位以反映有效病程2：采集和運(yùn)送應(yīng)無菌操作，避免污染：采集和運(yùn)送應(yīng)無菌操作，避免污染3：盡快送檢：盡快送檢4：視所有標(biāo)本為傳染品，高度污染標(biāo)本要有明顯標(biāo)識(shí)：視所有標(biāo)本為傳染品，高度污染標(biāo)本要有明顯標(biāo)識(shí)5：注意生物安全，標(biāo)本用后要做消毒處理：注意生物安全，標(biāo)本用后要做消毒處理一、標(biāo)本采集和運(yùn)送一、標(biāo)本采集和運(yùn)送整理課件8（一）血液標(biāo)本的采集（一）血液標(biāo)本的采集適應(yīng)癥：疑似菌血癥、敗血癥或適應(yīng)癥：疑似菌血癥、敗血癥或膿毒血癥的病人膿毒血癥的病人酒精棉球消毒，防止污染。靜脈酒精棉球消毒

5、，防止污染。靜脈采血后，將血液注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)采血后，將血液注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi) 。采集時(shí)間：一般在抗生素使用前，采集時(shí)間：一般在抗生素使用前，于發(fā)熱初期或高峰期采血。于發(fā)熱初期或高峰期采血。采集頻率：采集頻率：24小時(shí)內(nèi)采血小時(shí)內(nèi)采血23次可提高陽(yáng)性率，且在不同部位。次可提高陽(yáng)性率，且在不同部位。采血量：血液與培養(yǎng)基的比例為采血量：血液與培養(yǎng)基的比例為1：5-10，一般成人血量，一般成人血量510ml，嬰兒，嬰兒1-5ml。整理課件9（二）尿液標(biāo)本的采集（二）尿液標(biāo)本的采集首次晨尿，無菌采集中段尿首次晨尿，無菌采集中段尿10-20ml。排尿困難者考慮導(dǎo)尿采集標(biāo)本。排尿困難者考慮導(dǎo)尿采集標(biāo)本。如考慮厭氧菌

6、感染，采取膀胱如考慮厭氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集標(biāo)本穿刺法采集標(biāo)本。整理課件10（三）糞便標(biāo)本采集（三）糞便標(biāo)本采集自然排便者：挑取膿、血或粘液部分于清自然排便者：挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢。潔容器中送檢。排便困難者：采用直腸拭子采集。排便困難者：采用直腸拭子采集。懷疑霍亂弧菌感染引起的腹瀉，立即接種懷疑霍亂弧菌感染引起的腹瀉，立即接種或?qū)?biāo)本置于堿性蛋白胨水或卡或?qū)?biāo)本置于堿性蛋白胨水或卡-布運(yùn)送布運(yùn)送培養(yǎng)液送檢。培養(yǎng)液送檢。傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢3次。次。整理課件11（四）呼吸道標(biāo)本采集（四）呼吸道標(biāo)本采集類型：鼻咽拭、痰和經(jīng)氣類型：鼻咽拭、痰和經(jīng)氣管采集的標(biāo)

7、本。管采集的標(biāo)本。采集時(shí)間：晨痰，且在取采集時(shí)間：晨痰，且在取痰前用清水反復(fù)漱口。痰前用清水反復(fù)漱口。方法：（方法：（1）自然咳痰法：）自然咳痰法：（2）氣管鏡下采集法；）氣管鏡下采集法；（3）氣管穿刺法。）氣管穿刺法。WBC 25/lp,上皮上皮10/lp。上呼吸道存在正常菌群，上呼吸道存在正常菌群，在采集標(biāo)本與結(jié)果分析時(shí)在采集標(biāo)本與結(jié)果分析時(shí)應(yīng)予考慮。應(yīng)予考慮。整理課件12（五）腦脊液與其它無菌體液采集（五）腦脊液與其它無菌體液采集臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置，置于無菌容器中立即送檢，不得保存于冰箱于無菌容器中立即送檢，不得保存于冰箱中。中。腦膜炎的主

8、要病原體：腦膜炎奈瑟菌、肺腦膜炎的主要病原體：腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌。炎鏈球菌、流感嗜血桿菌。整理課件13（六）眼、耳標(biāo)本采集（六）眼、耳標(biāo)本采集整理課件14（七）泌尿生殖道標(biāo)本采集（七）泌尿生殖道標(biāo)本采集性傳播性疾病取尿道口分泌物、外陰糜爛性傳播性疾病取尿道口分泌物、外陰糜爛面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物和面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物和前列腺液等。前列腺液等。 生殖道皰疹常穿刺抽取皰疹液。生殖道皰疹常穿刺抽取皰疹液。盆腔膿腫患者則于直腸子宮凹陷處穿刺取盆腔膿腫患者則于直腸子宮凹陷處穿刺取膿液。膿液。所有標(biāo)本收集后于所有標(biāo)本收集后于4保存直至培養(yǎng)保存直至培養(yǎng) 整理課件

9、15（八）創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本（八）創(chuàng)傷、組織和膿腫標(biāo)本損傷范疇較大的創(chuàng)傷，從不同部位采集多損傷范疇較大的創(chuàng)傷，從不同部位采集多份標(biāo)本份標(biāo)本 . 清除污物，以碘酒、酒精消毒皮清除污物，以碘酒、酒精消毒皮膚膚.開放性膿腫：無菌棉拭子采集膿液及病灶開放性膿腫：無菌棉拭子采集膿液及病灶深部分泌物。深部分泌物。封閉性膿腫：無菌干燥注射器抽取。封閉性膿腫：無菌干燥注射器抽取。疑為厭氧菌感染，取膿液后立即排凈注射疑為厭氧菌感染，取膿液后立即排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢。器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢。整理課件16標(biāo)本送檢標(biāo)本送檢標(biāo)本要求盡快送檢，否則影響陽(yáng)性率。標(biāo)本要求盡快送檢，否則影響陽(yáng)性

10、率。烈性傳染病標(biāo)本需專人護(hù)送。烈性傳染病標(biāo)本需專人護(hù)送。整理課件17二、標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)二、標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 1標(biāo)本必須注明姓名、年齡、性別、采集日期、臨床診斷、檢驗(yàn)項(xiàng)目等基本信自。 2仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本采集日期和送檢日期。延誤的標(biāo)本，一般情況下不接收。通常用于細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)本的存放不要超過24h。而病毒檢測(cè)的標(biāo)本可于4存放23天。 3檢查送檢容器是否完整，有無破損或滲漏等情況，若有則不予接收。 4標(biāo)本儲(chǔ)存、運(yùn)送方式不當(dāng)，不予接收。 5明顯被污染的標(biāo)本不予接收。6標(biāo)本量明顯不足的標(biāo)本，不予接收。 7同一天申請(qǐng)做同一實(shí)驗(yàn)的重復(fù)送檢標(biāo)本(血培養(yǎng)除外)，不予接收。 8對(duì)于烈性傳染病標(biāo)本的采

11、集和運(yùn)送應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)規(guī)定，要有完善的防護(hù)措施，按規(guī)定包裹及冷藏，附有詳細(xì)的采樣及送檢紀(jì)錄，由專人護(hù)送。 標(biāo)本是否合格，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性！標(biāo)本是否合格，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性！整理課件18三、檢查方法三、檢查方法（一）直接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查（二）病原體特異性抗原檢查（二）病原體特異性抗原檢查（三）病原體核酸檢查（三）病原體核酸檢查（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（五）血清學(xué)試驗(yàn)（五）血清學(xué)試驗(yàn)整理課件19（一）直接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查不染色標(biāo)本不染色標(biāo)本不染色標(biāo)本：不染色標(biāo)本：適用于檢查適用于檢查生活狀態(tài)下病原體的動(dòng)力生活狀態(tài)下病原體的動(dòng)力及

12、運(yùn)動(dòng)狀況及運(yùn)動(dòng)狀況。方法：方法：壓滴法、懸滴法壓滴法、懸滴法。意義：在不染色狀態(tài)下借意義：在不染色狀態(tài)下借助暗視野顯微鏡或相差顯助暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察病原菌的動(dòng)力、微鏡觀察病原菌的動(dòng)力、活動(dòng)方式。部分病原體可活動(dòng)方式。部分病原體可借此初步診斷，如梅毒螺借此初步診斷，如梅毒螺旋體。旋體。整理課件20（一）直接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查染色標(biāo)本染色標(biāo)本染色標(biāo)本目的：了解細(xì)菌的形態(tài)、染色性或觀察宿主細(xì)胞內(nèi)包涵體。方法：革蘭染色、墨汁染色、抗酸染色、熒光染色整理課件21革蘭染色革蘭染色陽(yáng)性球菌（陽(yáng)性球菌（GS）真菌孢子真菌孢子整理課件22革蘭染色革蘭染色整理課件23墨汁染色墨汁染色莢膜抗吞

13、噬30%-50%的患者伴有免疫功能低下等疾病， 8%左右的AIDS患者伴有隱球菌性腦膜炎，預(yù)后極差。中樞神經(jīng)系統(tǒng)存活與腦脊液中缺乏抗體和補(bǔ)體激活系統(tǒng)有關(guān)抗真菌治療:兩性霉素B,氟康唑?qū)捄袂v膜寬厚莢膜整理課件24整理課件25熒光染色熒光染色整理課件26SARS（severe acute respiratory syndrome ）病原體的確定。病原體的確定。直接顯微鏡檢查直接顯微鏡檢查電鏡檢查電鏡檢查整理課件27電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)為電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)為某種冠狀病毒某種冠狀病毒整理課件28無菌體液的直接鏡檢對(duì)病原體診斷具有一定意義。1.對(duì)正常菌群寄居腔道的分泌物圖片鏡檢可提示進(jìn)一步檢查的步驟、采取的方法和

14、確定分離鑒定病原體所需的培養(yǎng)基。整理課件293.由于臨床標(biāo)本中常含有一定的抗菌物質(zhì)，以致分離培養(yǎng)可為陰性，此時(shí)的鏡檢往往可能在診斷是起作用。4.熒光顯微鏡用于標(biāo)本經(jīng)熒光染色后直接檢出某些病原微生物5.電鏡檢查不常規(guī)用于臨床，對(duì)某些病毒感染卻有確診的價(jià)值。整理課件30(二)病原體特異性抗原檢查 利用抗原抗體之間的特異性反應(yīng)，用已知抗體檢測(cè)患者血清及其他體液中的待測(cè)抗原，借助免疫熒光技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、膠乳凝集試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳等技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中未知的病原體抗原，其診斷價(jià)值常以標(biāo)本不同而各異。 標(biāo)本中如果存在多種正常寄居微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定診斷。檢測(cè)細(xì)菌不同的抗原構(gòu)造，還

15、可分析細(xì)菌的菌群和血清型，如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬等整理課件31O1群霍亂弧菌的血清分型型別別名O抗原成份原型稻葉型A、C異型小川型A、B中間型彥島型A、B、C細(xì)菌的血清分型：細(xì)菌的血清分型：O1群霍亂弧菌的菌體抗原由群霍亂弧菌的菌體抗原由A、B、C三個(gè)抗原成三個(gè)抗原成份組成份組成利用抗原抗體之間的特異性反應(yīng)，用已知抗體檢測(cè)患者血清及其他體液中的待測(cè)抗原檢測(cè)細(xì)菌不同的抗原構(gòu)造，檢測(cè)細(xì)菌不同的抗原構(gòu)造，還可分析細(xì)菌的菌群和血清型，還可分析細(xì)菌的菌群和血清型，如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬整理課件32（三）病原體核酸的檢測(cè)（三）病原體核酸的檢測(cè)常用試驗(yàn)方法有：常

16、用試驗(yàn)方法有：PCR。polymerase chain reaction聚合酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡(jiǎn)稱鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡(jiǎn)稱PCR技術(shù)。技術(shù)。核酸探針雜交技術(shù)核酸探針雜交技術(shù)Realtime PCR1.基因芯片等基因芯片等整理課件33PCR技術(shù)簡(jiǎn)史DNA的復(fù)制核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明1985年，美國(guó)PE-Cetus公司的Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）基本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制最初采用E-coli DNA聚合酶進(jìn)行PCR，由于該酶不耐熱，使這一過程耗時(shí)，費(fèi)力，且易出錯(cuò)耐熱DNA聚合酶的應(yīng)用使得PCR能高效率的進(jìn)行，隨后PE-Cetus公司推出了第一臺(tái)PCR自動(dòng)化熱循環(huán)

17、儀1993年，Mullis等因此項(xiàng)技術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)?wù)碚n件34整理課件35PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)的PCRPCR反應(yīng)體系反應(yīng)體系4種dNTP混合物 各200umol/L引物 各10100pmol模板DNA 0. .12ugTaq DNA聚合酶 2. .5uMg2+ 1. .5mmol/L整理課件361234522557294時(shí)間（min）溫度（）PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬(wàn)倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性形成2條單鏈子鏈延伸DNA加倍整理課

18、件37PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)1234522557294時(shí)間（min）溫度（）適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬(wàn)倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性子鏈延伸DNA加倍DNA變性形成2條單鏈模板DNA95整理課件38PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)9550引物1引物2DNA引物整理課件39PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)50引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶整理課件40PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)72第1輪結(jié)束95第2輪開始整理課件41PCR的基本原理P

19、CR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)955072TaqTaqTaqTaq整理課件42PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)72第2輪結(jié)束整理課件43PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)模板DNA第1輪擴(kuò)增第2輪擴(kuò)增第3輪擴(kuò)增第4輪擴(kuò)增第5輪擴(kuò)增第6輪擴(kuò)增整理課件44PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳擴(kuò)增產(chǎn)物電泳整理課件45PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)靈敏度高n皮克(pg=10-12)量級(jí)擴(kuò)增到微克(ug=10-6)水平n能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞n病毒檢測(cè)的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFUn細(xì)菌檢測(cè)的最小檢出率為3個(gè)細(xì)菌簡(jiǎn)便、快速n一次性加好反應(yīng)液，24 小時(shí)完

20、成擴(kuò)增n擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析對(duì)標(biāo)本的純度要求低1.血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等組織的粗提DNA整理課件46皮克(pg=10-12)量級(jí)擴(kuò)增到微克(ug=10-6)水平能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞病毒檢測(cè)的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU細(xì)菌檢測(cè)的最小檢出率為3個(gè)細(xì)菌整理課件47整理課件48PCR的類型和應(yīng)用 研究基因克隆，DNA測(cè)序，分析突變 診斷細(xì)菌、病毒、寄生蟲檢測(cè)，診斷 人類基因組工程遺傳圖譜的構(gòu)建，DNA測(cè)序，表達(dá)圖譜 法醫(yī)犯罪現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本分析 腫瘤各種腫瘤檢測(cè) 其他整理課件49（三）病原體核酸的檢測(cè)（三）病原體核酸的檢測(cè)PCRPCR：一種體外基因擴(kuò)：一種體外基因擴(kuò)增技術(shù)，對(duì)目的

21、基因組增技術(shù)，對(duì)目的基因組DNA的信號(hào)進(jìn)行放大。的信號(hào)進(jìn)行放大。整理課件50（三）病原體核酸的檢測(cè)（三）病原體核酸的檢測(cè)Realtime PCR實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)熒光定量PCR：通過：通過起始點(diǎn)定量和熒光檢測(cè)系起始點(diǎn)定量和熒光檢測(cè)系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)累積熒光強(qiáng)度累積熒光強(qiáng)度而而實(shí)現(xiàn)核酸定量實(shí)現(xiàn)核酸定量的一種技的一種技術(shù)。術(shù)。廣泛應(yīng)用于結(jié)核和麻風(fēng)分廣泛應(yīng)用于結(jié)核和麻風(fēng)分枝桿菌、乙型肝炎病毒、枝桿菌、乙型肝炎病毒、丙型和戊型肝炎病毒、丙型和戊型肝炎病毒、HIV、巨細(xì)胞病毒的檢查、巨細(xì)胞病毒的檢查整理課件51（三）病原體核酸的檢測(cè)（三）病原體核酸的檢測(cè)Realtime PCR整理課件52將大量核酸片

22、段將大量核酸片段(寡核苷酸、寡核苷酸、PNA、cDNA、基因、基因組組DNA)以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式固定在載玻片、尼龍膜以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式固定在載玻片、尼龍膜和纖維素膜等載體上組成密集分子陣列，與熒光素和纖維素膜等載體上組成密集分子陣列，與熒光素或其他方式標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)雜交信或其他方式標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)而判斷樣品中靶分子的有無和數(shù)量。該號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)而判斷樣品中靶分子的有無和數(shù)量。該技術(shù)具有高通量、自動(dòng)化程度高、快速、樣品用量技術(shù)具有高通量、自動(dòng)化程度高、快速、樣品用量少、靈敏度高、特異性強(qiáng)、污染少等特點(diǎn)。病原微少、靈敏度高、特異性強(qiáng)、污染少等特點(diǎn)。病原微生物的生物

23、的16S rDNA及及23S rDNA序列近幾年被作序列近幾年被作為一個(gè)較理想的基因分類靶序列，其在進(jìn)化壓力下為一個(gè)較理想的基因分類靶序列，其在進(jìn)化壓力下保持了高度的保守性，同時(shí)又具有一定的變異性，保持了高度的保守性，同時(shí)又具有一定的變異性，基因芯片技術(shù)通常利用病原微生物的這一分子生物基因芯片技術(shù)通常利用病原微生物的這一分子生物學(xué)特性，實(shí)現(xiàn)多樣本多病原微生物的同時(shí)檢測(cè)。學(xué)特性，實(shí)現(xiàn)多樣本多病原微生物的同時(shí)檢測(cè)。（三）病原體核酸的檢測(cè)（三）病原體核酸的檢測(cè)基因芯片基因芯片整理課件53意義意義靈敏度高，是檢測(cè)病原體微生物最靈敏的靈敏度高，是檢測(cè)病原體微生物最靈敏的方法，但具有一定的假陽(yáng)性與假陰性。

24、方法，但具有一定的假陽(yáng)性與假陰性。特異性強(qiáng)，陽(yáng)性只表明存在某種病原體的特異性強(qiáng)，陽(yáng)性只表明存在某種病原體的核酸，是否正被感染應(yīng)結(jié)合臨床具體分析。核酸，是否正被感染應(yīng)結(jié)合臨床具體分析。特別適用于目前尚不能分離培養(yǎng)或很難分特別適用于目前尚不能分離培養(yǎng)或很難分離培養(yǎng)的微生物。離培養(yǎng)的微生物。適用于核酸變異的病原微生物，如病毒適用于核酸變異的病原微生物，如病毒整理課件54（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定明確感染病原體明確感染病原體提供體外抗微生物藥提供體外抗微生物藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果物敏感試驗(yàn)結(jié)果整理課件551.細(xì)菌感染性疾病病原體的分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)是微生物學(xué)檢驗(yàn)中確診的關(guān)鍵步驟分

25、離培養(yǎng)是微生物學(xué)檢驗(yàn)中確診的關(guān)鍵步驟 根據(jù)臨床癥狀、體征和鏡下檢查特征做出病原學(xué)初根據(jù)臨床癥狀、體征和鏡下檢查特征做出病原學(xué)初步診斷，選擇最合適的培養(yǎng)方法，主要是選擇適當(dāng)步診斷，選擇最合適的培養(yǎng)方法，主要是選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基、接種前的標(biāo)本處理和確定孵育條件，然的培養(yǎng)基、接種前的標(biāo)本處理和確定孵育條件，然后根據(jù)菌落性狀后根據(jù)菌落性狀(大小、色澤、氣味、邊緣、光滑度、大小、色澤、氣味、邊緣、光滑度、色素、溶血情況等色素、溶血情況等)和細(xì)菌的形態(tài)、染色性，檢測(cè)細(xì)和細(xì)菌的形態(tài)、染色性，檢測(cè)細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物接種實(shí)驗(yàn)菌生化反應(yīng)結(jié)果和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物接種實(shí)驗(yàn)(白喉白喉?xiàng)U菌桿菌)，對(duì)分離菌作出

26、鑒定，也可借助于微量鑒定系，對(duì)分離菌作出鑒定，也可借助于微量鑒定系統(tǒng)快速簡(jiǎn)便鑒定分離菌統(tǒng)快速簡(jiǎn)便鑒定分離菌 （四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定整理課件56細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定的結(jié)果評(píng)價(jià)：細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定的結(jié)果評(píng)價(jià)：正常人群的無菌體液中檢測(cè)到細(xì)菌，應(yīng)考慮細(xì)菌為感染的病原體。正常人群的無菌體液中檢測(cè)到細(xì)菌，應(yīng)考慮細(xì)菌為感染的病原體。存在正常菌群的標(biāo)本檢測(cè)到細(xì)菌，應(yīng)結(jié)合細(xì)菌的量考慮是否為致病菌。存在正常菌群的標(biāo)本檢測(cè)到細(xì)菌，應(yīng)結(jié)合細(xì)菌的量考慮是否為致病菌。如臨床表現(xiàn)支持感染，但培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮為標(biāo)本不合格、培養(yǎng)不恰當(dāng)?shù)纫蛉缗R床表現(xiàn)支持感染，但培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮為標(biāo)本不合格、培養(yǎng)不

27、恰當(dāng)?shù)纫蛩?。素。直接鏡檢找到病原體，而培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮有直接鏡檢找到病原體，而培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮有L細(xì)菌、厭氧菌或苛氧菌感染。細(xì)菌、厭氧菌或苛氧菌感染。整理課件572.不能人工培養(yǎng)的病原體感染性疾病將標(biāo)本接種易感動(dòng)物、雞胚或行細(xì)胞培養(yǎng)將標(biāo)本接種易感動(dòng)物、雞胚或行細(xì)胞培養(yǎng)（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定整理課件58病毒分離培養(yǎng)與鑒定的結(jié)果評(píng)價(jià)：從組織、血液以及腦脊液中分離到病毒可明確診斷。從呼吸道、腸道等分離到病毒，如該病毒人體不能長(zhǎng)期攜帶，有診斷價(jià)值，如麻疹病毒、流感病毒等。反之需相應(yīng)的臨床表現(xiàn)，才有病原學(xué)意義，如巨細(xì)胞病毒，腸道病毒等。陰性不能排除病毒感染。必須結(jié)合流行

28、病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、標(biāo)本來源及病毒種類加以分析。整理課件59（五）血清學(xué)試驗(yàn)（五）血清學(xué)試驗(yàn) 用已知病原體的抗原檢測(cè)患者血清中相應(yīng)抗體以診斷感染性疾病。 人體感染病原體后經(jīng)過一定時(shí)間產(chǎn)生特異性抗體，在體內(nèi)可維持?jǐn)?shù)月或更長(zhǎng)時(shí)間。 整理課件60雙份血清檢查：病程早期和晚期分別采血清2-3份檢查，雙份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考慮病原體感染單份血清檢查：特異性 IgM可作為感染性疾病的早期診斷指標(biāo)，且可區(qū)分原發(fā)與復(fù)發(fā)感染。方法有：凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接免疫熒光、放射免疫、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。整理課件61適用范圍血清學(xué)診斷可用于現(xiàn)癥診斷，還可以用于疾病追溯調(diào)查。血清學(xué)診斷對(duì)于某些病

29、原體不能培養(yǎng)或難以培養(yǎng)的疾病，可以提供診斷的依據(jù)， 整理課件62整理課件63抗原結(jié)構(gòu)O抗原抗原：化學(xué)成分為脂多糖；耐：化學(xué)成分為脂多糖；耐熱；是沙門菌分群依據(jù)；相應(yīng)抗熱；是沙門菌分群依據(jù)；相應(yīng)抗體為體為IgM抗體；與相應(yīng)抗體結(jié)合抗體；與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)顆粒狀凝集；。出現(xiàn)顆粒狀凝集；。H抗原抗原：化學(xué)成分為蛋白質(zhì)；不耐：化學(xué)成分為蛋白質(zhì)；不耐熱；有雙相鞭毛；沙門菌分型依據(jù)；熱；有雙相鞭毛；沙門菌分型依據(jù)；與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)絮狀凝集；相與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)絮狀凝集；相應(yīng)抗體為應(yīng)抗體為IgG抗體?？贵w。Vi抗原：不耐熱；抗原：不耐熱；能阻止能阻止O抗原與相抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合應(yīng)抗體結(jié)合整理課件64血清學(xué)

30、診斷肥達(dá)反應(yīng)原理原理：用已知傷寒沙門菌：用已知傷寒沙門菌O、H抗原和甲、抗原和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌乙、丙型副傷寒沙門菌H抗原與病人血清抗原與病人血清作半定量凝集試驗(yàn)，以測(cè)定受檢血清中有作半定量凝集試驗(yàn)，以測(cè)定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價(jià)。無相應(yīng)抗體及其效價(jià)。意義意義：協(xié)助診斷腸熱癥（傷寒與副傷寒）：協(xié)助診斷腸熱癥（傷寒與副傷寒）整理課件65幾種沙門菌抗原構(gòu)造組型O抗原H抗原第1相第2相A組甲型副傷寒沙門菌1，2，12a-B組乙型副傷寒沙門菌1，4，5，12b1，2鼠傷寒沙門菌1，4，5，12i1，2C組 丙型副傷寒沙門菌Vi6，7，c1，5豬霍亂沙門菌6，7，c1，5D組傷寒沙門菌Vi9

31、，12，d-腸炎沙門菌1，9，12g.m-整理課件66腸熱癥病人血清抗體出現(xiàn)情況100908070605040302010陽(yáng)性檢出率陽(yáng)性檢出率1 2 3 4 5 6 7 8發(fā)病周數(shù)發(fā)病周數(shù)整理課件67肥達(dá)反應(yīng)正常值O凝集效價(jià)凝集效價(jià)1：80H凝集效價(jià)凝集效價(jià)1：160副傷寒副傷寒H凝集效價(jià)凝集效價(jià)1：80 大于正常值具有診斷意義大于正常值具有診斷意義整理課件68O與H抗體的診斷意義：O、H效價(jià)均升高效價(jià)均升高：已感染傷寒：已感染傷寒O、H效價(jià)均低于正常值效價(jià)均低于正常值：未感染沙門菌或免：未感染沙門菌或免疫力低下疫力低下整理課件69生理鹽水生理鹽水 待檢血清待檢血清 診斷抗原診斷抗原傷寒傷寒O

32、傷寒傷寒H甲型副傷寒甲型副傷寒H肖沙門菌肖沙門菌H反應(yīng)反應(yīng)6小時(shí)小時(shí)4545觀察結(jié)果觀察結(jié)果1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640傷寒傷寒O效價(jià)效價(jià) 1:320傷寒傷寒H效價(jià)效價(jià) 1:640甲型副傷寒甲型副傷寒H效價(jià)效價(jià) 1:20肖沙門菌肖沙門菌H效價(jià)效價(jià) 1:20診斷意義：感染傷寒沙門菌診斷意義：感染傷寒沙門菌1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280最終稀釋最終稀釋 倍數(shù)倍數(shù)整理課件70傷寒帶菌者的檢測(cè)從標(biāo)本中分離出病原菌從標(biāo)本中分離出病原菌血清中檢出血清中檢出Vi抗體，效價(jià)抗體，效價(jià)1：10整理課件71第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第二節(jié)：病

33、原體耐藥性檢測(cè)1922年他發(fā)現(xiàn)了一種叫“溶菌酶”的物質(zhì)，發(fā)表了皮膚組織和分泌物中所發(fā)現(xiàn)的奇特細(xì)菌的報(bào)告。 但他自己無法發(fā)明一種提純青霉素的技術(shù)，致使此藥十幾年一直未得以使用 。1939年，瓦爾特弗洛和鮑利斯錢恩，重復(fù)了弗萊明的工作，證實(shí)了他的結(jié)果，然后提純了青霉素 1945年，弗萊明、弗洛里和錢恩共獲諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。 整理課件72第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)抗菌藥物是目前臨床使用最為廣泛的藥物，抗菌藥物是目前臨床使用最為廣泛的藥物，它的發(fā)現(xiàn)、研制和臨床應(yīng)用是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)史它的發(fā)現(xiàn)、研制和臨床應(yīng)用是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)史上的重要里程碑，使絕大多數(shù)微生物感染，上的重要里程碑，使絕大多數(shù)微

34、生物感染，尤其是細(xì)菌感染成為可治性疾病尤其是細(xì)菌感染成為可治性疾病 整理課件73抗生素壓力抗生素壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主耐藥菌株為主抗生素暴露抗生素暴露xxxxxxxxxx整理課件74體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)的目的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)的目的臨床分離菌株，如不能對(duì)抗生素敏感性進(jìn)臨床分離菌株，如不能對(duì)抗生素敏感性進(jìn)行預(yù)測(cè)，必須常規(guī)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。行預(yù)測(cè)，必須常規(guī)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。臨床治療效果差而考慮調(diào)整抗菌藥物時(shí)。臨床治療效果差而考慮調(diào)整抗菌藥物時(shí)。了解細(xì)菌耐藥的流行病學(xué)情況。了解細(xì)菌耐藥的流行病學(xué)情況。評(píng)價(jià)新抗菌藥物的抗菌譜和抗菌活性等。評(píng)價(jià)新抗菌藥物的抗菌譜和抗菌活性等。整理課件75抗微生物藥物

35、敏感試驗(yàn)抗微生物藥物敏感試驗(yàn)(antimicrobial susceptibility test, AST)對(duì)敏感性不對(duì)敏感性不能預(yù)測(cè)的臨床分離株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以指能預(yù)測(cè)的臨床分離株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以指導(dǎo)臨床選擇治療藥物。導(dǎo)臨床選擇治療藥物。整理課件76體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)的方法體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)的方法 常用的檢查細(xì)菌是否對(duì)藥物耐藥的方法有定性測(cè)常用的檢查細(xì)菌是否對(duì)藥物耐藥的方法有定性測(cè)定的紙片擴(kuò)散法、定量測(cè)定的稀釋法和定的紙片擴(kuò)散法、定量測(cè)定的稀釋法和E試驗(yàn)法。對(duì)試驗(yàn)法。對(duì)某些特定耐藥菌株的檢測(cè)除藥物敏感試驗(yàn)外還要附某些特定耐藥菌株的檢測(cè)除藥物敏感試驗(yàn)外還要附加特殊的酶檢測(cè)試驗(yàn)、基因檢測(cè)等方

36、法。加特殊的酶檢測(cè)試驗(yàn)、基因檢測(cè)等方法。常用方法有常用方法有:紙片擴(kuò)散法（紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer test）稀釋法（稀釋法（dilution test）E試驗(yàn)法（試驗(yàn)法（E test） 耐藥篩選試驗(yàn)?zāi)退幒Y選試驗(yàn)折點(diǎn)敏感試驗(yàn)折點(diǎn)敏感試驗(yàn)整理課件77含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的濃度梯度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度。KB紙片瓊脂擴(kuò)散法紙片瓊脂擴(kuò)散法 整理課件78試驗(yàn)程序整理課件79整理課件80按敏感(suscep

37、tible，S)、中度敏感(intermediate，I)、耐藥(resistant，R)報(bào)告。S：測(cè)試菌能被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制或殺滅。I：測(cè)試菌能被測(cè)定藥物大劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制，或在測(cè)定藥物濃集部位的體液(如尿)中被抑制。R：測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制。整理課件81細(xì)菌藥敏試驗(yàn)-液體稀釋法Minimal inhibitory concentration (MIC)，最低抑菌濃度：能夠抑制檢測(cè)菌肉眼可見生長(zhǎng)的：能夠抑制檢測(cè)菌肉眼可見生長(zhǎng)的最低藥物濃度稱為最低抑菌濃度。最低藥物濃度稱為最低抑菌濃度。整理課件82移液管2抗

38、抗藥物藥物倍稀釋倍稀釋抗生素移液管1先以水解酪蛋白液體培養(yǎng)基將抗生素作不同濃度稀釋，再種入待檢菌，整理課件83置35溫箱，培養(yǎng)24h。整理課件84結(jié)果判讀：肉眼觀察，以不出現(xiàn)肉眼可見生長(zhǎng)（混濁現(xiàn)象）的最低藥物濃度為該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC?？股匾埔汗?渾濁渾濁渾濁渾濁渾濁渾濁M I C整理課件85細(xì)菌藥敏試驗(yàn)- E-test法1.結(jié)合稀釋法和擴(kuò)散法原理和特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的一種操作簡(jiǎn)便(如同擴(kuò)散法)、精確測(cè)定MIC(如同稀釋法)的一種方法。2.在涂布有待測(cè)試菌的平板上放置1條內(nèi)含干化、穩(wěn)定、濃度由高到低呈指數(shù)梯度分布的商品化抗菌藥物塑料試條。35孵育1618h。3.抑菌圈和試條橫向相交處的讀數(shù)刻度即是待

39、測(cè)菌的MIC，參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷整理課件86細(xì)菌藥敏試驗(yàn)- E-test法青霉素的青霉素的MIC 解釋標(biāo)準(zhǔn)S 2R8結(jié)論：結(jié)論：MIC:1.0該肺炎鏈球菌對(duì)青霉素敏感該肺炎鏈球菌對(duì)青霉素敏感整理課件87缺點(diǎn)Etest試條價(jià)格昂貴，目前尚未廣泛使用整理課件88藥敏試驗(yàn)結(jié)果的解釋（藥敏試驗(yàn)結(jié)果的解釋（1）敏感（敏感（susceptible）：表示測(cè)試菌能被）：表示測(cè)試菌能被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制或殺滅。藥濃度所抑制或殺滅。耐藥（耐藥（resistant）：表示測(cè)試菌不能被）：表示測(cè)試菌不能被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血測(cè)定藥物

40、常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制或殺滅，治療無效。藥濃度所抑制或殺滅，治療無效。 整理課件89藥敏試驗(yàn)結(jié)果的解釋（藥敏試驗(yàn)結(jié)果的解釋（2）中介中介 (intermediate) : 測(cè)試菌能被測(cè)定藥物大劑量測(cè)試菌能被測(cè)定藥物大劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制，或在測(cè)定藥物濃度所抑制，或在測(cè)定藥物濃集部位的體液集部位的體液(如尿如尿)中被中被抑制抑制該范圍作為敏感與耐藥之間該范圍作為敏感與耐藥之間的緩沖區(qū)，避免由于微小技的緩沖區(qū)，避免由于微小技術(shù)誤差影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。術(shù)誤差影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。整理課件90（二）特殊的耐藥菌監(jiān)測(cè)的特殊試驗(yàn)（二）特殊的耐藥菌監(jiān)測(cè)的特殊試驗(yàn)

41、由于細(xì)菌存在一種或幾種耐藥機(jī)制，造由于細(xì)菌存在一種或幾種耐藥機(jī)制，造成了細(xì)菌的多重耐藥性。單一的藥敏試驗(yàn)已成了細(xì)菌的多重耐藥性。單一的藥敏試驗(yàn)已不能完全表示細(xì)菌的耐藥性，必須進(jìn)行一些不能完全表示細(xì)菌的耐藥性，必須進(jìn)行一些特殊的耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)。特殊的耐藥性監(jiān)測(cè)試驗(yàn)。1.耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測(cè)定耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測(cè)定2.氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測(cè)定氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測(cè)定3.耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測(cè)定耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測(cè)定4.-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)5.超廣譜超廣譜-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)整理課件911.耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測(cè)定（耐甲氧西林

42、葡萄球菌的篩選測(cè)定（methecillin resistance staphylococcus，MRS）包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌是目前導(dǎo)致醫(yī)院感染的重要病原菌。此類葡萄球菌具有多重耐藥性，即對(duì)全部一內(nèi)酰胺類抗菌藥物，包括青霉素族和頭孢菌素族以及臨床常用的其他多種抗菌藥物均耐藥。因此，此類葡萄球菌的早期檢出和確定具有重要臨床意義 整理課件921.耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測(cè)定（耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測(cè)定（methecillin resistance staphylococcus，MRS）1g苯唑西林紙片的抑苯唑西林紙片的抑菌圈直徑菌圈直徑10mm，或或MIC4g

43、/ml的金的金黃色葡萄球菌黃色葡萄球菌, 1g苯苯唑西林紙片的抑菌圈直唑西林紙片的抑菌圈直徑徑17mm，或，或MIC0.5g/ml的的凝固酶陰性葡萄球菌稱凝固酶陰性葡萄球菌稱耐甲氧西林葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌。整理課件93臨床意義臨床意義對(duì)所有對(duì)所有-內(nèi)酰胺類藥物均無效，并對(duì)氨基內(nèi)酰胺類藥物均無效，并對(duì)氨基糖甙類、大環(huán)內(nèi)脂類、克林霉素和四環(huán)素糖甙類、大環(huán)內(nèi)脂類、克林霉素和四環(huán)素等抗生素多重耐藥。等抗生素多重耐藥。治療首選藥物為萬(wàn)古霉素。治療首選藥物為萬(wàn)古霉素。整理課件942.氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測(cè)定選測(cè)定對(duì)多種抗菌藥物包括氨基糖苷類呈固有耐藥是腸

44、球菌的特點(diǎn)，故單用氨基糖苷類治療腸球菌感染無效。但如與一種作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物如青霉素類合用，則可發(fā)生協(xié)同作用而增強(qiáng)殺菌效力。如果腸球菌對(duì)氨基糖苷類產(chǎn)生了高耐藥性，這種聯(lián)合應(yīng)用就會(huì)無效。所以及時(shí)篩選出腸球菌中氨基糖苷類高耐藥株，有助于臨床調(diào)整和重新確定治療方案。 整理課件952.氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測(cè)定選測(cè)定定義定義: 對(duì)對(duì)30g萬(wàn)古霉萬(wàn)古霉素紙片抑菌圈直徑素紙片抑菌圈直徑19mm， 或或MIC32g/ml應(yīng)應(yīng)視為耐萬(wàn)古霉素腸球視為耐萬(wàn)古霉素腸球菌（菌（vancomycin resistant enteroccoccus，VRE）。）。 整理課件

45、96臨床意義臨床意義耐萬(wàn)古霉素腸球菌目前尚無有效的治療方耐萬(wàn)古霉素腸球菌目前尚無有效的治療方法，但是對(duì)青霉素敏感的法，但是對(duì)青霉素敏感的VRE可用青霉素可用青霉素和慶大霉素聯(lián)合治療，若對(duì)青霉素耐藥而和慶大霉素聯(lián)合治療，若對(duì)青霉素耐藥而不是高水平耐氨基糖苷類可用壁霉素和慶不是高水平耐氨基糖苷類可用壁霉素和慶大霉素。另外氯霉素、紅霉素、四環(huán)素大霉素。另外氯霉素、紅霉素、四環(huán)素（或多西環(huán)素、或米諾環(huán)素）及利福平可（或多西環(huán)素、或米諾環(huán)素）及利福平可用于用于VRE株。株。整理課件973.耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測(cè)定耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測(cè)定定義：定義：1g苯唑西林苯唑西林紙片的抑菌圈直徑紙片的抑菌圈

46、直徑2g/ml應(yīng)視應(yīng)視為耐青霉素肺炎鏈球?yàn)槟颓嗝顾胤窝祖溓蚓?。菌?整理課件98臨床意義臨床意義耐青霉素的肺炎鏈球菌對(duì)氨芐西林、耐青霉素的肺炎鏈球菌對(duì)氨芐西林、 氨芐氨芐西林西林/舒巴坦、舒巴坦、 頭孢克肟、頭孢克肟、 頭孢唑啉的臨頭孢唑啉的臨床治療療效很差，治療時(shí)參考藥敏結(jié)果選床治療療效很差，治療時(shí)參考藥敏結(jié)果選擇藥物，經(jīng)驗(yàn)治療重癥感染時(shí)，可用頭孢擇藥物，經(jīng)驗(yàn)治療重癥感染時(shí)，可用頭孢曲松或頭孢噻肟聯(lián)合萬(wàn)古霉素用藥。曲松或頭孢噻肟聯(lián)合萬(wàn)古霉素用藥。整理課件994.-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)青霉素族和頭孢菌素族抗生素的基本結(jié)構(gòu)青霉素族和頭孢菌素族抗生素的基本結(jié)構(gòu)一內(nèi)酰胺環(huán)一內(nèi)酰胺環(huán)整理課件1

47、00一內(nèi)酰胺酶能裂解青霉素族和頭孢菌素族抗生素的基本結(jié)構(gòu)一內(nèi)酰胺環(huán)，從而使其喪失抗菌活性。 整理課件101快速檢測(cè)快速檢測(cè)-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶 陽(yáng)性陽(yáng)性整理課件102-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)的意義內(nèi)酰胺酶檢測(cè)的意義-內(nèi)酰胺酶：可水解內(nèi)酰胺酶：可水解-內(nèi)酰胺類抗生素。內(nèi)酰胺類抗生素。臨床意義：（臨床意義：（1）流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以）流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及卡拉莫拉漢菌等陽(yáng)性，表示對(duì)青霉素、氨卞西及卡拉莫拉漢菌等陽(yáng)性，表示對(duì)青霉素、氨卞西林以及阿莫西林耐藥。（林以及阿莫西林耐藥。（2）葡萄球菌屬以及腸）葡萄球菌屬以及腸球菌屬等，陽(yáng)性表示對(duì)青霉素、氨基組青霉素、球菌屬等，陽(yáng)性表示對(duì)青霉素、氨基組青霉素

48、、羧基組青霉素以及脲基組青霉素耐藥羧基組青霉素以及脲基組青霉素耐藥整理課件1035.超廣譜超廣譜-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶(extend spectum -lactamase, ESBL)的檢測(cè)的檢測(cè)超廣譜超廣譜-內(nèi)酰胺酶是由質(zhì)粒介導(dǎo)的基因所編碼，可水內(nèi)酰胺酶是由質(zhì)粒介導(dǎo)的基因所編碼，可水解青霉素類、頭孢菌素和氨曲南，主要見于解青霉素類、頭孢菌素和氨曲南，主要見于大腸埃希大腸埃希菌、肺炎克雷伯克、產(chǎn)酸雷伯菌及奇異變形桿菌菌、肺炎克雷伯克、產(chǎn)酸雷伯菌及奇異變形桿菌。篩選方法：雙紙片擴(kuò)散法、三相試驗(yàn)和篩選方法：雙紙片擴(kuò)散法、三相試驗(yàn)和E試驗(yàn)試驗(yàn)雙紙片協(xié)同試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠、成本不高，雙紙片協(xié)同試驗(yàn)操作

49、簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠、成本不高，是臨床上較常開展的項(xiàng)目。是臨床上較常開展的項(xiàng)目。 整理課件104雙紙片擴(kuò)散法雙紙片擴(kuò)散法藥物：頭孢他啶30 ug頭孢他啶/克拉維酸 30/10 ug以及頭孢噻肟30 ug頭孢噻肟/克拉維酸30/10 ug結(jié)果判讀：對(duì)兩組中任何一個(gè)藥物，在加克拉維酸后，抑菌圈與不加克拉維酸的相比，增加值 5mm 時(shí)，判定為產(chǎn)ESBL（如，頭孢他啶的抑菌圈直徑16；頭孢他啶/克拉維酸的抑菌圈22 ）。整理課件105臨床意義臨床意義產(chǎn)產(chǎn)ESBL細(xì)菌細(xì)菌,不論體外藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果不論體外藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果如何如何, 對(duì)青霉素類、對(duì)青霉素類、1-3代頭孢菌素類和代頭孢菌素類和氨曲南治療均無效，藥

50、敏也全部修改成耐氨曲南治療均無效，藥敏也全部修改成耐藥。藥。整理課件106提提 綱綱第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)整理課件107臨床常見病原體為：細(xì)菌、病毒、真菌、臨床常見病原體為：細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲、支原體、衣原體以及立克次體等。寄生蟲、支原體、衣原體以及立克次體等

51、。整理課件108（一）細(xì)菌感染檢查項(xiàng)目的選擇（一）細(xì)菌感染檢查項(xiàng)目的選擇細(xì)菌感染性疾病一般均細(xì)菌感染性疾病一般均需進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷以明確病因。需進(jìn)行細(xì)菌學(xué)診斷以明確病因。三個(gè)方面著手：三個(gè)方面著手：檢測(cè)細(xì)菌或其抗原檢測(cè)細(xì)菌或其抗原-主要包括直接涂片顯主要包括直接涂片顯微鏡檢查、培養(yǎng)、抗原檢測(cè)與分析。微鏡檢查、培養(yǎng)、抗原檢測(cè)與分析。檢測(cè)抗體。檢測(cè)抗體。檢測(cè)檢測(cè)細(xì)菌遺傳物質(zhì)細(xì)菌遺傳物質(zhì)-主要包括基因探針技術(shù)和主要包括基因探針技術(shù)和PCR技術(shù)。技術(shù)。 難培養(yǎng)或培養(yǎng)要求高的細(xì)菌：綜合運(yùn)用免疫學(xué)或分子生物難培養(yǎng)或培養(yǎng)要求高的細(xì)菌：綜合運(yùn)用免疫學(xué)或分子生物學(xué)檢測(cè)，如結(jié)核分枝桿菌感染以及幽門螺桿菌感染等。學(xué)檢

52、測(cè)，如結(jié)核分枝桿菌感染以及幽門螺桿菌感染等。細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法。細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法。 整理課件109（二）病毒感染檢查項(xiàng)目的選擇（二）病毒感染檢查項(xiàng)目的選擇在易感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式進(jìn)行增殖的非細(xì)在易感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式進(jìn)行增殖的非細(xì)胞型微生物胞型微生物病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢查包括病毒分離與鑒病毒分離與鑒定定、病毒核酸與抗原的直接檢出病毒核酸與抗原的直接檢出，以及，以及特特異性抗體的檢測(cè)異性抗體的檢測(cè)。 病毒分離與鑒定：細(xì)胞培養(yǎng)。病毒分離與鑒定：細(xì)胞培養(yǎng)。早期診斷手段：多檢測(cè)病毒抗原、特異性早期診斷手段：多檢測(cè)病毒抗原、特異性抗體或核酸?？贵w或核酸。整理課件110

53、（三）真菌感染檢查項(xiàng)目的選擇與應(yīng)用評(píng)價(jià)（三）真菌感染檢查項(xiàng)目的選擇與應(yīng)用評(píng)價(jià)真菌是以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料的真核細(xì)胞型微生物。真菌的微生物學(xué)診斷手段主要包括直接檢查、培養(yǎng)檢查、免疫學(xué)試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn) 整理課件111直接顯微鏡檢查：初步明確真菌感染直接顯微鏡檢查：初步明確真菌感染整理課件112分離培養(yǎng)：明確何種真菌感染分離培養(yǎng)：明確何種真菌感染大多數(shù)真菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，常用沙保氏培養(yǎng)基 （SDA）培養(yǎng)。淺部病原性真菌的最適溫度為2228，生長(zhǎng)緩慢，大多于14周出現(xiàn)典型菌落。深部病原性真菌培養(yǎng)在37中生長(zhǎng)最好，生長(zhǎng)較快，經(jīng)3-4天即長(zhǎng)出菌落。整理課件113真菌感染檢查項(xiàng)目的選擇與應(yīng)用評(píng)價(jià)真菌感染檢查項(xiàng)

54、目的選擇與應(yīng)用評(píng)價(jià)真菌抗原檢測(cè)：只適合于血清與腦脊液中真菌抗原檢測(cè)：只適合于血清與腦脊液中隱球菌、念珠菌以及莢膜組織胞漿菌等。隱球菌、念珠菌以及莢膜組織胞漿菌等。真菌抗體檢測(cè)：深部真菌的檢測(cè)。真菌抗體檢測(cè)：深部真菌的檢測(cè)。整理課件114（四）寄生蟲感染檢查項(xiàng)目的選擇（四）寄生蟲感染檢查項(xiàng)目的選擇與應(yīng)用評(píng)價(jià)與應(yīng)用評(píng)價(jià)直接顯微鏡檢查：觀直接顯微鏡檢查：觀察寄生蟲生活史的各察寄生蟲生活史的各階段，是寄生蟲感染階段，是寄生蟲感染的主要診斷依據(jù)。的主要診斷依據(jù)。寄生蟲抗體檢測(cè)：輔寄生蟲抗體檢測(cè)：輔助診斷。助診斷。整理課件115支原體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)支原體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)支原體是一群介于細(xì)

55、菌與病毒之間，可通過濾菌器、無細(xì)胞壁，能在無生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核微生物。 與人類疾病有關(guān)的是肺炎支原體、唾液支原體、口腔支原體、人型支原體、發(fā)酵支原體和微小株支原體。 整理課件116支原體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)支原體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)直接顯微鏡檢查：無價(jià)值。直接顯微鏡檢查：無價(jià)值。分離培養(yǎng)：陽(yáng)性可明確診斷。分離培養(yǎng)：陽(yáng)性可明確診斷。目前臨床多檢測(cè)支原體抗原與核目前臨床多檢測(cè)支原體抗原與核酸，用于早期快速診斷。酸，用于早期快速診斷。整理課件117螺旋體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)螺旋體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)暗視野顯微鏡檢查：是診斷早暗視野顯微鏡檢查：是診斷早期梅毒唯一快速、可靠的

56、方法，期梅毒唯一快速、可靠的方法，尤其對(duì)已出現(xiàn)硬下疳而梅毒血尤其對(duì)已出現(xiàn)硬下疳而梅毒血清反應(yīng)仍呈陰性者意義更大清反應(yīng)仍呈陰性者意義更大整理課件118梅毒血清學(xué)試驗(yàn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（1）過篩試驗(yàn)：）過篩試驗(yàn)：RPR、VDRL、TRUST（2）確診試驗(yàn)：）確診試驗(yàn)：FTA-ABS、MHA-TP、TPPA螺旋體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)螺旋體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)TPHA試驗(yàn)試驗(yàn)整理課件119螺旋體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)螺旋體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)腦脊液檢查：腦脊液檢查：VDRL試驗(yàn)陽(yáng)性等有診斷價(jià)值。腦脊液試驗(yàn)陽(yáng)性等有診斷價(jià)值。腦脊液PCR檢測(cè)，可以快速準(zhǔn)確的診斷神經(jīng)性梅毒。檢測(cè)，可以快速準(zhǔn)確的診

57、斷神經(jīng)性梅毒。TP-PCR：TPPCR檢測(cè)梅毒螺旋體檢測(cè)梅毒螺旋體DNA，特異性，特異性很強(qiáng)，敏感性很高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進(jìn)方很強(qiáng)，敏感性很高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進(jìn)方法。法。PCR檢測(cè)梅毒螺旋體的檢測(cè)梅毒螺旋體的DNA，其敏感性、特異性，其敏感性、特異性均優(yōu)于血清學(xué)方法均優(yōu)于血清學(xué)方法 整理課件120Howard Taylor Ricketts立克次體檢測(cè)立克次體檢測(cè)整理課件121斑疹傷寒群立克次體目立克次體屬東方體屬埃立克體屬巴通體屬柯克斯體屬恙蟲病群斑點(diǎn)熱群犬埃立克體群腺熱埃立克體群嗜吞噬細(xì)胞埃立克體群立克次體目的類別立克次體目的類別整理課件122柯克斯體柯克斯體整理課件12

58、3培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性專性細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)的原核細(xì)胞性微生物對(duì)多種抗生素敏感引起自然疫源性疾病，且為人畜共患整理課件124 病原體 所致疾病立克次體屬 斑疹傷寒（流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、 加拿大斑疹傷寒） 斑點(diǎn)熱（洛磯山斑點(diǎn)熱、紐扣熱、昆士蘭熱、 立克次體痘、北亞蜱傳斑疹傷寒）柯克斯體屬 Q熱東方體屬 恙蟲病群（恙蟲?。┌Ａ⒖梭w屬 犬埃立克體群（人單核細(xì)胞埃立克體?。?腺熱埃立克體群（腺熱埃立克體） 嗜吞噬細(xì)胞埃立克體群（人粒細(xì)胞埃立克體病）巴通體屬 戰(zhàn)壕熱、貓抓病、Oroya熱、秘魯疣、桿菌性血管瘤、 心內(nèi)膜炎整理課件125外斐試驗(yàn)為非特異性血清學(xué)診斷試驗(yàn)，用于斑疹傷寒、斑點(diǎn)熱和恙蟲病的確診特

59、異性血清學(xué)試驗(yàn)有免疫熒光試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等 整理課件126衣原體是一類嚴(yán)格在細(xì)胞內(nèi)寄生，有獨(dú)特發(fā)育衣原體是一類嚴(yán)格在細(xì)胞內(nèi)寄生，有獨(dú)特發(fā)育周期，能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物。周期，能通過細(xì)菌濾器的原核細(xì)胞型微生物。衣原體屬分為四個(gè)種衣原體屬分為四個(gè)種l沙眼衣原體沙眼衣原體l肺炎衣原體肺炎衣原體l鸚鵡熱衣原體鸚鵡熱衣原體l獸類衣原體獸類衣原體整理課件127衣原體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)衣原體感染檢查項(xiàng)目的選擇與評(píng)價(jià)直接顯微鏡檢查：檢直接顯微鏡檢查：檢查衣原體包涵體可提查衣原體包涵體可提供早期初步診斷。供早期初步診斷。分離培養(yǎng)：陽(yáng)性可明分離培養(yǎng)：陽(yáng)性可明確診斷。確診斷。目前

60、臨床多檢測(cè)衣原目前臨床多檢測(cè)衣原體抗原與核酸，用于體抗原與核酸，用于早期快速診斷。早期快速診斷。整理課件128第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第一節(jié)：標(biāo)本的采集運(yùn)送、實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第二節(jié)：病原體耐藥性檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第四節(jié)：病毒性肝炎檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)整理課件129甲型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)甲型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)丙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)丙型肝炎病