安徽師范大學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)課考題

1、1. 什么是減數(shù)分裂？主要有哪些特征?減數(shù)分裂是一種特殊方式的細(xì)胞分裂，僅在配子形成過(guò)程中發(fā)生。這一過(guò)程的特 點(diǎn)是：連續(xù)進(jìn)行兩次核分裂，而染色體只復(fù)制一次，結(jié)果形成四個(gè)核，每個(gè)核只 含單倍數(shù)的染色體，即染色體數(shù)減少一半，所以稱作減數(shù)分裂。另一個(gè)特點(diǎn)是前 期特別長(zhǎng)，而且變化復(fù)雜，包括同源染色體的配對(duì)、交換與分離等。2. 在哪些器官中可以觀察到減數(shù)分裂？其中哪些是理想的實(shí)驗(yàn)材料？在適當(dāng)?shù)臅r(shí)期采集植物的花蕾或動(dòng)物的精巢。蠶豆花蕾，短腳斑腿蝗精巢。3. 在減數(shù)分裂制片時(shí)，選擇合適的時(shí)期尤為重要，以蠶豆花蕾為例說(shuō)明選擇過(guò)程。1）取已固定好的花序，按其花蕾大小，排列在小培養(yǎng)皿中 2 ）撥開(kāi)花蕾，先 取中等

2、大小的花蕾，取出花藥，放在載玻片上 3）加一滴醋酸洋紅在花藥上，用 鑷子夾碎花藥壁，散出花粉母細(xì)胞 4 ）加蓋玻片，吸干周圍染色液，用拇指適力 下壓5）鏡檢4. 在植物體的哪些部分可以觀察到有絲分裂？其中哪些是制片比較理想的實(shí)驗(yàn) 材料？高等植物體細(xì)胞的有絲分裂，主要發(fā)生在莖尖、根尖、形成層等分生組織。洋蔥 根尖，蠶豆根尖。5. 什么是固定？我們所做的實(shí)驗(yàn)中，最常用的固定劑成分是什么？ 固定是利用化學(xué)或物理的方法，使固定劑迅速透入組織和細(xì)胞， 將其殺死，使蛋 白質(zhì)等物質(zhì)變性， 但在形態(tài)結(jié)構(gòu)上盡量保持原來(lái)活著時(shí)的完整和真實(shí)狀態(tài)， 如細(xì) 胞內(nèi)染色體的分裂形態(tài)。 同時(shí)固定更易于染色， 可以較清楚的顯現(xiàn)

3、細(xì)胞在生活時(shí) 不易看清的結(jié)構(gòu)。卡諾固定液： 3份無(wú)水乙醇， 1份冰醋酸（現(xiàn)配現(xiàn)用） 。6. 植物根尖染色體制片中，預(yù)處理的方法有哪些？作用是什么？ 冰凍預(yù)處理，藥物預(yù)處理。對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，固定染色體，使其停留在某一 時(shí)期便于觀察。藥劑處理：可以用作染色體預(yù)處理的化學(xué)藥品，主要有生物堿、甙類、酸類及其 他物質(zhì)；最常用的 化學(xué)藥品有秋水仙素、 8羥基喹啉及對(duì)二氯苯。其作用是： 阻止或破壞紡垂體微管的形成， 由于沒(méi)有紡垂體的作用， 細(xì)胞 有絲分裂過(guò)程， 被阻抑在細(xì)胞分裂中期階段， 從而累計(jì)比較多的處于細(xì)胞分裂 中期的染 色體圖象。 促進(jìn)染色體濃縮變短， 減少染色體之間相互纏繞重疊， 有利染色體的高

4、度分散。 改變胞質(zhì)粘度， 促進(jìn)染色體清晰， 促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)清潔。7. 植物根尖的解離主要有哪兩種方法？簡(jiǎn)述其主要程序。 酸水解：一般采用鹽酸解離。 用鹽酸解離因材料不用而不同。 洋蔥根尖用 0.1mol/L 鹽酸在60°C下處理8min，蠶豆根尖用上述濃度溫度時(shí)間延長(zhǎng)15min。之后用70% 酒精清洗幾次，把殘留的酸洗掉以免影響染色體著色。酶處理：將固定的洋蔥根尖用 0.1mol/L 的醋酸鈉洗 2 次，然后放入酶液中（ 2% 果膠酶和1%纖維素酶等量混合），在25 °C恒溫箱中處理，此時(shí)根尖較 柔軟，將根尖取出， 用 0.1mol/L 醋酸鈉洗 2 次，再放入 60 

5、6;C0. 1 mol/L 鹽酸溶液中水解2min。最后用45%醋酸鈉清洗根尖8. 植物根尖壓片過(guò)程要注意哪些方面？取一染色的根尖置于載玻片中央，用吸水紙洗去多余的溶液，加1滴新鮮的染液，蓋上蓋玻片后，在蓋玻片上蓋上一些吸水紙，應(yīng)以左手的拇指和中指固定蓋片的 位置，用鉛筆或橡皮輕輕敲打，使細(xì)胞核染色體均勻分散。9. 植物根尖的解離有何目的？酸解離有何優(yōu)點(diǎn)？目的是使分生組織細(xì)胞之間的果膠質(zhì)層水解掉，并使細(xì)胞壁軟化，便于壓片.酸解離優(yōu)點(diǎn)是較酶水解速度快，強(qiáng)度大，但用酸處理后，必須要用70%酒精清洗，把殘留的酸洗掉，以免影響染色體著色。10. 低滲處理的作用是什么？試說(shuō)明這種處理的關(guān)鍵步驟。使紅細(xì)胞

6、解體，白細(xì)胞膨脹，染色體分散。取5ML 37 °C低溫的0.075M KCI溶液加入離心管中，用滴管輕輕沖打成細(xì)胞懸液，放入37 °C溫箱中靜置20min。11. 果蠅唾腺染色體有哪些形態(tài)特征？果蠅唾腺染色體比果蠅的其他體細(xì)胞染色體要長(zhǎng)100-200倍，體積大上千倍，故有稱巨大染色體。所有染色體的著絲點(diǎn)聚集在一起形成染色中心，因此唾腺染 色體不但能進(jìn)行配對(duì)，且所有染色體的著絲點(diǎn)聚集在一起形成染色中心， 因此唾 腺細(xì)胞染色體形態(tài)不是8條個(gè)別染色體，而是由染色中心向空間伸展的 5條長(zhǎng) 臂和1條短臂構(gòu)成。還表現(xiàn)出有明顯的橫紋，數(shù)目和空間排列是恒定的，代表著 一些基因的位置，具有種

7、的特異性。12. 果蠅雜交試驗(yàn)中，親本為何要用處女蠅？如何收集？只有親本是處女蠅才能保證雌蠅的生殖器里無(wú)精子，若非處女蠅則可能使果蠅后 代不是所用雄蠅交配得來(lái)的。一般來(lái)說(shuō)，剛羽化出來(lái)的果蠅在12小時(shí)之內(nèi)是不進(jìn)行交配的，所以這段時(shí)間內(nèi) 選出的雌蠅即為處女蠅。為保險(xiǎn)起見(jiàn)，可在羽化后10h內(nèi)挑選。13. 秋水仙素處理為何可以誘發(fā)多倍體的形成？秋水仙素的誘導(dǎo)作用在于阻止有絲分裂細(xì)胞紡錘絲的形成，但對(duì)染色體的結(jié)構(gòu)和復(fù)制無(wú)顯著影響。若濃度適合，藥劑在細(xì)胞中擴(kuò)散后，不致發(fā)生嚴(yán)重的毒害，這 樣縱裂為二的染色體不能向兩極分開(kāi)， 因而便產(chǎn)生了染色體加倍的核。當(dāng)藥劑作 用消除后，由于多倍體細(xì)胞繼續(xù)分裂，便得到多倍體

8、組織，以后則產(chǎn)生新的多倍 體植株。14. 扼要敘述空氣干燥法制片的步驟。滴片后，不加熱或任何處理，使載片在室溫下自然干燥的方法。 收集細(xì)胞一細(xì)胞 經(jīng)秋水仙素處理一低滲處理一離心一充分固定一滴片。 （用吸管吸取細(xì)胞懸液自 1m高處滴在冰凍的載玻片上，一片1-3滴，晾干，收存）15. 可用于常規(guī)核型分析的中期分裂相要具備哪些因素?染色體清晰，數(shù)目為46條，大小合適，分散度合適，背景干凈16. 人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中，植物血球凝集素（PHA ）、秋水仙素、肝素鈉和 雙抗分別有何作用？外周血淋巴細(xì)胞是不能增殖的分化細(xì)胞群， 在體外無(wú)菌培養(yǎng)條件下，若于培養(yǎng)基 中植物凝集素（PHA）則可刺激處G。期的淋

9、巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，重新有絲 分裂的能力，經(jīng)一段時(shí)間的培養(yǎng)即可獲得大量分裂期細(xì)胞以供染色體分析。秋水仙素（或秋水酰胺）可通過(guò)干擾微管組裝而抑制紡錘絲形成，使細(xì)胞分裂順利 進(jìn)入后期而停滯于中期，從而可在短期內(nèi)積累大量最適于進(jìn)行染色體分裂中期分 裂相。此外，秋水仙素還能使染色單體縮短、分開(kāi)，使染色體呈現(xiàn)明顯形而利于 辨認(rèn)。肝素，主要起抗凝血作用雙抗，為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染17 果蠅雌雄（成蟲(chóng)期）鑒別最主要或最準(zhǔn)確的方法是什么？最準(zhǔn)確的是看性梳，性梳是雄果蠅的第二性征，雄果蠅的第一對(duì)前足的第一個(gè)跗 節(jié)上，因形狀與梳頭的梳子非常相似，又與性別有關(guān)而得名。雌果蠅沒(méi)有這個(gè)結(jié) 構(gòu)。但是性梳這一性狀需要

10、借助顯微鏡觀察。除了性梳之外，還有一些其它性狀都可以用肉眼直接觀察。具體如下： 雄蠅，個(gè)體較小，腹部條紋3 （腹片4片），腹部末端圓鈍，顏色深。雌蠅，個(gè)體較大，腹部條紋5 （腹片6片），腹部末端尖，顏色淺。18. 本學(xué)期我們做了哪些遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)？通過(guò)這些實(shí)驗(yàn)?zāi)懔私夂驼莆樟四男┥飳W(xué)基本實(shí)驗(yàn)技能?本學(xué)期一共做了六次遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)分別是：1. 植物細(xì)胞有絲分裂及染色體行為觀察： 通過(guò)本次試驗(yàn)掌握制作植物根尖有絲分裂裝片的技術(shù)。2. 減數(shù)分裂制片及染色體行為觀察：掌握減數(shù)分裂制片方法。3. 果蠅生活史及性狀觀察：掌握試驗(yàn)果蠅的飼養(yǎng)管理技術(shù)。4. 果蠅的唾液腺染色體制片及觀察：掌握解剖果蠅幼蟲(chóng)、分離唾腺的方

11、法，掌握 唾腺染色體的制片技術(shù)。5. 植物多倍體激發(fā)、制片及觀察：掌握了植物多倍體人工誘發(fā)技術(shù)及多倍體鑒定 方法。6. 人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及制片：掌握了人體外周血淋巴細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)法與人體細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備和核型分析的方法，學(xué)會(huì)了人體細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的基 本操作技術(shù)。19. 植物染色體制片時(shí)，我們使用的是什么染色液？人類染色體染色時(shí)我們使用的是何種染色液，如何配制？植物染色體制片時(shí)使用的是改良苯酚品紅染色液人類染色體染色時(shí)我們使用的是吉姆薩染液（Giemsa），配置：稱Giemsa粉劑 1g置研缽中，加少量甘油研磨至無(wú)顆粒為止，再加入甘油共 50ml，放在56C 60 C的溫箱或水浴內(nèi)12

12、h，促使溶化。冷卻后加入甲醇 50ml，室溫放置23d 后，過(guò)濾使用。同時(shí)將 Giemsa原液1份加片pH7.4的磷酸緩沖液9份稀釋，或在10ml磷酸緩沖液（pH7.4 ）中加入1015滴Giemsa原液，應(yīng)隨用隨配20. 核型分析有何作用?是細(xì)胞遺傳學(xué)分析的基本方法：研究染色體形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能的相互關(guān)系，可根據(jù)染色體數(shù)目變異判斷病因。核型分析對(duì)于人類醫(yī)學(xué)遺傳研究及臨床應(yīng)用都有重大意義。如腫瘤細(xì)胞的核型分 析已被應(yīng)用于腫瘤的臨床診斷、愈后極藥物療效的觀察；通過(guò)培養(yǎng)后的淋巴細(xì)胞 或皮膚成纖維細(xì)胞的核型分析，可以對(duì)人的染色體疾病進(jìn)行診斷，而對(duì)培養(yǎng)后的 羊水中胎兒脫屑細(xì)胞或胎盤絨毛膜細(xì)胞的核型分析則

13、可用于胎兒性別及是否患 有染色體病的產(chǎn)前診斷。21. 微核檢測(cè)有何作用？微核試驗(yàn)在對(duì)外來(lái)化合物（如藥品、食品添加劑、農(nóng)藥、化妝品、環(huán)境污染物等 ） 遺傳毒性和職業(yè)暴露人群遺傳損害監(jiān)測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)生態(tài)環(huán)境檢測(cè)方面，在診斷和預(yù)防肝癌、食管癌、肺癌等惡性腫瘤方面得到了大量的應(yīng)用。微核試驗(yàn)最大的優(yōu)點(diǎn)是 經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單、快速，而國(guó)內(nèi)外大量的對(duì)試驗(yàn)研究，比較一致的看法是該方法在敏 感性、特異性和準(zhǔn)確性方面，與經(jīng)典的染色體畸變分析方法基本相當(dāng)川。因而， 特別適合作為大量化合物和現(xiàn)場(chǎng)人群初篩的實(shí)驗(yàn)方法。22. 當(dāng)你進(jìn)行果蠅性別鑒定時(shí)，果蠅蘇醒了，你如何處理？應(yīng)迅速將果蠅放入麻醉瓶中繼續(xù)麻醉23. 如何獲得果蠅唾腺？過(guò)程中應(yīng)注意哪些細(xì)節(jié)? 把載玻片放在雙筒解剖鏡下，其上滴上一滴生理鹽水。取幼蟲(chóng)置于生理鹽水中， 兩手各握一枚解剖針，以左手的針壓在幼蟲(chóng)末端 1/3 處，固定幼蟲(chóng)，右手的針尖 壓住幼蟲(chóng)頭部，用適當(dāng)?shù)牧ο蚯?/p>