實驗七脂肪酸的β-氧化

1、脂肪酸的脂肪酸的氧化氧化一、目的一、目的了解脂肪酸的了解脂肪酸的氧化作用。氧化作用。二、原理二、原理 在肝臟中，脂肪酸經(jīng)在肝臟中，脂肪酸經(jīng)氧化作用生成乙酰輔酶氧化作用生成乙酰輔酶A 。2分子分子乙酰輔酶乙酰輔酶A可縮合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，可縮合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成也可還原生成羥丁酸。乙酰乙酸、羥丁酸。乙酰乙酸、羥丁酸和丙酮總稱羥丁酸和丙酮總稱為酮體。為酮體。 氧氧化化的的生生化化歷歷程程 乙酰乙酰CoACoAFAD FADH2 NAD +NADHRCH2CH2CO-SCoA脂酰脂酰CoACoA 脫氫脫氫酶酶脂酰脂酰CoACoA -烯脂酰烯脂酰Co

2、ACoA 水化酶水化酶 -羥脂酰羥脂酰CoACoA 脫氫酶脫氫酶 -酮酯酰酮酯酰CoACoA 硫解酶硫解酶RCHOHCH2COScoARCOCH2CO-SCoA RCH=CH-CO-SCoA +CH3COSCoAR-COScoAH H2 2O O CoASHTCATCA 乙酰CoA 乙酰CoACoA 乙酰乙酰CoACoAATPATPH H2 20 0呼吸鏈H H2 20 0呼吸鏈 乙酰CoACoA 乙酰CoA 乙酰CoA 乙酰CoA酮體的生成酮體的生成肝臟肝臟羥甲基戊二酸單酰羥甲基戊二酸單酰CoA（HMGCoA）脂肪酸脂肪酸硫解酶硫解酶2CH3COSCoACH3COCH2COSCoA乙酰乙酰乙

3、酰乙酰CoAHOOCCH2-C-CH2COSCoA |CH3OH |HMG-CoA裂解酶裂解酶HMG-CoA合成酶合成酶CH3COSCoACoASH -氧化氧化CH3COCH2COOHCH3CHOHCH2COOH乙酰乙酸乙酰乙酸丙酮丙酮 -羥丁羥丁酸酸脫氫酶脫氫酶CO2NADH+H+NAD+CH3COCH3脫羧酶脫羧酶CoASH本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮在堿性條件下，與碘生成本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮在堿性條件下，與碘生成碘仿。剩余的碘，可用標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉溶液滴定。碘仿。剩余的碘，可用標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉溶液滴定。 在堿性的條件下，丙酮與碘生成碘仿。反應(yīng)式如下： 2NaOH+

4、I2NaIO+NaI+H2O CH3COCH3+3NaOICHI3+CH3COONa+2NaOH 碘仿 剩余的碘，可用標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉滴定。 NaOI+NaI+2HClI2+2NaCI+H2O I2+2Na2S2O3Na2S4O6+2NaI 根據(jù)滴定樣品與滴定對照所消耗的硫代硫酸鈉之差，可以計算由丁酸氧化生成丙酮的量三、三、器材器材 酸式滴定管酸式滴定管 水浴鍋水浴鍋 移液管移液管 剪刀及鑷子剪刀及鑷子 漏斗等漏斗等四、試劑與材料四、試劑與材料鮮豬肝鮮豬肝 淀粉淀粉 氯化鈉氯化鈉 丁酸丁酸 三氯乙酸三氯乙酸 氫氧化鈉氫氧化鈉 鹽酸鹽酸 碘等碘等1.肝糜制備肝糜制備 取新鮮肝臟，用取新鮮肝臟，用0

5、.9% 氯化鈉溶液洗去污血。用濾紙吸去氯化鈉溶液洗去污血。用濾紙吸去表面的水分。稱取肝組織表面的水分。稱取肝組織5 g置研缽中。加少量置研缽中。加少量0.9% 氯化鈉氯化鈉溶液溶液,研磨成細(xì)漿。再加研磨成細(xì)漿。再加0.9% 氯化鈉溶液至總體積為氯化鈉溶液至總體積為10 mL 。2.取取2個個50 mL錐形瓶，各加入錐形瓶，各加入3 mL 1/15 mol/L pH 7.6的磷酸鹽的磷酸鹽緩沖液。向一個錐形瓶中加入緩沖液。向一個錐形瓶中加入2 mL正丁酸，另一個錐形瓶正丁酸，另一個錐形瓶作為對照，不加正丁酸。然后各加入作為對照，不加正丁酸。然后各加入 2 mL肝組織糜。混勻，肝組織糜。混勻，置于

6、置于43恒溫水浴中保溫。恒溫水浴中保溫。3.沉淀蛋白質(zhì)沉淀蛋白質(zhì) 保溫保溫1.5小時后，取出錐形瓶，各加入小時后，取出錐形瓶，各加入3 mL 15%三氯乙酸溶液，在對三氯乙酸溶液，在對照瓶內(nèi)追加照瓶內(nèi)追加2 mL正丁酸，混勻，靜置正丁酸，混勻，靜置15分鐘后過濾。將濾液分別收集在分鐘后過濾。將濾液分別收集在2支試管中。支試管中。4.酮體的測定酮體的測定 吸取吸取2種濾液各種濾液各2 mL分別放在另分別放在另2個錐形瓶中，再各加個錐形瓶中，再各加 3 mL 0.1 mol/L碘溶液和碘溶液和3 mL 10%氫氧化鈉溶液。搖勻后，靜置氫氧化鈉溶液。搖勻后，靜置10分鐘。加入分鐘。加入3 mL 10%鹽酸溶液中和。然后用鹽酸溶液中和。然后用0.01 mol/L標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉溶液滴定剩余的碘標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉溶液滴定剩余的碘。滴至黃色時，加入。滴至黃色時，加入56滴淀粉溶液作指示劑。搖勻，并繼續(xù)滴到藍(lán)色滴淀粉溶液作指示劑。搖勻，并繼續(xù)滴到藍(lán)色褪去。記錄滴定樣品與對照所用的硫代硫酸鈉溶液的褪去。記錄滴定樣品與對照所用的硫代硫酸鈉溶液的mL數(shù)，并按下式計數(shù)，并按下式計算樣品中丙酮含量。算樣品中丙酮含量。5.計算計算肝臟的丙酮含量（肝臟的丙酮含量（mmol/g）=（A-B）cNa2S2O3/6式中：式中： A為滴定對照所消耗的為滴定對照所消耗的0.05 mol/L硫代硫酸鈉溶液的硫代