分子熒光光譜法2012

1、分子熒光光譜法分子熒光光譜法鄭秀玉 分子熒光光譜法又稱分子發(fā)光光譜法分子熒光光譜法又稱分子發(fā)光光譜法或熒光分光光度法，即通常所謂的熒光分析或熒光分光光度法，即通常所謂的熒光分析法。該法是一種利用某一波長(zhǎng)的光線照射試法。該法是一種利用某一波長(zhǎng)的光線照射試樣，使試樣吸收這一輻射，然后再發(fā)射出波樣，使試樣吸收這一輻射，然后再發(fā)射出波長(zhǎng)相同或波長(zhǎng)較長(zhǎng)的光線的化學(xué)分析方法。長(zhǎng)相同或波長(zhǎng)較長(zhǎng)的光線的化學(xué)分析方法。 定性定性定量定量 分子吸收了紫外分子吸收了紫外-可見光的輻射后，它的電子能級(jí)躍可見光的輻射后，它的電子能級(jí)躍遷至激發(fā)態(tài)，然后以熱能形式將這一部分能量釋放出來，遷至激發(fā)態(tài)，然后以熱能形式將這一部分

2、能量釋放出來，本身又回復(fù)到基態(tài)。如果吸收輻射能后處于電子激發(fā)態(tài)的本身又回復(fù)到基態(tài)。如果吸收輻射能后處于電子激發(fā)態(tài)的分子以發(fā)射輻射的方式釋放這一部分能量，再發(fā)射的波長(zhǎng)分子以發(fā)射輻射的方式釋放這一部分能量，再發(fā)射的波長(zhǎng)可以同分子所吸收的波長(zhǎng)相同，也可以不同?？梢酝肿铀盏牟ㄩL(zhǎng)相同，也可以不同。一、光致發(fā)光（一、光致發(fā)光（Photoluminescent）熒光（熒光（Fluorescence）：）：當(dāng)激發(fā)光停止照射后，發(fā)光過程當(dāng)激發(fā)光停止照射后，發(fā)光過程幾乎立即停止（幾乎立即停止（10-910-6秒）。秒）。磷光（磷光（Phosphorescence）：）：將持續(xù)一段時(shí)間（將持續(xù)一段時(shí)間（ 10

3、-310秒）。秒）。二、熒光、磷光產(chǎn)生原理二、熒光、磷光產(chǎn)生原理 1、分子的激發(fā)態(tài)、分子的激發(fā)態(tài)單重激發(fā)態(tài)和三重激發(fā)態(tài)單重激發(fā)態(tài)和三重激發(fā)態(tài) 大多數(shù)分子含有偶數(shù)電子，在基態(tài)時(shí)，這些電大多數(shù)分子含有偶數(shù)電子，在基態(tài)時(shí)，這些電子成對(duì)地存在于能量最低的各個(gè)原子或分子軌道中，子成對(duì)地存在于能量最低的各個(gè)原子或分子軌道中，根據(jù)根據(jù)Pauli不相容原理，一個(gè)給定軌道中的兩個(gè)電子，不相容原理，一個(gè)給定軌道中的兩個(gè)電子，必定具有相反方向的自旋，即自旋量子數(shù)分別為必定具有相反方向的自旋，即自旋量子數(shù)分別為1/2、-1/2，電子總自旋量子數(shù)等于零：，電子總自旋量子數(shù)等于零：S=+(-)=0，即基態(tài)沒有凈自旋，其電

4、子能態(tài)的多重性，即基態(tài)沒有凈自旋，其電子能態(tài)的多重性 M=2S+1=1 (M 為磁量子數(shù)為磁量子數(shù))，因此，基態(tài)的多重性，因此，基態(tài)的多重性為為1，分子是抗（反）磁性的，其能級(jí)不受外界磁，分子是抗（反）磁性的，其能級(jí)不受外界磁場(chǎng)影響而分裂，稱場(chǎng)影響而分裂，稱“單重態(tài)單重態(tài)”。單重態(tài)單重態(tài)：?jiǎn)沃丶ぐl(fā)態(tài)：?jiǎn)沃丶ぐl(fā)態(tài)： 當(dāng)基態(tài)分子的一個(gè)成對(duì)電子吸收光輻射后，當(dāng)基態(tài)分子的一個(gè)成對(duì)電子吸收光輻射后，被激發(fā)躍遷到能量較高的軌道上，通常它的自被激發(fā)躍遷到能量較高的軌道上，通常它的自旋方向不改變，即兩個(gè)電子的自旋方向仍相反，旋方向不改變，即兩個(gè)電子的自旋方向仍相反，總自旋量子數(shù)總自旋量子數(shù)S=0， M=2S+

5、1=1，則分子處于的激則分子處于的激發(fā)態(tài)仍是單重態(tài)，即發(fā)態(tài)仍是單重態(tài)，即“單重激發(fā)態(tài)單重激發(fā)態(tài)”。 如果電子在躍遷過程中，還伴隨著自旋方向的如果電子在躍遷過程中，還伴隨著自旋方向的改變，這時(shí)便具有兩個(gè)自旋不配對(duì)的電子，即兩改變，這時(shí)便具有兩個(gè)自旋不配對(duì)的電子，即兩個(gè)電子的自旋量子數(shù)都為個(gè)電子的自旋量子數(shù)都為1/2，電子總自旋量子數(shù)電子總自旋量子數(shù)不等于零，而等于不等于零，而等于1： S=1/2+1/2=1 ，其多重性：，其多重性： M=2S+1=3，即分子在磁場(chǎng)中受到影響而產(chǎn)生能級(jí)即分子在磁場(chǎng)中受到影響而產(chǎn)生能級(jí)分裂，這種受激態(tài)稱為分裂，這種受激態(tài)稱為“三重激發(fā)態(tài)三重激發(fā)態(tài)”。三重激發(fā)態(tài)：三重

6、激發(fā)態(tài)：2、分子去活化過程及熒光的發(fā)生、分子去活化過程及熒光的發(fā)生 一個(gè)分子的外層電子能級(jí)一個(gè)分子的外層電子能級(jí)包括包括 S0（基態(tài)）和第（基態(tài)）和第1至第至第 n的的電子激發(fā)的單重激發(fā)態(tài)電子激發(fā)的單重激發(fā)態(tài)S1，S2，. Sn ，第第1至第至第 n的電子的電子激發(fā)的三重激發(fā)態(tài)激發(fā)的三重激發(fā)態(tài)T1. Tn ，每個(gè)電子能級(jí)又包括一系列能每個(gè)電子能級(jí)又包括一系列能量非常接近的振動(dòng)能級(jí)。量非常接近的振動(dòng)能級(jí)。S0S1T1SnTn. 分子吸收了紫外分子吸收了紫外-可見光后，基可見光后，基態(tài)分子中的電子只能躍遷到激發(fā)單態(tài)分子中的電子只能躍遷到激發(fā)單重態(tài)的不同振動(dòng)能級(jí)上，根據(jù)自旋重態(tài)的不同振動(dòng)能級(jí)上，根據(jù)

7、自旋禁律，不能直接躍遷到激發(fā)三重態(tài)禁律，不能直接躍遷到激發(fā)三重態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能級(jí)上。的各個(gè)振動(dòng)能級(jí)上。 處于激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定，在較處于激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定，在較短的時(shí)間內(nèi)可通過不同途徑釋放多余短的時(shí)間內(nèi)可通過不同途徑釋放多余的能量（輻射或非輻射躍遷）回到基的能量（輻射或非輻射躍遷）回到基態(tài)，這個(gè)過程稱為態(tài)，這個(gè)過程稱為“去活化過程去活化過程”。 1. 振動(dòng)弛豫：在溶液中，處振動(dòng)弛豫：在溶液中，處于激發(fā)態(tài)的溶質(zhì)分子與溶劑于激發(fā)態(tài)的溶質(zhì)分子與溶劑分子間發(fā)生碰撞，把一部分分子間發(fā)生碰撞，把一部分能量以熱的形式迅速傳遞給能量以熱的形式迅速傳遞給溶劑分子（環(huán)境）回到同一溶劑分子（環(huán)境）回到同一電子激發(fā)態(tài)的

8、最低振動(dòng)能級(jí)。電子激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)。去活化過程去活化過程2. 系間跨躍：當(dāng)電子單重激系間跨躍：當(dāng)電子單重激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)與電子發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)與電子三重激發(fā)態(tài)的較高振動(dòng)能級(jí)三重激發(fā)態(tài)的較高振動(dòng)能級(jí)相重疊時(shí)，發(fā)生電子自旋狀相重疊時(shí)，發(fā)生電子自旋狀態(tài)改變的態(tài)改變的 ST 躍遷，這一躍遷，這一過程稱為過程稱為 “系間跨躍系間跨躍” 。4.外轉(zhuǎn)換：激發(fā)態(tài)分子與溶劑分子或其他溶質(zhì)分子相互作用外轉(zhuǎn)換：激發(fā)態(tài)分子與溶劑分子或其他溶質(zhì)分子相互作用而以非輻射形式轉(zhuǎn)移掉能量回到基態(tài)的過程。而以非輻射形式轉(zhuǎn)移掉能量回到基態(tài)的過程。S1S23. 內(nèi)轉(zhuǎn)換：當(dāng)激發(fā)態(tài)內(nèi)轉(zhuǎn)換：當(dāng)激發(fā)態(tài)S2 的較低振動(dòng)能級(jí)與的較低振

9、動(dòng)能級(jí)與S1 的較高振動(dòng)能的較高振動(dòng)能級(jí)的能量相當(dāng)或重疊時(shí)，分子有可能從級(jí)的能量相當(dāng)或重疊時(shí)，分子有可能從S2 的振動(dòng)能級(jí)以無的振動(dòng)能級(jí)以無輻射方式過渡到輻射方式過渡到S1 的能量相等的振動(dòng)能級(jí)上，的能量相等的振動(dòng)能級(jí)上， 這一無輻射這一無輻射過程稱為過程稱為“內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換”。內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換例如：紫外可見分光光度計(jì)中，分子吸收紫外例如：紫外可見分光光度計(jì)中，分子吸收紫外-可見光產(chǎn)生可見光產(chǎn)生吸收光譜，當(dāng)從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)就是一個(gè)外轉(zhuǎn)換的過程。吸收光譜，當(dāng)從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)就是一個(gè)外轉(zhuǎn)換的過程。5. 熒光發(fā)射：當(dāng)激發(fā)態(tài)的分子熒光發(fā)射：當(dāng)激發(fā)態(tài)的分子通過振動(dòng)馳豫通過振動(dòng)馳豫內(nèi)轉(zhuǎn)換內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)馳豫到達(dá)單

10、重激發(fā)態(tài)的最振動(dòng)馳豫到達(dá)單重激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)時(shí)，單重激發(fā)態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)時(shí)，單重激發(fā)態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)的電子可通過發(fā)射低振動(dòng)能級(jí)的電子可通過發(fā)射輻射（光子）躍回到基態(tài)的不輻射（光子）躍回到基態(tài)的不同振動(dòng)能級(jí)，此過程稱為同振動(dòng)能級(jí)，此過程稱為 “熒熒光發(fā)射光發(fā)射”。6. 磷光發(fā)射：三重激發(fā)態(tài)最磷光發(fā)射：三重激發(fā)態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)的分子以發(fā)射輻低振動(dòng)能級(jí)的分子以發(fā)射輻射（光子）的形式回到基態(tài)射（光子）的形式回到基態(tài)的不同振動(dòng)能級(jí)，此過程稱的不同振動(dòng)能級(jí)，此過程稱為為 “磷光發(fā)射磷光發(fā)射”。 由于三重態(tài)壽命較長(zhǎng)，因而發(fā)生振動(dòng)弛豫及外轉(zhuǎn)換的幾率由于三重態(tài)壽命較長(zhǎng)，因而發(fā)生振動(dòng)弛豫及外轉(zhuǎn)換的幾率也高，失去激發(fā)

11、能的可能性大，以致在室溫條件下很難觀也高，失去激發(fā)能的可能性大，以致在室溫條件下很難觀察到溶液中的磷光現(xiàn)象。因此，試樣采用液氮冷凍降低其察到溶液中的磷光現(xiàn)象。因此，試樣采用液氮冷凍降低其它去活化才能觀察到某些分子的磷光。它去活化才能觀察到某些分子的磷光。 處于激發(fā)態(tài)的分子，可以通過上述不同途徑回到基態(tài)，處于激發(fā)態(tài)的分子，可以通過上述不同途徑回到基態(tài)， 哪哪種途徑的速度快，哪種途徑就優(yōu)先發(fā)生。種途徑的速度快，哪種途徑就優(yōu)先發(fā)生。 如果發(fā)射熒光使受激分子去活化過程與其他過程相比較快，如果發(fā)射熒光使受激分子去活化過程與其他過程相比較快，則熒光發(fā)生幾率高，強(qiáng)度大。則熒光發(fā)生幾率高，強(qiáng)度大。 如果發(fā)射熒

12、光使受激分子去活化過程與其他過程相比較慢，如果發(fā)射熒光使受激分子去活化過程與其他過程相比較慢，則熒光很弱或不發(fā)生。則熒光很弱或不發(fā)生。三三、激發(fā)光譜與熒光光譜、激發(fā)光譜與熒光光譜 1 1、激發(fā)光譜、激發(fā)光譜 將激發(fā)熒光的光源用單色器分光，連續(xù)改變激發(fā)光將激發(fā)熒光的光源用單色器分光，連續(xù)改變激發(fā)光波長(zhǎng)，固定熒光發(fā)射波長(zhǎng)，測(cè)定不同波長(zhǎng)激發(fā)光下物質(zhì)波長(zhǎng)，固定熒光發(fā)射波長(zhǎng)，測(cè)定不同波長(zhǎng)激發(fā)光下物質(zhì)溶液發(fā)射的熒光強(qiáng)度溶液發(fā)射的熒光強(qiáng)度(F)，以激發(fā)光的波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，以激發(fā)光的波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱座標(biāo)作熒光強(qiáng)度為縱座標(biāo)作Fl光譜圖光譜圖，便可得到熒光物質(zhì)的，便可得到熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜。激發(fā)光譜。 從

13、激發(fā)光譜圖上可找到發(fā)生熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的激發(fā)波從激發(fā)光譜圖上可找到發(fā)生熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的激發(fā)波長(zhǎng)長(zhǎng)lex，選用選用 lex可得到強(qiáng)度最大的熒光。可得到強(qiáng)度最大的熒光。2 2、熒光光譜、熒光光譜 如果保持激發(fā)光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度不變，測(cè)量不同波長(zhǎng)處熒如果保持激發(fā)光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度不變，測(cè)量不同波長(zhǎng)處熒光的強(qiáng)度分布，將熒光的波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱座標(biāo)光的強(qiáng)度分布，將熒光的波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱座標(biāo)作作F- l 光譜圖光譜圖便得到熒光光譜或稱發(fā)射光譜。便得到熒光光譜或稱發(fā)射光譜。 倍頻峰 熒光光譜中熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的波長(zhǎng)為熒光光譜中熒光強(qiáng)度最強(qiáng)的波長(zhǎng)為 lem 。四、溶液熒光光譜特征四、溶液熒光光譜特征1、斯托克

14、斯位移、斯托克斯位移 在溶液熒光光譜中，在溶液熒光光譜中，熒光波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光熒光波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)。激發(fā)與發(fā)射之間存波長(zhǎng)。激發(fā)與發(fā)射之間存在著一定的能量損失。在著一定的能量損失。2、熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān)、熒光光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無關(guān) 3、熒光光譜與激發(fā)光譜呈鏡像關(guān)系、熒光光譜與激發(fā)光譜呈鏡像關(guān)系熒光光譜的形狀和吸收光譜的形狀十分相似，且互為鏡像。因?yàn)槲展庾V中第一吸收帶是物質(zhì)分子由基態(tài)激發(fā)至第一激發(fā)態(tài)的各振動(dòng)能級(jí)所致，所以其形狀決定于第一激發(fā)態(tài)中振動(dòng)能級(jí)的分布情況；而熒光光譜是由受激分子從第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)降落至基態(tài)中各個(gè)振動(dòng)能級(jí)所致，所以熒光光譜的形狀決定于基態(tài)中振動(dòng)能

15、級(jí)的分布情況?；鶓B(tài)中振動(dòng)能級(jí)的分布和第一電子激發(fā)態(tài)中的振動(dòng)能級(jí)分布是相類似的，所以熒光光譜的形狀與吸收光譜十分相似。又因?yàn)楫?dāng)電子從基態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)躍遷到第一激發(fā)態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能級(jí)中，以激發(fā)到最高振動(dòng)能級(jí)時(shí)吸收光能最大，吸收波長(zhǎng)最短；而電子從第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)下降到基態(tài)的各振動(dòng)能級(jí)中，如果基態(tài)的振動(dòng)能級(jí)也是最高，則發(fā)射能量最小，相應(yīng)的熒光波長(zhǎng)最長(zhǎng)。當(dāng)電子從基態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)激發(fā)到第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)時(shí)，吸收的光能最小，相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)最長(zhǎng)，而當(dāng)電子從第一激發(fā)態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)下降到基態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)時(shí)，發(fā)射的能量最大，相應(yīng)的熒光波長(zhǎng)最短。所以熒光光譜和吸收光譜不但形狀相似而且互為鏡像。 物

16、質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與熒光的發(fā)生及熒光強(qiáng)度緊密相物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與熒光的發(fā)生及熒光強(qiáng)度緊密相關(guān)，根據(jù)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)可判斷物質(zhì)的熒光特性。關(guān)，根據(jù)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)可判斷物質(zhì)的熒光特性。 五、五、熒光與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系熒光與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系 分子能產(chǎn)生熒光或磷光，首先要求分子結(jié)構(gòu)分子能產(chǎn)生熒光或磷光，首先要求分子結(jié)構(gòu)能吸收紫外和可見輻射。通常，分子吸收輻射的能吸收紫外和可見輻射。通常，分子吸收輻射的能力愈強(qiáng)，則產(chǎn)生的熒光或磷光也愈強(qiáng)。能力愈強(qiáng)，則產(chǎn)生的熒光或磷光也愈強(qiáng)。熒光體系：幾乎都是含有一個(gè)或幾個(gè)苯環(huán)的復(fù)雜熒光體系：幾乎都是含有一個(gè)或幾個(gè)苯環(huán)的復(fù)雜的有機(jī)化合物。的有機(jī)化合物。 在這些化合物中能產(chǎn)生最強(qiáng)熒光的吸收過

17、程在這些化合物中能產(chǎn)生最強(qiáng)熒光的吸收過程通常包含有通常包含有 *躍遷而達(dá)到電子激發(fā)態(tài)的。躍遷而達(dá)到電子激發(fā)態(tài)的。六、分析方法六、分析方法 波長(zhǎng)掃描波長(zhǎng)掃描 時(shí)間掃描時(shí)間掃描 3-D掃描掃描 1 1、波長(zhǎng)掃描、波長(zhǎng)掃描 給定發(fā)射波長(zhǎng)，在激發(fā)波長(zhǎng)的某一范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。給定發(fā)射波長(zhǎng)，在激發(fā)波長(zhǎng)的某一范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。 EX波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：200-900 nm EM 開始波長(zhǎng)：開始波長(zhǎng)：200890nm EM 結(jié)束波長(zhǎng)：結(jié)束波長(zhǎng)：210900nm EM波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：200-890 nmEX 開始波長(zhǎng)：開始波長(zhǎng)： 200890nmEX 結(jié)束波長(zhǎng)：結(jié)束波長(zhǎng)：210900nm給定激發(fā)波長(zhǎng)，在發(fā)射波長(zhǎng)的某一范圍內(nèi)進(jìn)行

18、掃描。給定激發(fā)波長(zhǎng)，在發(fā)射波長(zhǎng)的某一范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。2 2、時(shí)間掃描、時(shí)間掃描EX波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：200-900 nmEM波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：200-900 nm 給定激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，掃描一段時(shí)間。給定激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，掃描一段時(shí)間。3、3-D掃描掃描 EX 開始波長(zhǎng)：開始波長(zhǎng)：200850nmEX 結(jié)束波長(zhǎng)：結(jié)束波長(zhǎng)：200900nmEX采樣間隔：采樣間隔：150nm EM 開始波長(zhǎng)：開始波長(zhǎng)：200850nmEM 結(jié)束波長(zhǎng)：結(jié)束波長(zhǎng)：200900nmEM采樣間隔：采樣間隔：110nm 等高線的間隔：等高線的間隔：0.011000 在激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的給定范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。在激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的給

19、定范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。 七七、熒光強(qiáng)度與溶液濃度的關(guān)系熒光強(qiáng)度與溶液濃度的關(guān)系 (一一)定量依據(jù)定量依據(jù) If=2.3fI0bc（熒光物質(zhì)濃度很?。晒馕镔|(zhì)濃度很?。┦街校菏街校篺為熒光效率，為熒光效率，I0為激發(fā)光的強(qiáng)度，為激發(fā)光的強(qiáng)度，熒光物熒光物質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)，質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)，b為試樣池的光程為試樣池的光程，c為熒光物為熒光物質(zhì)的濃度質(zhì)的濃度。 在一定條件下，在一定條件下，f、I0、b均為常數(shù)：均為常數(shù)： If=Kc（二）定量方法（二）定量方法1. 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測(cè)定熒光強(qiáng)度，繪制配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測(cè)定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測(cè)量未知

20、試樣的熒光強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測(cè)量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出未知試樣的濃度。度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出未知試樣的濃度。XSXSCCII2. 比較法比較法 在線性范圍內(nèi)，測(cè)定標(biāo)樣和試樣的熒光強(qiáng)度在線性范圍內(nèi)，測(cè)定標(biāo)樣和試樣的熒光強(qiáng)度（3）熒光定性分析）熒光定性分析 將實(shí)驗(yàn)測(cè)得樣品的熒光激發(fā)光譜和熒將實(shí)驗(yàn)測(cè)得樣品的熒光激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜與標(biāo)準(zhǔn)熒光光譜圖進(jìn)行比較來光發(fā)射光譜與標(biāo)準(zhǔn)熒光光譜圖進(jìn)行比較來鑒定樣品成分。鑒定樣品成分。八、熒光分析法的應(yīng)用八、熒光分析法的應(yīng)用 由于分子熒光分析法的選擇性和靈敏性由于分子熒光分析法的選擇性和靈敏性好，常應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、生物化學(xué)和天然好，常應(yīng)用于醫(yī)

21、藥、食品、生物化學(xué)和天然產(chǎn)物的分析。在有機(jī)物分析方面應(yīng)用較多。產(chǎn)物的分析。在有機(jī)物分析方面應(yīng)用較多。 目前熒光分析大多用于定量分析，由于目前熒光分析大多用于定量分析，由于自身發(fā)射熒光的化合物不多，因此往往利用自身發(fā)射熒光的化合物不多，因此往往利用有機(jī)試劑與熒光較弱或不顯熒光的物質(zhì)結(jié)合有機(jī)試劑與熒光較弱或不顯熒光的物質(zhì)結(jié)合形成發(fā)熒光的配合物來進(jìn)行測(cè)定。形成發(fā)熒光的配合物來進(jìn)行測(cè)定。(1)無機(jī)化合物的分析無機(jī)化合物的分析與有機(jī)試劑形成配合物后測(cè)量；可測(cè)量約與有機(jī)試劑形成配合物后測(cè)量；可測(cè)量約6060多種多種元素。元素。（2 2）有機(jī)化合物的分析）有機(jī)化合物的分析 芳香族化合物具有共軛的不飽和結(jié)構(gòu)，多能發(fā)生熒光，可以芳香族化合物具有共軛的不飽和結(jié)構(gòu)，多能發(fā)生熒光，可以直接進(jìn)行熒光測(cè)定；而脂肪族化合物的分子結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單，本身能直接進(jìn)行熒光測(cè)定；而脂肪族化合物的分子結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單，本身能發(fā)熒光的很少，須與某些試劑反應(yīng)后才能進(jìn)行分析。發(fā)熒光的很少，須與某些試劑反應(yīng)后才能進(jìn)行分析。八、磷光分析法及應(yīng)用八、磷光分析法及應(yīng)用與熒光相比，磷