檢驗(yàn)科PCR室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、PCR室作業(yè)指導(dǎo)書(shū)文件編號(hào)：ABCD-3-PR-0131第A版編制： 審核： 批準(zhǔn)： 生效日期：20XX年X月X日ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科編 制 說(shuō) 明本分冊(cè)文件可以作為單獨(dú)申請(qǐng)衛(wèi)生部PCR實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的全套作業(yè)文件，因此作為ISO15189質(zhì)量管理體系的PCR室作業(yè)文件，要對(duì)其重復(fù)部分進(jìn)行刪減，各檢驗(yàn)科根據(jù)各自用途要求與特點(diǎn)進(jìn)行選用，特此說(shuō)明。 2006年8月8日目 錄序號(hào)主 題 內(nèi) 容 代 號(hào)頁(yè) 號(hào)1PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理ABCD-3-PR-0172PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度ABCD-3-PR-0283PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度ABCD-3-PR-0394PCR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理ABCD-3-P

2、R-04105PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序ABCD-3-PR-05126PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)規(guī)則ABCD-3-PR-06137PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求ABCD-3-PR-07148PCR廢棄物的處理程序ABCD-3-PR-08179基因擴(kuò)增檢測(cè)及結(jié)果分析ABCD-3-PR-091810臨床標(biāo)本的保存操作程序ABCD-3-PR-102111標(biāo)本的采集運(yùn)送接收程序ABCD-3-PR-112212PCR生物防護(hù)措施ABCD-3-PR-122413PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配ABCD-3-PR-132514PCR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度ABCD-3-PR-142615PCR應(yīng)急處理程序ABCD-3-PR-152816

3、PCR試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序ABCD-3-PR-163017PCR消耗品進(jìn)購(gòu)質(zhì)檢貯存程序ABCD-3-PR-173118PCR室內(nèi)質(zhì)量控制操作程序ABCD-3-PR-183319PCR室間質(zhì)量控制操作程序ABCD-3-PR-193520PCR溫度校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序ABCD-3-PR-203621核酸擴(kuò)增熒光儀操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-213722干式恒溫器操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-224323離心機(jī)操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-234524冰箱操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-244725生物安全柜操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-254926移液器操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-26

4、5127沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)ABCD-3-PR-275428乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)ABCD-3-PR-285629丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)ABCD-3-PR-295830結(jié)核桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)ABCD-3-PR-306031高速冷凍離心機(jī)操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-3162附錄表格檢驗(yàn)科基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室平面圖ABCD/001實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表ABCD/002PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表ABCD/003PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表ABCD/004拒收標(biāo)本記錄本ABCD/005標(biāo)本超低溫保存記錄表ABCD/006PCR試劑購(gòu)買(mǎi)記錄表ABCD/007試劑驗(yàn)收記錄表ABCD/008PCR室特

5、殊耗材驗(yàn)收記錄表ABCD/009普通耗材驗(yàn)收記錄表ABCD/010室間質(zhì)評(píng)記錄表ABCD/011PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表ABCD/012室內(nèi)質(zhì)控圖ABCD/013PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表ABCD/014冰箱溫度質(zhì)控圖ABCD/015儀器使用記錄表ABCD/016儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表ABCD/017紫外消毒車(chē)消毒記錄表ABCD/018應(yīng)急處理登記表ABCD/019PCR廢血標(biāo)本處理交接表ABCD/020垃圾處理記錄表ABCD/021實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表ABCD/022PCR檢驗(yàn)報(bào)告單ABCD/023耗材進(jìn)購(gòu)記錄表ABCD/024試劑耗材供應(yīng)商一覽表ABCD/025 修 訂 頁(yè)序號(hào)文件編號(hào)頁(yè)碼

6、需更改的內(nèi)容更改內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期1234567891011121314151617181920PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理1目的：建立實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)置和科學(xué)管理，防止實(shí)驗(yàn)污染，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。2適用范圍：本程序適用于分子診斷室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41 分子診斷室為檢驗(yàn)科下設(shè)的專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室，從事臨床標(biāo)本的基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)科研工作。42 本實(shí)驗(yàn)室采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)作為臨床基因診斷的主要手段，實(shí)驗(yàn)室分為三個(gè)區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)（第一區(qū)）、標(biāo)本處理區(qū)（第二區(qū)）、擴(kuò)增分析區(qū)（第三區(qū)）。每一工作區(qū)配備專(zhuān)用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專(zhuān)用工作服，并有

7、明顯的區(qū)分標(biāo)識(shí)。各區(qū)標(biāo)簽顏色：紅色（第一區(qū)）、白色或綠色（第二區(qū)）、藍(lán)色（第三區(qū)）；專(zhuān)用工作服：粉紅色（第一區(qū)）、白色（第二區(qū)）、藍(lán)色（第三區(qū)）。標(biāo)本的接收則在檢驗(yàn)科標(biāo)本接收處進(jìn)行。43 各工作區(qū)專(zhuān)用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實(shí)驗(yàn)耗材和清潔用具等，不可混用。44 各工作區(qū)配置、功能和內(nèi)務(wù)管理見(jiàn)各相關(guān)SOP文件。45 嚴(yán)格遵守從“試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理區(qū)擴(kuò)增分析區(qū)”的單一流向制度，不得逆向進(jìn)入前一工作區(qū)。46 非本實(shí)驗(yàn)室工作人員，未經(jīng)許可不得入內(nèi)；進(jìn)修、實(shí)習(xí)或其他科室人員因科研活動(dòng)需要，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)） 需首先熟悉本程序的各項(xiàng)規(guī)定并嚴(yán)格遵守執(zhí)行，在本實(shí)驗(yàn)室人員監(jiān)

8、督指導(dǎo)下進(jìn)行。47 實(shí)驗(yàn)完畢后做好清潔消毒工作。5. 本文涉及以下圖表：1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)平面圖PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度1目的 ：保持良好的工作環(huán)境，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性，防止交叉污染，防止差錯(cuò)、事故及糾紛的發(fā)生。2適用范圍：所有本實(shí)驗(yàn)室人員。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41 本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作，不得進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)操作。42各區(qū)的用品不得混用。43在各區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套和帽子，嚴(yán)格按照操作規(guī)程。44試劑準(zhǔn)備區(qū)只能進(jìn)行試劑的貯存及配制等相關(guān)操作（見(jiàn)相關(guān)SOP文件）。45標(biāo)本處理區(qū)只能進(jìn)行臨床標(biāo)本的保存，核酸提取、保存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成（見(jiàn)相

9、關(guān)SOP文件）。46擴(kuò)增分析區(qū)只能進(jìn)行DNA或cDNA的擴(kuò)增、實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分析（見(jiàn)相關(guān)SOP文件）。47進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行本實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)操作規(guī)程，及時(shí)做好各種操作記錄，力求準(zhǔn)確、可靠。實(shí)驗(yàn)完畢，做好清潔、整理及分析統(tǒng)計(jì)等工作。48室內(nèi)儀器由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，未經(jīng)許可，不得隨意使用或挪用；愛(ài)護(hù)使用儀器，定期進(jìn)行保養(yǎng)與維修。49 愛(ài)護(hù)醫(yī)院財(cái)產(chǎn)，注意安全；離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)關(guān)好門(mén)窗，檢查水、電等。PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度1目的：保證實(shí)驗(yàn)室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進(jìn)行。2適用范圍：實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員及醫(yī)院相關(guān)清潔工人。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。42各區(qū)的用品不得混用。

10、43實(shí)驗(yàn)人員要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀(guān)念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。44進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動(dòng)。45所有儀器（如PCR擴(kuò)增儀）須有專(zhuān)人負(fù)責(zé)，并有使用維護(hù)記錄；實(shí)驗(yàn)人員必須熟悉儀器性能后方允許操作，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。46所有試劑進(jìn)購(gòu)、配制、質(zhì)檢、使用均要有記錄，未經(jīng)允許不得隨意帶出本實(shí)驗(yàn)室。47每天了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況及試劑使用情況，確保儀器整潔安全，試劑合格使用。48各區(qū)的各種清潔消毒均應(yīng)有記錄，工作衣消毒時(shí)注意各區(qū)應(yīng)分開(kāi)進(jìn)行處理。49注意保持實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙、吃零食，非實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)盡量少入。4. 10下班前檢查門(mén)、窗、水、電，節(jié)假日應(yīng)指定人員負(fù)責(zé)

11、檢查實(shí)驗(yàn)室的儀器、設(shè)備。PCR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理1目的：保證實(shí)驗(yàn)室有足夠數(shù)量的合格的具備開(kāi)展該類(lèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ膶?shí)驗(yàn)人員。2適用范圍：適用于實(shí)驗(yàn)室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41 人員要求411 本實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)或相關(guān)專(zhuān)業(yè)畢業(yè)，具有中級(jí)以上技術(shù)職稱(chēng)或?qū)？埔陨蠈W(xué)歷。412 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR技術(shù)培訓(xùn)，并取得合格證。413 對(duì)于新進(jìn)入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓(xùn)合格證，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室有培訓(xùn)合格證的上級(jí)技術(shù)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)工作，實(shí)驗(yàn)報(bào)告由有資格人員出具，并應(yīng)在最短的時(shí)間內(nèi)取得上崗培訓(xùn)合格證。42 人員配置421 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工

12、作需要配備足夠的工作人員，目前實(shí)驗(yàn)室有主管技師2人、技師1人，3人都已獲得培訓(xùn)合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，會(huì)適當(dāng)增加工作人員。422 各級(jí)技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。43 人員培訓(xùn)及考核431 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或負(fù)責(zé)人指定人員參加每年衛(wèi)生部PCR室間質(zhì)評(píng)總結(jié)會(huì)。432 實(shí)驗(yàn)室工作人員每12年至少參加1次PCR技術(shù)的省級(jí)或國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會(huì)議。433 安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。434 科室不定期組織實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部實(shí)驗(yàn)人員學(xué)習(xí)、更新核酸擴(kuò)增方面的相關(guān)知識(shí)，提升自身的理論學(xué)習(xí)水平。特別是在標(biāo)本接收區(qū)采血、接收標(biāo)本的人員，需定期對(duì)其進(jìn)行有關(guān)核酸

13、擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎R(shí)的培訓(xùn)。一些科室的送檢標(biāo)本由該科室的人員送到標(biāo)本接收區(qū)，對(duì)這些臨床醫(yī)護(hù)人員也要定期進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎R(shí)的培訓(xùn)。435 本實(shí)驗(yàn)室工作人員每年進(jìn)行考核一次,考核內(nèi)容:a)日常工作質(zhì)量b)室內(nèi)質(zhì)控測(cè)評(píng)c)室間質(zhì)控測(cè)評(píng)d)在抱怨處理中的表現(xiàn) 436 本實(shí)驗(yàn)室工作人員實(shí)行嚴(yán)格獎(jiǎng)懲制度,有下列表現(xiàn)者可受獎(jiǎng):a)工作質(zhì)量高, 質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀者b)有科研能力,并有一定數(shù)量和質(zhì)量的論文發(fā)表c)有獨(dú)創(chuàng)性工作成果,經(jīng)鑒定認(rèn)可者d)受到有關(guān)部門(mén)或群眾嘉獎(jiǎng)?wù)哂邢铝星闆r者將受到懲處:a)工作質(zhì)量問(wèn)題較多，質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)不合格；b)不遵守規(guī)章制度并造成一定影響

14、；c)不求上進(jìn)。437 本實(shí)驗(yàn)室工作人員獎(jiǎng)懲方法分精神及物質(zhì)兩類(lèi),經(jīng)實(shí)驗(yàn)室上報(bào)醫(yī)院及有關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后執(zhí)行。438 本實(shí)驗(yàn)室工作人員均建立業(yè)績(jī)檔案,實(shí)行能進(jìn)能出制度,不斷吸收高質(zhì)量人員,加強(qiáng)培訓(xùn)和提高,對(duì)于不適合本室工作的人員要及時(shí)調(diào)離。44 人員管理441 實(shí)驗(yàn)室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。442 技術(shù)檔案分文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1次，電子檔案隨時(shí)更新。5. 本文涉及以下表格實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表 PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表 培訓(xùn)申請(qǐng)表 年度培訓(xùn)計(jì)劃表 培訓(xùn)記錄表 員工培訓(xùn)履歷表 人員檔案卡 PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序1目的

15、：保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的整潔，防止污染。2適用范圍：適于實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4細(xì)則：41 實(shí)驗(yàn)室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒(méi)有無(wú)用的物品阻礙。42 合理規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無(wú)用的或使用效率低的物品放置到儲(chǔ)存處，常用的物品要容易尋找到。43抽屜、柜子、文件類(lèi)物品要作好標(biāo)記，以方便識(shí)別。44 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用2%戊二醛對(duì)臺(tái)面進(jìn)行清潔，并用移動(dòng)紫外燈進(jìn)行消毒。45每天對(duì)使用過(guò)的移液器用75%酒精進(jìn)行擦拭。每周1次對(duì)移液器咀進(jìn)行75%酒精浸泡15分鐘左右，若使用過(guò)程中發(fā)生污染應(yīng)隨時(shí)浸泡處理。46實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺

16、，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用移動(dòng)紫外燈消毒。47 每天實(shí)驗(yàn)前開(kāi)啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別打開(kāi)傳遞窗紫外燈、移動(dòng)紫外燈（對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面消毒）、天花板紫外燈消毒實(shí)驗(yàn)室，每次開(kāi)啟 3060分鐘。48 待紫外燈消毒時(shí)間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。49 依次清潔三個(gè)區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地面，各區(qū)清潔消毒工具均專(zhuān)用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則來(lái)進(jìn)行清潔。410 處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。411 每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的工作服隔開(kāi)洗滌。5. 本文涉及以下表格實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 垃 圾 處 理 記 錄 表 PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)

17、規(guī)則1目的：保證標(biāo)本編號(hào)的唯一性，也是準(zhǔn)確發(fā)放報(bào)告的基礎(chǔ)。2適用范圍：使用核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室所開(kāi)展的四種檢測(cè)項(xiàng)目：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、結(jié)核桿菌、沙眼衣原體。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：41 按檢測(cè)日期分類(lèi)標(biāo)記根據(jù)標(biāo)本送檢的日期，每天的標(biāo)本對(duì)應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號(hào)。如當(dāng)天為2005年3月1日，則編為050301。42 按檢測(cè)類(lèi)型分類(lèi)標(biāo)記根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的不同，每種檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號(hào)。如乙型肝炎病毒標(biāo)記為B，丙型肝炎病毒標(biāo)記為HC，結(jié)核桿菌標(biāo)記為T(mén)，沙眼衣原體為C。43 按驗(yàn)單接收順序編號(hào)在同種檢測(cè)類(lèi)型的驗(yàn)單中，按驗(yàn)單順序編號(hào)。如第一個(gè)檢測(cè)乙型肝炎病毒的驗(yàn)單編為B01，第二個(gè)檢

18、測(cè)乙型肝炎病毒的驗(yàn)單編為B02，第三個(gè)檢測(cè)結(jié)核的驗(yàn)單編為B03等。44 特殊標(biāo)本的編號(hào)如有特殊情況，應(yīng)在標(biāo)記前面增加特異字母區(qū)別開(kāi)，如住院的單和門(mén)診的單、其它醫(yī)院送來(lái)的單和本醫(yī)院的單要區(qū)分開(kāi)等。45 編號(hào)步驟a）對(duì)當(dāng)天送來(lái)的標(biāo)本，根據(jù)編號(hào)的基本原則編號(hào)，每個(gè)樣本的每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)一個(gè)唯一的編號(hào)（如050301T04）。b） 用筆在每張檢驗(yàn)申請(qǐng)單和對(duì)應(yīng)的樣品管上作好相同的標(biāo)記。c） 做好標(biāo)本的接收記錄，每個(gè)樣本的記錄都應(yīng)包括以下信息：接收時(shí)間、醫(yī)院、科室、送檢醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類(lèi)別、標(biāo)本狀態(tài)、送標(biāo)本者、接收人、檢驗(yàn)單號(hào)、標(biāo)本唯一統(tǒng)編號(hào)等。d）處理好樣品、點(diǎn)樣后，將反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀上

19、開(kāi)始擴(kuò)增。f）擴(kuò)增得到結(jié)果后，先在統(tǒng)計(jì)簿上填入結(jié)果，作好記錄，再一一把實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入相應(yīng)申請(qǐng)單。g）發(fā)放檢驗(yàn)報(bào)告單。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求1目的：規(guī)定在各區(qū)內(nèi)所進(jìn)行的工作及其操作。2適用范圍：所有在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行的工作。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：實(shí)驗(yàn)室分四區(qū):標(biāo)本接收區(qū)；試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制備區(qū)；擴(kuò)增區(qū)。進(jìn)入各區(qū)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本接收區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)。各區(qū)及其設(shè)備、物品必須有明確的標(biāo)記，嚴(yán)禁混用。進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的工作人員（含衛(wèi)生員），都必須遵守實(shí)驗(yàn)室的規(guī)則，尤其嚴(yán)格遵守進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的唯一流向。不可進(jìn)入PC

20、R擴(kuò)增后區(qū)打掃衛(wèi)生，再返回?cái)U(kuò)增前區(qū)工作。防止非本室工作人員串崗，進(jìn)入本室。尤其不得為找人，而逆向誤入PCR實(shí)驗(yàn)室。總則（1） PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)基本知識(shí)，大專(zhuān)以上學(xué)歷，并受過(guò)PCR實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)知識(shí)和技能培訓(xùn)。（2） PCR實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備，樣本準(zhǔn)備，PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)室，各室的實(shí)驗(yàn)物品（含加樣器，試管架，吸頭，記錄紙，筆等），不得混用，須貼上標(biāo)簽予以區(qū)別。（3） 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室操作程序進(jìn)行，包括實(shí)驗(yàn)室擦洗。臺(tái)面消毒，離心管，吸頭的無(wú)菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物處理等。（4） 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須更換各室不同的工作服（含帽和鞋），勤換洗

21、工作服，以及遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定，嚴(yán)禁反向流動(dòng)。（5） 進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物品不許帶進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。每天實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，必須清潔地面和消毒實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束應(yīng)紫外線(xiàn)消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，產(chǎn)物分析室紫外燈最好徹夜開(kāi)啟，排風(fēng)扇應(yīng)晝夜工作。每天下班前處理好廢物，應(yīng)關(guān)好水、電、煤氣和門(mén)窗。（6） 定期校準(zhǔn)和維修PCR儀、酶標(biāo)儀及離心機(jī)、水浴箱等儀器設(shè)備。（7） 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得飲食、吸煙。4.1標(biāo)本接收區(qū)4.1.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須穿本區(qū)白色工作服，接收標(biāo)本須戴一次性手套。4.1.2記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。4.1.3對(duì)送檢的標(biāo)本實(shí)行

22、雙簽制度，并仔細(xì)檢查是否符合檢測(cè)要求，對(duì)有不符合要求的標(biāo)本及時(shí)通知相關(guān)科室重新采樣，并作記錄，每份標(biāo)本需給出唯一性編號(hào)。4.1.4本區(qū)所有廢棄物分類(lèi)裝入垃圾袋，封好，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。4.1.5每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘。記錄紫外燈使用情況。4.2試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)4.2.5使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。4.2.6準(zhǔn)備好的試劑送入下一區(qū) ，還原實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將本區(qū)所有廢棄物分類(lèi)裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將本區(qū)垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。4.2.7白色工作服留在本區(qū)。4.2.8本區(qū)維持相對(duì)正壓狀態(tài)（開(kāi)啟緩沖區(qū)的排氣

23、扇）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘。4.3標(biāo)本制備區(qū)4.3.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專(zhuān)用藍(lán)色工作服及拖鞋。實(shí)驗(yàn)中須使用一次性帽子，戴手套，手套在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中疑有污染應(yīng)立即更換。4.3.2將傳入本區(qū)的試劑放入冰箱冷凍室試劑存放專(zhuān)區(qū)暫存。記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。4.3.3將冰箱內(nèi)二周前的標(biāo)本密封丟入垃圾筐，然后記錄標(biāo)本的保存情況。4.3.4使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。4.3.5按試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理，將處理好的標(biāo)本在超凈工作臺(tái)內(nèi)加樣，記錄標(biāo)本的處理過(guò)程。4.3.6將加樣后的試劑傳送下一區(qū)，還原實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，關(guān)閉所有儀器，記錄儀

24、器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。4.3.7使用過(guò)的離心管、吸頭須置于盛有1084液的廢液缸中，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后方丟入垃圾袋，患者樣品應(yīng)按有生物傳染性危險(xiǎn)品對(duì)待。4.3.8將本區(qū)所有廢棄物分類(lèi)裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出本區(qū)。4.3.9將藍(lán)色工作服留在本區(qū)。4.3.10本區(qū)應(yīng)避免不必要的走動(dòng)，同時(shí)維持相對(duì)正壓狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)及地面打開(kāi)紫外燈消毒30分鐘。4.4擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)區(qū)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專(zhuān)用粉色工作服及拖鞋。4.4.2記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。使用帶有本區(qū)標(biāo)識(shí)的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書(shū)寫(xiě)工整詳細(xì)。將傳入本區(qū)加樣后的試劑上機(jī)擴(kuò)增。4.4.5擴(kuò)增完

25、成后，記錄檢測(cè)結(jié)果，及時(shí)發(fā)放報(bào)告單，記錄儀器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。4.4.6將本區(qū)所有廢棄物分類(lèi)裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，然后將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。4.4.7將粉色工作服留在本室再離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室4.4.8嚴(yán)禁本區(qū)物品帶至其他區(qū)，該區(qū)需維持負(fù)壓狀態(tài)，排氣扇24小時(shí)排氣，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后清潔該區(qū)打開(kāi)紫外燈照射，最好整夜消毒，記錄紫外燈使用情況。5. 本文涉及以下表格PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表 冰箱溫度質(zhì)控圖 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 垃 圾 處 理 記 錄 表 紫外消毒車(chē)消毒記錄表 PCR廢棄物的處理程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和外部環(huán)境的安全。2適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑（

26、NaOH、EDTA、乙醇、生理鹽水等）、實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理；3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4細(xì)則：4.1科室職責(zé)應(yīng)對(duì)本室工作人員講明本程序在預(yù)防交叉、實(shí)驗(yàn)室污染及切斷傳播途徑中的重要性，并要求嚴(yán)格執(zhí)行。4.2實(shí)驗(yàn)室所有垃圾，裝入專(zhuān)用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黃色）。使用過(guò)的一次性消耗品(如試管、吸頭、離心管、等)，先放入10%次氯酸鈉溶液中浸泡24小時(shí)后，再放入黃色垃圾袋內(nèi)，使用過(guò)的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4.3 夾取標(biāo)本的工具，如鉗、鑷、接種環(huán)、吸管等，用后均應(yīng)消毒清潔，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或

27、壓力蒸汽滅菌。4.4 一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡24小時(shí)后，放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4.5 廢棄標(biāo)本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用10%的84液浸泡24小時(shí)后，交醫(yī)院集中處理。4.6 盛標(biāo)本的容器，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，放入污物袋里交醫(yī)院處理；對(duì)可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15分鐘或加入10%次氯酸鈉溶液浸泡24小時(shí)，消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流水刷洗，瀝干，用于微生物培養(yǎng)采樣者，用壓力蒸汽滅菌后備用。4.7 廢棄標(biāo)本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，交醫(yī)院污物處理中心處理。4.8日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交

28、醫(yī)院處理。5. 本文涉及以下表格PCR廢血標(biāo)本處理交接表 基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析1、目的：保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。2適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)。3負(fù)責(zé)人：肖靜 操作人：胡可存 蔣藝勤4、標(biāo)準(zhǔn)程序：4.1 基因擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)程序：擴(kuò)增反應(yīng)前須先在樣本輸入模板上按照事先排好的標(biāo)本位置進(jìn)行設(shè)置。每次實(shí)驗(yàn)除待檢標(biāo)本，還需包括：陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控品各一份，一組陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品（4個(gè)梯度108、106、105、104）。4.1.1打開(kāi)電腦電源開(kāi)關(guān)，進(jìn)入Windows NT界面。4.1.2 接著打開(kāi)PCR儀電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱5分鐘。 雙擊電腦桌面的ABI Prism 5700 SDS

29、 Software圖標(biāo)進(jìn)入程序設(shè)置界面。4.1.4單擊 “文件”菜單中的 “新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。在測(cè)定、容器和模板中做相應(yīng)的選擇，點(diǎn)擊OK。 4.1.5應(yīng)用檢測(cè)管理程序，并將其添加到樣品板文檔中。 4.1.6檢測(cè)反應(yīng)管，4.1.7 根據(jù)當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需條件編輯時(shí)間和溫度。運(yùn)行樣品板文檔。4.2 結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)程序 ：應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：全部曲線(xiàn)陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品逐個(gè)分析（標(biāo)出陽(yáng)性標(biāo)本和可疑標(biāo)本）調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，顯示定量結(jié)果登記，發(fā)報(bào)告。4.2.1 整體曲線(xiàn)的觀(guān)察：將所有曲線(xiàn)選中進(jìn)行整體觀(guān)察1）觀(guān)察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染），

30、特別應(yīng)注意大量曲線(xiàn)在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。2）觀(guān)察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動(dòng)等機(jī)器原因形成的異常曲線(xiàn)。4.2.2 陰性對(duì)照的分析陰性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室和前處理過(guò)程中是否存在污染。4.2.3 陽(yáng)性對(duì)照的分析陽(yáng)性對(duì)照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陽(yáng)性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾z出陽(yáng)性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。4.2.4 室內(nèi)質(zhì)控品的分析室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知濃度室內(nèi)質(zhì)控品。作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。4.2.5 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的分析1）各梯度曲線(xiàn)的分布是否均勻，若各梯度曲線(xiàn)均未分開(kāi)，則表明陽(yáng)模稀

31、釋可能存在問(wèn)題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。2）觀(guān)察各曲線(xiàn)的Ct值是否在平日的正常位置。情況1：若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線(xiàn)Ct 值均后移，則判斷是否為試劑擴(kuò)增效率下降（如試劑過(guò)期或保存條件不合格）。情況2：出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線(xiàn)Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。3）每日必做104標(biāo)準(zhǔn)品，用作以下三方面監(jiān)控：一是否存在操作誤差，如加樣量過(guò)少等原因?qū)е?04標(biāo)準(zhǔn)品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過(guò)久，低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品降解的情況；三是若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況1、2，則判斷是否為試劑靈敏度下降。4.2.6 單個(gè)曲線(xiàn)的判斷：逐個(gè)分析每條曲線(xiàn)，

32、判斷曲線(xiàn)的陰陽(yáng)性或?qū)倏梢汕€(xiàn)。（可疑標(biāo)本是指曲線(xiàn)在25個(gè)Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺(tái)趨勢(shì)不明顯或上漲幅度比較低的標(biāo)本?？梢蓸?biāo)本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報(bào)陽(yáng)性，否則結(jié)果報(bào)陰性。）曲線(xiàn)觀(guān)察內(nèi)容：在基線(xiàn)選擇28時(shí)觀(guān)察熒光強(qiáng)度（是否有三期特征）。并分別在Delta Rn vs.Cycle 、Ct vs.Well Number和 Rn vs.Cycle這三種擴(kuò)增圖形式下分析數(shù)據(jù)。4.2.7 得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線(xiàn)和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。電腦據(jù)此曲線(xiàn)給出陽(yáng)性結(jié)果值。此時(shí)應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線(xiàn)假性上揚(yáng)而得出的假陽(yáng)性結(jié)果和某些弱陽(yáng)性標(biāo)本因終末熒光值過(guò)低而顯示的假陰性。4.2.8 發(fā)放報(bào)告：及時(shí)登記檢

33、測(cè)結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可發(fā)，查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。4.3.1 陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。4.3.2 陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增。 4.3.3大批甚至所有的標(biāo)本都擴(kuò)增了。4.3.4 室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實(shí)驗(yàn)失控的具體標(biāo)準(zhǔn)詳見(jiàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。4.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)到下列要求后，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放結(jié)果。4.4.1陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增。4.4.2陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度曲線(xiàn)平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個(gè)參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。4.4.3室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見(jiàn)5. 本文涉及以下表格室

34、間質(zhì)評(píng)記錄表 PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表 室內(nèi)質(zhì)控圖 臨床標(biāo)本的保存操作程序1目的：臨床標(biāo)本正確保存，以便必要時(shí)復(fù)查。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：41 處理前的標(biāo)本保存a）HBV：全血標(biāo)本可4下短期（24h內(nèi)）保存，長(zhǎng)期保存則需分離出血清（血漿），保存于-20下。d）HCV：在1小時(shí)內(nèi)分離血清，吸取200µl，加入20u Rnasin，保存于-20。盡可能快的提取RNA。c）TB：痰或胸腹水、腦脊液、膿液標(biāo)本用于TB檢測(cè)的短期保存可置于4下，長(zhǎng)期保存則于-20下。d）CT：標(biāo)本短期（24h內(nèi)）保存置于4下，長(zhǎng)期保存則需在-20下。42 報(bào)告發(fā)出后

35、的標(biāo)本保存：a） 提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測(cè)可置4保存，如當(dāng)天不檢測(cè)應(yīng)置-20保存。報(bào)告發(fā)出后第二天丟棄。b） 原始血清/血漿樣本在報(bào)告發(fā)出后放入低溫冰箱-20保存1個(gè)星期，以備復(fù)查。超過(guò)1個(gè)星期保存期的標(biāo)本由室負(fù)責(zé)人酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。c）血清/血漿標(biāo)本放置低溫冰箱保存時(shí)須有記錄，按編號(hào)順序存放，并由專(zhuān)人負(fù)責(zé)管理。43 特殊標(biāo)本的處理：對(duì)暫不檢測(cè)的項(xiàng)目和規(guī)定時(shí)間外收到的零散樣本，要隨時(shí)登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗(yàn)。對(duì)特殊樣本或特殊病人的樣本，實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，無(wú)論那位工作人員，一旦收到樣

36、本后，均須負(fù)其責(zé)任，不得以任何借口推托，及時(shí)和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或有關(guān)人員，同時(shí)作交班記錄和雙簽名。對(duì)于做長(zhǎng)期病情動(dòng)態(tài)考察的病人標(biāo)本一律置于-20下長(zhǎng)期保存，使用時(shí)再按需取出檢測(cè)。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 拒收標(biāo)本記錄本 標(biāo)本超低溫保存記錄表 臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收程序1目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：41 標(biāo)本的采集411 標(biāo)本由臨床各科室接受過(guò)臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)有關(guān)標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸知識(shí)培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員采集并送至實(shí)驗(yàn)室。412標(biāo)本采集要求a）血液標(biāo)本：用2ml真空采集

37、管或1.5ml高壓滅菌離心管采集血液標(biāo)本，血標(biāo)本采集后在2小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室（HCV采用EDTA抗凝的血漿）。離心（檢驗(yàn)單與標(biāo)本一道）后用一次性吸管吸取血清或血漿加入經(jīng)消毒的1.5ml的離心管中，編號(hào)。b）痰標(biāo)本：用帶蓋的無(wú)菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。（對(duì)于無(wú)痰或少痰的患者，可用45加溫的100g/L NaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對(duì)于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本。）標(biāo)本在室溫下保存不能超過(guò)24小時(shí)。c）生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專(zhuān)用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時(shí)送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要

38、求男性病人在采樣前2小時(shí)內(nèi)不能排尿，采樣時(shí)，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口23cm，轉(zhuǎn)動(dòng)一周以獲得上皮細(xì)胞。d）尿液：由病人自留尿液于無(wú)菌封閉的杯中送檢。e）腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時(shí)送檢。注意：所有上述用于臨床標(biāo)本采集的容器如試管或離心管，均應(yīng)使用前高壓滅菌和密封。42 標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后，密閉、標(biāo)（貼）姓名，應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，如運(yùn)送時(shí)間需2小時(shí)以上，必須用冰盒送至實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，如用于RNA測(cè)定加入4mol/L異硫氰酸胍鹽（GITC）的血清（漿）標(biāo)本和用于DNA測(cè)定的EDTA抗凝血等，則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。45 接收451嚴(yán)格對(duì)

39、各類(lèi)樣本的查對(duì)和雙簽制度，對(duì)病房各樣本及時(shí)進(jìn)行驗(yàn)收，查對(duì)，不符合要求的樣本一律退回，并有書(shū)面記錄。452 分類(lèi)驗(yàn)證4521 一般內(nèi)容進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的樣本在進(jìn)行編號(hào)、離心前，工作人員應(yīng)再次認(rèn)真查對(duì)姓名，聯(lián)號(hào)，住院號(hào)，病區(qū)床號(hào)，項(xiàng)目等。對(duì)不符合要求者應(yīng)作記錄，并及時(shí)通知采樣科室，正確及時(shí)地補(bǔ)采樣，以免延誤病人的檢測(cè)結(jié)果報(bào)告。對(duì)書(shū)寫(xiě)不清楚的申請(qǐng)單，當(dāng)事者要及時(shí)與病房聯(lián)系(可電話(huà))，明確受檢者姓名，住院號(hào)，性別，年齡，病區(qū)，床號(hào)和檢驗(yàn)項(xiàng)目等；并作相應(yīng)記錄。4522 按檢測(cè)項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)本a）HBV：所需標(biāo)本類(lèi)型為未溶血的血清或血漿，注意血漿標(biāo)本所用的抗凝劑，用EDTA-K2，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí)應(yīng)及時(shí)分

40、離出血漿保存。b）HCV：同上，但標(biāo)本為血清時(shí)，要在1小時(shí)內(nèi)分離出血清用于檢測(cè)。c）TB：晨起第一口深部痰(不能為唾液)、胸腹水、腦脊液、膿液或穿刺液。d）CT：尿道或陰道分泌物。4523 實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)標(biāo)本進(jìn)行查驗(yàn)，出現(xiàn)下表中不合要求的情況時(shí)，應(yīng)拒收標(biāo)本，登記并告知相關(guān)科室。類(lèi)別拒收原因1未正確使用抗凝劑的標(biāo)本造成凝血的標(biāo)本2嚴(yán)重溶血3嚴(yán)重脂血4采血量不足（血清200uL、全血1mL） 5檢測(cè)項(xiàng)目TB的標(biāo)本是唾液而不是晨痰6標(biāo)本容器破裂，標(biāo)本被污染7標(biāo)本的病人姓名、年齡、性別等與檢驗(yàn)單不相符8RNA檢測(cè)，采樣時(shí)間超過(guò) 2小時(shí)9其他可能?chē)?yán)重影響檢驗(yàn)結(jié)果的原因4524 拒收程序a）對(duì)拒收的不合格標(biāo)

41、本應(yīng)在拒收標(biāo)本記錄本上登記。b）填寫(xiě)不合格標(biāo)本處置單，并隨同申請(qǐng)單送返送檢科室。c）必要時(shí)電話(huà)告之相關(guān)科室醫(yī)生或護(hù)士。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表 PCR生物安全防護(hù)措施1目的：預(yù)防工作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被感染或污染。2適用范圍：適用于本室所有工作人員。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4細(xì)則：41 實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)施生物防護(hù)措施時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守各項(xiàng)相應(yīng)的規(guī)章制度，建立起強(qiáng)烈的生物防護(hù)意識(shí)。42 每天更換廢液缸的2%戊二醛溶液，并保證2%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之一左右。配置消毒液時(shí)，正確量取足量的消毒劑（用量杯，保證濃度），水的用量也要正確，缸體密封性良

42、好。43 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面日常清潔時(shí)使用75%的酒精擦拭。44 每區(qū)每次實(shí)驗(yàn)后紫外燈照射3060分鐘，如有需要可延長(zhǎng)照射時(shí)間。45 所有來(lái)自病人的血液或體液標(biāo)本均應(yīng)視作傳染源，因此在標(biāo)本的采集、運(yùn)輸過(guò)程中，標(biāo)本容器應(yīng)完好無(wú)泄漏。46 處理標(biāo)本時(shí)應(yīng)穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物，水龍頭、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量細(xì)菌污染。消毒劑可用“84”消毒液。47 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水洗。48 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中在使用針具等銳器時(shí)，盡量小心防止受傷。若

43、被銳器刺破時(shí)，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。49 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏時(shí)，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙或紗布蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消毒。410 實(shí)驗(yàn)完畢離開(kāi)時(shí)，應(yīng)脫下所有該實(shí)驗(yàn)區(qū)個(gè)人防護(hù)裝備。411 實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外消毒。412 遇有意外事故應(yīng)立即報(bào)告科室負(fù)責(zé)人，當(dāng)事人應(yīng)立即注射相關(guān)疫苗或進(jìn)行預(yù)防性治療，并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀(guān)察，嚴(yán)重者應(yīng)報(bào)告院技術(shù)負(fù)責(zé)人。5. 本文涉及以下表格紫外消毒車(chē)消毒記錄表 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)中用到的各種溶液符合實(shí)驗(yàn)要求。2適用范圍

44、：核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用溶液：4%NaOH溶液、75%酒精、消毒劑（三氯異氰尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）、2%戊二醛溶液等。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：44 化學(xué)試劑的配制：441 用具：干燥潔凈的250ml量桶一只，1000ml量桶一只，1000ml燒杯一只，三角燒瓶?jī)芍?，天平一架?00ml塑料試劑瓶、2000ml廣口瓶各一只。442 配制步驟：4421 配制4%NaOH溶液:a）用天平稱(chēng)取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。b）用250ml量桶準(zhǔn)確取100ml水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。c）搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。d）然后緩緩傾倒入100ml塑料試劑

45、瓶中密封保存?zhèn)溆谩?422 配制消毒劑:a）一般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯達(dá)到500mg/L，即可達(dá)到消毒作用。b）消毒劑為粉狀（20克/袋），如配制一升的消毒劑溶液，則取500g，倒入燒杯中，緩緩加入1000ml水充分溶解，備用。c）如需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。4423 配制75%酒精溶液:a）一般常規(guī)消毒的75%酒精由醫(yī)院藥劑科提供。b）RNA提取的75%酒精的配制，試劑盒提供DEPC水，酒精用分析純的無(wú)水酒精，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)本數(shù)量進(jìn)行配制。4424 配制2%戊二醛溶液:a）準(zhǔn)確量取戊二醛原液20ml倒入1000ml燒杯中。b）量取980ml水，緩緩倒入1000ml燒杯中，混

46、勻，加至2000ml廣口瓶中備用。注意事項(xiàng)：每份配制好的溶液保質(zhì)期為14天PCR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度1、目的：確保檢驗(yàn)資料的記錄、保存狀態(tài)在控2、適用范圍：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4、工作程序：4.1 書(shū)面記錄文件的管理： 本實(shí)驗(yàn)室的書(shū)面記錄包括：001 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室平面圖-編號(hào)ABCD/001002實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表-編號(hào)ABCD/002003PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表-編號(hào)ABCD/003004PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表-編號(hào)ABCD/004005拒收標(biāo)本記錄本-編號(hào)ABCD/005006標(biāo)本超低溫保存記錄表-編號(hào)ABCD/0060

47、07PCR試劑購(gòu)買(mǎi)記錄表-編號(hào)ABCD/007008試劑驗(yàn)收記錄表-編號(hào)ABCD/008009PCR室特殊耗材驗(yàn)收記錄表-編號(hào)ABCD/009010普通耗材驗(yàn)收記錄表-編號(hào)ABCD/010011室間質(zhì)評(píng)記錄表-編號(hào)ABCD/011012PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表-編號(hào)ABCD/012013室內(nèi)質(zhì)控圖-編號(hào)ABCD/013014 PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表-編號(hào)ABCD/014015冰箱溫度質(zhì)控圖-編號(hào)ABCD/015016儀器使用記錄表-編號(hào)ABCD/016017儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表-編號(hào)ABCD/017018紫外消毒車(chē)消毒記錄表-編號(hào)ABCD/018019應(yīng)急處理登記表-編號(hào)ABCD/019

48、020 PCR廢血標(biāo)本處理交接表-編號(hào)ABCD/020021垃圾處理記錄表-編號(hào)ABCD/021022實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表-編號(hào)ABCD/022023 PCR檢驗(yàn)報(bào)告單-編號(hào)ABCD/023024耗材進(jìn)購(gòu)記錄表-編號(hào)ABCD/024025試劑耗材供應(yīng)商一覽表-編號(hào)ABCD/0254.1.2 填寫(xiě)書(shū)面記錄，需使用黑色墨水或圓珠筆，字跡清晰，如有涂改，在涂改處應(yīng)有涂改人簽名，不得在記錄表上進(jìn)行無(wú)關(guān)書(shū)寫(xiě)，保持記錄表清潔、完整。實(shí)驗(yàn)記錄表嚴(yán)格專(zhuān)用，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)不得混用。4.1.3 每個(gè)記錄本要納入檔案管理，寫(xiě)完后及時(shí)放入檔案柜，每月分類(lèi)裝訂成冊(cè),并依照要求進(jìn)行編號(hào),如2003年5月的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄本、試劑

49、消耗記錄本、室內(nèi)質(zhì)控圖分別編為200305SYJG、200305SJXH、200305SLZK，分別放于檔案柜的不同位置以便查詢(xún)。標(biāo)本原始檢測(cè)申請(qǐng)單最后保存于倉(cāng)庫(kù)2年，其它實(shí)驗(yàn)記錄保存于各自實(shí)驗(yàn)操作區(qū)內(nèi)，保存5年。4.1.4 定期對(duì)保存的記錄進(jìn)行分析總結(jié)，形成總結(jié)報(bào)告，以便改進(jìn)工作。4.1.5 在沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室職責(zé)同意的情況下，不得隨意將記錄借出。在記錄借出時(shí)需有實(shí)驗(yàn)室職責(zé)、經(jīng)手人、借閱人的簽名方可。4.2 電腦上記錄文件的管理4.2.1記錄文件必須保存在非系統(tǒng)分區(qū)中，如D盤(pán)，保存路徑要清晰、便捷、易查找。4.2.2文件夾目錄結(jié)構(gòu)要求層次分明，一整年的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均保存在一個(gè)年度文件夾里，如“2003年”文件夾；每個(gè)年度文件夾包含12個(gè)月文件夾，如“Jan01”、“Feb02”，每天的實(shí)驗(yàn)結(jié)果就保存在當(dāng)月文件夾里。4.2.3 實(shí)驗(yàn)文件保存時(shí)以當(dāng)天日期命名，若某天進(jìn)行了多次實(shí)驗(yàn)，命名時(shí)在后面以a、b、c等字母標(biāo)識(shí)，如2003年5月8日做的兩次實(shí)驗(yàn)，分別保存為20030508a和20030508b。4.2.4為了防止儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)結(jié)果的電腦發(fā)生系統(tǒng)崩潰、硬件故障等問(wèn)題導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果丟失、無(wú)法查詢(xún)等情況，每個(gè)月的實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄文件都要用移動(dòng)存儲(chǔ)設(shè)備（如軟盤(pán)、USB硬盤(pán)等）拷貝到另一部PC機(jī)上做備份；一年的數(shù)據(jù)要用刻錄機(jī)刻制一張CD光盤(pán)備份儲(chǔ)