安捷倫科技針對速成雞中抗病毒藥物利巴韋林和金剛烷胺的整體解決

1、安捷倫科技針對”速成雞”中抗病毒藥物利巴韋林和金剛烷胺的整體解決方案李建中, 吳翠玲, 陸予菲, 于明武, 陳偉, 張之旭 （安捷倫科技(中國 有限公司, 北京,100102）近日, 央視曝光山東等地部分養(yǎng)殖戶在肉雞飼養(yǎng)過程中大量濫用抗生素, 激素和抗病毒類藥物, 違規(guī)喂食金剛烷胺、利巴韋林等抗病毒藥品的“速成雞”流入上海百盛旗下餐飲機構(gòu)一事，美國快餐業(yè)巨頭肯德基和麥當勞在中國被卷入“速成雞”風(fēng)波，引發(fā)滬上人士和全國消費者的廣泛關(guān)注和擔(dān)憂！農(nóng)業(yè)部對此事件高度重視，及時責(zé)成山東有關(guān)部門去調(diào)查處理這件事情，也派出了專家組奔赴山東?，F(xiàn)在已經(jīng)關(guān)閉了有關(guān)的養(yǎng)雞企業(yè)和加工企業(yè)，包括一些養(yǎng)雞戶，正在緊鑼密鼓

2、的查處之中。此次事件中首次被曝光的抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺目前國家尚無相應(yīng)的檢測技術(shù)標準和方法，這為相關(guān)政府執(zhí)法檢測部門，生產(chǎn)企業(yè)和第三方實驗室迅速開展監(jiān)督檢查帶來了技術(shù)上的困難。安捷倫科技作為分析儀器業(yè)界知名品牌，多年來一直致力于為食品安全領(lǐng)域提供強有力的產(chǎn)品、技術(shù)解決方案。為應(yīng)對此次食品安全突發(fā)事件，安捷倫科技為廣大分析工作者提供了分析檢測雞肉中抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺的完整解決方案。1 實驗部分1.1 儀器與試劑安捷倫科技有限公司6460 QQQ質(zhì)譜儀；安捷倫科技有限公司1290 Infinity UHPLC。 乙腈，甲醇，異丙醇，乙酸銨，氨水，甲酸，去離子水，三氯乙酸。 P

3、oroshell120 EC-C18 3.0x100 mm, 2.7 m:P/N 695975-302， ZORBAX SB-Aq RRHT 100*3.0mm，1.8 m P/N.828975-314。 1.2 樣品前處理條件1.2.1雞肉中利巴韋林的前處理方法準確稱取雞肉樣品( 2g 0. 02 g 于15mL 具塞離心管中, 加入已知濃度的標準品，5 mL 的乙腈1%三氯乙酸溶液（7:3）, 加蓋后渦旋1min, 10000r/min離心10 min, 吸取上清液于15mL 離心管中；再向殘渣中再加入5 mL的乙腈1%三氯乙酸溶液（7:3）, 重復(fù)上述操作, 合并兩次上清液；渦旋混勻，用

4、氨水調(diào)節(jié)提取液pH 值為8.5 0.1,再10000r /min離心10 min，取全部上清液過柱凈化。凈化 流程如下： 1.2.2雞肉中金剛烷胺的前處理方法稱取2g 雞肉樣品（精確至0.01g ）至15mL 離心管中，依次加入已知濃度的標準品、 5mL 的甲醇1%三氯乙酸（50+50，V/V），渦旋1min ，超聲30min ，10000r/min離心10min ，上清液全部轉(zhuǎn)移至15mL 離心管中；再加入 5mL 的甲醇1%三氯乙酸（50+50，V/V）重復(fù)提取一次，合并全部提取液；渦旋均勻后重新離心，取出上清液5mL ，過Plexa PCX固相萃取柱凈化，如下所示： 1.3 液相和質(zhì)譜條

5、件液相色譜柱為安捷倫Poroshell120 EC-C18，3.0 x 100mm, 2.7 m （金剛烷胺）和ZORBAX SB-Aq RRHT 3.0 x 100mm，1.8 m P/N.828975-314（利巴韋林）；流動相為A 為水（含0.1%體積比的甲酸+5mM乙酸銨），B 為乙腈，柱溫30o C ；進樣量2L，流速為0.4 mL/min。利巴韋林梯度見下表1Time(min B% 0.00 0.00 2.00 0.00 4.00 15.00 4.10 90.00 6.0090.00金剛烷胺洗脫梯度見表2Time(min B% 0.00 0.00 2.00 0.00 4.00 15

6、.00 5.00 15.00 8.00 30.00 8.50 98.00 10.0098.00QQQ 質(zhì)譜參數(shù)（ESI+模式）：干燥氣溫度（Gas Temp）300 oC ，干燥氣流量（Gas Flow）8mL/min，霧化器壓力（Nebulizer ）40psi ，鞘流氣溫度（Sheath Gas Temp）300 oC ，鞘流氣流量（Sheath Gas Flow）11mL/min，毛細管電壓（Capillary ）3000V ，噴嘴電壓（Nozzle）0V ；MRM 參數(shù)見表3，安捷倫MassHunter軟件用于定性（Qualitative ）和定量（Quantitative ）分析。表

7、3 利巴韋林和金剛烷胺的MRM 參數(shù) 2 結(jié)果與討論從利巴韋林和金剛烷胺的結(jié)構(gòu)和文獻報道，可以采用電噴霧離子源正離子模式測試，實驗結(jié)果表明利巴韋林可以生成M+H+（m/z 245.1）和M+Na+ （m/z 267.1）分子離子峰，金剛烷胺可以生成M+H+（m/z 152.2）分子離子峰；分別選擇M+H+峰進行子離子掃描，最終確認利巴韋林選擇m/z 113（定量子離子）和96（定性子離子），金剛烷胺選擇m/z 135（定量子離子）和93（定性子離子）作為多反應(yīng)通道監(jiān)測離子對。由于利巴韋林極性較強，在反相C18色譜柱上保留較弱，所以采用100%水相作為梯度色譜條件的起始比例，另比較了C18柱和S

8、B-Aq 在分析利巴韋林時具有選擇性差異，在C18上不能完全分離的基質(zhì)干擾，SB-Aq 可以實現(xiàn)很好的分離。另外流動相添加0.1%甲酸和低濃度乙酸銨促進正離子電離。經(jīng)過優(yōu)化后的色譜圖見圖1。 圖1 1ppb 濃度利巴韋林和金剛烷胺的MRM 譜圖儀器方法學(xué)考察了靈敏度，線性范圍，穩(wěn)定性及添加回收率等指標。其中靈敏度測試了0.1ppb 濃度標準品，其中利巴韋林的信噪比為99.2；金剛烷胺的信噪比為35.6，均大于10倍信噪比定量檢出限，結(jié)果如圖2和圖3所示： 圖2 0.1ppb 濃度利巴韋林靈敏度譜圖 圖3 0.1ppb 濃度金剛烷胺靈敏度譜圖在0.1ppb 10ppb 濃度范圍內(nèi)，測試線性相關(guān)系

9、數(shù)均大于0.999。如圖4和圖5所示： 圖4 利巴韋林標準曲線 圖5 金剛烷胺標準曲線各濃度點平行6針測試，峰面積的RSD 均小于5%，具有良好的穩(wěn)定性。分別向空白雞肉中添加標準品測試回收率，其中利巴韋林的添加回收率在80101%之間，見表4；金剛烷胺添加回收率結(jié)果在70%82%之間，見表5。標準品，空白樣品和添加樣品的譜圖如圖6和圖7所示： 圖6 利巴韋林標準品、空白樣品和添加樣品的TIC 疊加譜圖 圖7金剛烷胺標準品、空白樣品和添加樣品的TIC 疊加譜圖表4 雞肉中的利巴韋林回收率結(jié)果 表5雞肉中的金剛烷胺添加回收率結(jié)果 3 結(jié)論 利用安捷倫科技的 Bond Elut PBA 和 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱和 1290UHPLC+6460QQQ 高 靈敏度液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，可以實現(xiàn)對問題雞肉中抗病毒藥物利巴韋林和金剛烷胺殘留量的檢測確證分 析，可以為此類藥物的快速篩查確證分析提供了有力的解決方案。 Poroshell120 EC-C18 是安捷倫專利的薄殼型高效液相色譜柱， 具有柱壓低， 柱效高的突出特點， 既可以用于 UHPLC 分析，也可以在常規(guī) HPLC 上實現(xiàn)快速高效分析，是實驗室提高工作效率，節(jié)約 溶