心可寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、心可寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究     【摘要】  建立心可寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)方中主要藥味丹參、牛黃、蟾酥、紅花、三七、人參須進(jìn)行定性鑒別研究，采用高效液相色譜法測(cè)定方中丹參酚酸B含量。結(jié)果 薄層色譜圖譜清晰，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好；HPLC法測(cè)定丹酚酸B含量在0.144 g1.44 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好0（r=0.9997，n=6），平均回收率為101.2%(RSD=2.1%,n=6)。結(jié)論 該方法快速簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，能有效地控制藥品質(zhì)量。為完善心可寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。 【關(guān)鍵詞】  心

2、可寧膠囊 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 薄層色譜 高效液相色譜    Abstract：Objective To establish the quality standard for Xinkening capsuleMethod Medicines in this description were identified by TLCThe content of salvianolic acid B which is the effective substance in the preparation was determined as the index by HPLCResult

3、s Medicines could be detected by TLC from three batches of samplesThe linear correlation of the salvianolic acid B is good in extent of 0.144g1.44g and the average recovery rate is 101.2%(RSD=2.1%,n=6)Conclusion The quality control is feasible and can be applied to control the products from mass pro

4、ductionIt can ensure the stability of the pharmaceutical quality.    Key words:Xinkening capsule;quality standard;TLC;HPLC   心可寧膠囊收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第九冊(cè)，由丹參、三七、冰片、蟾酥、紅花等藥材加工而成的純中藥復(fù)方制劑。具有活血散瘀、開竅止痛的功效。用于冠心病，心絞痛，胸悶，心悸，眩暈。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)丹參、牛黃和蟾酥進(jìn)行了定性鑒別，為了更有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，保證藥品的安全、有效。本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)

5、的對(duì)方中其他藥味的薄層鑒別方法進(jìn)行了研究，增加了紅花、三七、人參須的薄層色譜鑒別。由于丹參為加水煎煮，故可選擇其水溶性成份作為質(zhì)控指標(biāo)，進(jìn)行方法學(xué)研究建立了高效液相色譜法測(cè)定丹酚酸B含量的方法，并制定了相應(yīng)的含量測(cè)定限度。本研究最終建立了準(zhǔn)確、可控的質(zhì)量控制方法，從而為心可寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了可靠依據(jù)。    1  儀器與試劑  島津LC-10A型高效液相色譜儀（SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，CTO-10Asvp柱溫箱，LC-10Atvp雙泵，N2000色譜數(shù)據(jù)工作站），色譜柱：DiamonsiLTM鉆石C18柱（200 mm×

6、4.6 mm，5 m）；Auto Science AS5150A超聲波清洗器；德國Sartoriu公司BP211D（十萬分之一），BP121S（萬分之一電子天平。    對(duì)照品：丹酚酸B（供含量測(cè)定用，111562-200403）、膽酸對(duì)照品（100078-200414）、三七皂苷R1（110745-200415）、人參皂苷Rb1（110704-200420）、人參皂苷Rg1（0703-200221）、人參皂苷Re（110754-200421）；對(duì)照藥材：丹參對(duì)照藥材（111562-200403）、蟾酥對(duì)照藥材（121132-200001）、紅花對(duì)照藥材（1209

7、07-200408）均由中國藥品生物制品檢定所提供，甲醇、乙腈為色譜純（fisher公司），水為超純水；其他試劑均為分析純。    2  方法與結(jié)果    2.1  顯微特征鑒別    對(duì)紅花花粉粒進(jìn)行顯微特征鑒別。取本品，置顯微鏡下觀察：花粉粒球形或橢圓形，直徑4080 m，外壁有短刺及疣狀雕紋，具3個(gè)萌發(fā)孔。    2.2  薄層色譜鑒別    2.2.1  丹參的薄層鑒別  取本品10粒，傾

8、出內(nèi)容物，加水20 ml，溫?zé)崛芙?，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值4左右，用乙醚提取三次，每次20 ml，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，揮去乙醚，殘?jiān)脽o水乙醇0.5 ml溶解殘留物，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材7 g，加水煎煮3 h，濾過，濾液濃縮至約20 ml，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值4左右，用乙醚提取三次，每次20 ml，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，揮去乙醚，用無水乙醇0.5 ml溶解殘留物，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)1，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材各5 l，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以苯乙酸乙酯甲酸(80508) 為展開劑，展開，取出，晾干，氨蒸氣熏5 min后，置紫外光燈（365 nm）下檢

9、視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。    2.2.2  牛黃的的薄層鑒別  取丹參鑒別項(xiàng)下剩余的供試品溶液，加無水乙醇15 ml稀釋后，加少量活性炭脫色，濾過，濾液置水浴上濃縮至約0.5 ml，作為供試品溶液。另取膽酸對(duì)照品，加乙醇配制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)1，吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各5 l ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯冰醋酸(5152)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10硫酸乙醇溶液，105加熱510 min后，置紫外燈（365 nm）下檢視。

10、供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。    2.2.3  蟾酥的薄層鑒別  取本品10粒，傾出內(nèi)容物，加三氯甲烷30 ml浸漬1 h，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液置分液漏斗中，加氫氧化鈉液(0.1 mol/L)20 ml，輕輕振搖，棄去氫氧化鈉液；三氯甲烷液用水20 ml洗滌，棄去水洗液，三氯甲烷液用無水硫酸鈉脫水，回收三氯甲烷，殘?jiān)右掖?.5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取蟾酥對(duì)照藥材0.2 g，磨細(xì)，用三氯甲烷30 ml浸漬1 h，時(shí)時(shí)振搖，濾過，濾液回收三氯甲烷，殘?jiān)靡掖?0 ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層

11、色譜法試驗(yàn)1，吸取供試品溶液20 l，對(duì)照藥材溶液10 l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷丙酮環(huán)己烷(334)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸液，105加熱1015 min，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。    2.2.4  紅花的薄層鑒別  取本品10粒，傾出內(nèi)容物，加水煎煮1次，煎煮1 h，濾過，濾液加乙醇調(diào)含醇量達(dá)70%，靜置5 h，濾過，濾液回收乙醇后用乙酸乙酯萃取2次，每次20 ml，萃取液濃縮至1 ml，作為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材0.5 g，同法制

12、成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)1，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各10 l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷乙酸乙酯（54）為展開劑，展開，取出，晾干，用氨蒸氣熏5 min后，置紫外燈(365 nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。    2.2.5  人參須的薄層鑒別  取本品10粒，傾出內(nèi)容物，加三氯甲烷40 ml，加熱回流1 h，棄去三氯甲烷，藥渣揮干溶劑，加水適量，攪拌潤濕后，加水飽和正丁醇40 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液加3倍氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)蛹状?/p>

13、1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Re及人參皂苷Rg1，加甲醇制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)1，吸取上述兩種溶液各5 l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水（15402210）10以下放置后的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105烘至顯色。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。    2.2.6  三七的薄層鑒別  取本品10粒，傾出內(nèi)容物，加水適量，攪勻，再加水飽和正丁醇20 ml，密塞，振搖10 min，放置2 h，

14、濾過，濾液加3倍量以正丁醇飽和的水，搖勻，放置分層，取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)1，吸取上述兩種溶液各5 l，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水(15402210) 10以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。         2.3

15、0; 冰片的理化鑒別    取本品2粒，傾出內(nèi)容物，置蒸發(fā)皿中，上蓋玻璃表面皿，在水浴上加熱數(shù)分鐘，取出；將玻璃表面皿上附著的白色結(jié)晶升華物取下，用少量乙醇使溶解，加新配制的1 香草醛硫酸溶液，即顯紫色。    2.4  含量測(cè)定    2.4.1  色譜條件與系統(tǒng)適用試驗(yàn)  色譜柱為Diamonsil C18（4.6×250 mm，5 m），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-甲酸-水（3010359）；流速為1.0 ml/min；柱溫為30；檢測(cè)

16、波長為286 nm。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000.    2.4.2  對(duì)照品溶液的制備  精密稱取丹酚酸B對(duì)照品制成每l ml中含丹酚酸B 0.07mg的溶液。    2.4.3  供試品溶液的制備  提取溶劑考察：根據(jù)待測(cè)成分丹酚酸B易溶于甲醇及水的理化性質(zhì)，選用了不同濃度的甲醇及水進(jìn)行提取。取心可寧膠囊內(nèi)容物粉末4份，每份0.25 g，分別加入65%甲醇、75%甲醇、85%甲醇,水50 ml，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液注入液相色

17、譜儀，記錄峰面積值，以每克樣品計(jì)算丹酚酸B的含量。結(jié)果表明，75%甲醇作提取溶劑時(shí)的提取效果最佳，因此選擇75%甲醇作提取溶劑。    提取方法考察：常用的提取方法有回流提取法及超聲提取法。本研究對(duì)這兩種方法進(jìn)行了比較。取心可寧膠囊內(nèi)容物粉末2份，每份0.25 g，精密稱定，加入75%甲醇50 ml，稱定重量，分別回流，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，稱定重量，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液注入液相色譜儀記錄峰面積值，計(jì)算樣品中丹酚酸B的含量。結(jié)果表明,超聲提取能更完全的提取出丹酚酸B，故選擇超聲提取。  

18、  提取時(shí)間考察：為了更完全地提取出丹酚酸B，確保含量測(cè)定的準(zhǔn)確，本研究對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行了考察。取心可寧膠囊內(nèi)容物粉末3份，每份0.25 g，精密稱定，加入75%甲醇50 ml，稱定重量，分別超聲提取20、30、40 min，放冷，分別稱定重量，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液注入液相色譜儀記錄峰面積值，以每克樣品計(jì)算丹酚酸B的含量。結(jié)果表明，丹酚酸B含量隨提取時(shí)間而增加，當(dāng)提取30 min時(shí)已近提取完全，故選擇提取時(shí)間為30 min.    制備方法確定：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物,研細(xì)，取0.25 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇

19、50 ml，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，取出，放置至室溫后再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。    2.4.4  方法學(xué)考察    陰性干擾試驗(yàn)：取處方中除去丹參的其他藥材，按供試品溶液制備工藝制成陰性供試品溶液。分別吸取陰性供試品溶液、丹酚酸B對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 l，注入色譜儀。 結(jié)果在與丹酚酸B對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置處無色譜峰出現(xiàn)，見圖1.    線性范圍考察：精密吸取丹酚酸B對(duì)照品溶液0.014 4 mg/m

20、l、0.028 8 mg/ml、0.043 2 mg/ml、0.057 6 mg/ml、0.072 mg/ml、0.144 mg/ml 各10 l進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積。并以峰面積值（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=982 095x+10 956，R=0.999 7.結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.144-1.44g之間，進(jìn)樣量和積分面積線性關(guān)系良好。    精密度試驗(yàn)：精密吸取丹酚酸B對(duì)照品溶液（0.072 mg/ml）10 l，重復(fù)進(jìn)樣5次。試驗(yàn)結(jié)果表明：丹酚酸B峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD<2%，說明儀器精密度良好。  

21、  穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批樣品，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備樣品，得樣品供試品溶液；取供試品溶液與丹酚酸B對(duì)照品溶液，于0 h、1 h、2 h、4 h及8 h分別進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量10 l，記錄峰面積值。試驗(yàn)結(jié)果表明，丹酚酸B及樣品供試液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。    重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算丹酚酸B含量。結(jié)果表明，樣品平均含量為15.07 mg/g，RSD<2%，所考察方法重復(fù)性良好。    加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品（含量15.00 mg/g）膠囊內(nèi)容物約0.12 g，精密稱定，置于錐

22、形瓶中，分別加入丹酚酸B對(duì)照品溶液（0.481 6 mg/ml）4 ml，加入75%甲醇50 ml，稱定重量，密塞，超聲提取30 min，放置至室溫后補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過，照本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測(cè)定項(xiàng)下方法，進(jìn)樣10 l，測(cè)定，按下式計(jì)算回收率。6次試驗(yàn)的加樣回收率測(cè)定結(jié)果均在95105%之間，其平均值為101.2%，RSD為2.1%.表明本方法可靠，符合含量測(cè)定的要求。結(jié)果見表1. 表1  回收率試驗(yàn)結(jié)果    2.4.5  樣品含量測(cè)定    按供試品溶液制備方法處理10批樣品，對(duì)其丹酚酸B含量進(jìn)行了測(cè)定，每批平行測(cè)定2次。分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 l，注入色譜儀，測(cè)定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。    3  討論    本方共有八味藥，通過研究，根據(jù)原標(biāo)準(zhǔn)，分別以丹參對(duì)照藥材為對(duì)照對(duì)丹參進(jìn)行薄層色譜鑒別研究，按原標(biāo)準(zhǔn)中的丹參薄層色譜鑒別進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)顯色效果不佳，日光檢視主斑點(diǎn)不清晰，故調(diào)整為以氨蒸氣熏5min后，置紫外燈（365 nm）