毛茛總苷抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

1、毛茛總苷抗炎鎮(zhèn)痛作用研究                            作者：王榕樂 譚毓治 羅紹寶【摘要】  目的觀察毛茛總苷抗炎、鎮(zhèn)痛作用。方法采用小鼠熱板法和扭體法實(shí)驗(yàn)觀察鎮(zhèn)痛作用；用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察抗炎作用。結(jié)果200，400，800 mg?kg-1毛茛總苷能顯

2、著減小二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹程度，抑制由55熱板刺激誘導(dǎo)的小鼠疼痛反應(yīng)和醋酸刺激引起小鼠腹腔疼痛反應(yīng)，效應(yīng)具有濃度依賴性；200，400 mg?kg-1毛茛總苷明顯抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹。結(jié)論毛茛總苷具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。 【關(guān)鍵詞】  毛茛總苷； 抗炎； 鎮(zhèn)痛Abstract：ObjectiveTo study the anti-inflammatory and analgesic effects of total glycosides of Ranunculus  japonicus. MethodsHot-plate and body-contortion

3、 methods were used to observe the analgesic effects. Dimethyl benzene-induced auris swelling model in mice and carrageen-induced feet swelling model in rats were established to observe the anti-inflammatory effects. ResultsTotal glycosides of Ranunculus  japonicus at different doses (200, 400,8

4、00 mg?kg-1)could markedly inhibit dimethyl benzene-induced ear swelling in mice，relieve pain response of mice induced by 55 hot-plate and acetic acid situmulation in mice abdominal cavity，with dose dependence; total glycosides of Ranunculus  japonicus (400, 800 mg?kg-1)could also significantly

5、inhibit carrageen-induced feet swelling in rats.ConclusionTotal glycosides of Ranunculus  japonicus has obvious anti-inflammatory and analgesic effects.Key words：Total glycosides of Ranunculus  japonicus；   Anti-inflammation；   Analgesia    毛茛Ranunculus j

6、aponicus ，又名魚療草、野芹菜等，是毛茛科 （Ranunculaceae）毛茛屬多年生草本植物，生長于河溝、池沼、水堤旁及陰濕的草叢中，全國各地都有分布，來源豐富。論文論文參考網(wǎng)中藥大辭典1記載毛茛可以治瘧疾、黃疸、偏頭痛、胃痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、鶴膝風(fēng)等疾病。毛茛以民間應(yīng)用為主,目前僅有少量的毛茛化學(xué)成分及其藥理毒理方面的研究,尚未進(jìn)行系統(tǒng)研究。毛茛總苷（TGOR）為毛茛有效藥理成分之一，對毛茛總苷的抗炎鎮(zhèn)痛研究鮮見報(bào)道，為此我們對其進(jìn)行抗炎鎮(zhèn)痛研究，為進(jìn)一步開發(fā)毛茛提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。1  材料與儀器1.1   藥品 毛茛總苷由廣東藥學(xué)院藥理教研室制備提供，地

7、塞米松（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：060105），硫酸羅通定注射液（廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號：060104）。1.2   動物 SPF級SD大鼠，體重150160 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK（粵）2003-002，粵監(jiān)證字2005A010。SPF級NIH小鼠，體重1822 g，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK（粵）2003-002，粵監(jiān)證字2005A012。1.3   儀器 電子分析天平(FA2104S型)，超級恒溫器（501型）。1.4   藥物制備 毛茛全草晾干

8、切碎，85乙醇回流提取3次，過80目篩,合并提取液，減壓濃縮回收溶劑，等體積的醋酸乙酯萃取若干次至醋酸乙酯層為淺綠色。下層（水層）蒸干溶劑，得膏狀物經(jīng)D-101大孔樹脂吸附，水洗，棄去，再用純乙醇洗脫，收集此部位，蒸干乙醇得膏狀物即毛茛總苷。2  方法與結(jié)果2.1   抗炎作用2.1.1   毛茛總苷對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響2取NIH小鼠48只，雌雄各半，隨機(jī)均分5組，即生理鹽水組,毛茛總苷低、中、高3個劑量組(即200，400，800 mg?kg-1)，地塞米松組（10 mg?kg-1）。給藥1次/d，連續(xù)3 d。末次給藥后1 h，各組

9、小鼠右耳涂二甲苯0.05 ml/只，左耳作對照，15 min后處死小鼠，用直徑7mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，用電子天平分別稱重，按下式計(jì)算右耳腫脹率。    右耳腫脹率(%) =右耳片重 - 左耳片重左耳片重×100%    結(jié)果表明TGOR各劑量組對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹有明顯抑制作用。見表1。表1  毛茛總苷對二甲苯誘導(dǎo)的耳廓腫脹抑制作用（略） 與生理鹽水組比較，*P<0.01；n=102.1.2   毛茛總苷對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響2取SD大鼠50只，雌雄各

10、半，隨機(jī)均分5組，即生理鹽水組，毛茛總苷低、中、高3個劑量組(即400，200，100 mg?kg-1) ，地塞米松組（5 mg?kg-1），給藥1次/d。連續(xù)3 d。末次給藥后2 h，用軟皮尺先測定每鼠右后肢正常踝關(guān)節(jié)周長，分別在大鼠右后足跖皮下注射1角叉菜膠混懸液0.1ml/只，致炎，隨后分別于1，2，4，6h各測量1次踝關(guān)節(jié)周長，記錄結(jié)果，按下式計(jì)算足周長變化。    足周長變化致炎后踝關(guān)節(jié)周長致炎前踝關(guān)節(jié)周長    結(jié)果表明TGOR高、中劑量組均能顯著抑制角叉菜膠所致足腫脹，且第46小時期間作用較強(qiáng)。見表2。表2 

11、毛茛總苷對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響（略） 與生理鹽水比較，*P<0.05,*P<0.01；n=10論文參考網(wǎng)2.2     鎮(zhèn)痛作用2.2.1    毛茛總苷對熱板刺激引起小鼠疼痛反應(yīng)的影響3調(diào)節(jié)超級恒溫水浴的溫度在（55±0.5），將熱板預(yù)熱10 min。取1822 g雌性小鼠，每次1只放在熱板上，小鼠自放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時間（s）作為該鼠的痛閾值。凡舔后足時間小于5s或大于30s或跳躍者，棄之不用。將合格的40只小鼠隨機(jī)分為5組，即生理鹽水組，毛茛總苷低、中、高3個劑量組(即2

12、00，400，800 mg?kg-1)、羅通定組（300 mg?kg-1）。各實(shí)驗(yàn)組小鼠給藥1次/d。對照組給等量的生理鹽水，連續(xù)3次。末次給藥后60 min測定小鼠痛閾值，如60 s仍無反應(yīng)，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值按60s計(jì)算。結(jié)果表明TGOR高中低劑量組顯著抑制55熱板刺激誘導(dǎo)的小鼠疼痛反應(yīng)（P<0.01），表現(xiàn)為痛閾值升高，并呈現(xiàn)劑量效應(yīng)依賴性。見表3。2.2.2   毛茛總苷對醋酸刺激引起小鼠扭體反應(yīng)的影響4取NIH小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)均分5組，即生理鹽水組，毛茛總苷低、中、高3個劑量組(即200，400，800 mg?kg-1)，羅通定組（30

13、mg?kg-1）。各實(shí)驗(yàn)組小鼠給藥1次/d。對照組給等量的生理鹽水，連續(xù)3次。末次給藥后1 h，各鼠腹腔注射0.6%乙酸0.2ml/只，觀察15 emin內(nèi)各鼠出現(xiàn)的扭體次數(shù)，并計(jì)算各藥的鎮(zhèn)痛百分率：    鎮(zhèn)痛百分率（%）=對照組平均扭體次數(shù) - 給藥組平均扭體次數(shù)對照組平均扭體次數(shù)×100%表3  毛茛總苷對小鼠熱板法致痛作用的影響（略） 與生理鹽水組比較，*P<0.01；n=10    結(jié)果表明TGOR各劑量組可明顯抑制醋酸所致小鼠軀體疼痛。見表4。表4  毛茛總苷對醋酸誘發(fā)小鼠扭體

14、反應(yīng)的影響（略） 與生理鹽水組比較，*P<0.01；n=103  討論    尋找和研究沒有依賴性、不良反應(yīng)少、療效確切的鎮(zhèn)痛抗炎藥一直是藥物研究的熱點(diǎn)內(nèi)容之一。從植物中尋找鎮(zhèn)痛抗炎藥有其優(yōu)點(diǎn)：藥效良好、不良反應(yīng)少及資源豐富等優(yōu)勢，已經(jīng)引起了人們的重視。    本課題組采用經(jīng)典的動物炎癥和疼痛模型觀察毛茛總苷的抗炎鎮(zhèn)痛作用。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，毛茛總苷能提高小鼠熱刺激體表的痛閾，延長熱板痛反應(yīng)時間,抑制醋酸刺激腹腔粘膜引起的痛反應(yīng)，減少各鼠的扭體次數(shù)，說明毛茛總苷具有鎮(zhèn)痛作用。抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，毛茛總苷減少大鼠足腫脹和二甲苯誘導(dǎo)的耳廓腫脹程度，說明毛茛總苷具有抗炎作用。本研究結(jié)果為毛茛系統(tǒng)的藥理研究和深入的藥學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。毛茛總苷鎮(zhèn)痛抗炎作用的活性成分及其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典，上冊M.上海:上海科