氟尿苷二乙酸酯脂質(zhì)固體納米粒的制備

1、氟尿苷二乙酸酯脂質(zhì)固體納米粒的制備 07-08-19 14:08:00 編輯：studa20 作者：連佳芳，張三奇，顧宜，石小鵬，奚苗苗 【關(guān)鍵詞】 固體Preparation of floxuridine diacetate solid lipid nanoparticles【Abstract】 AIM: To prepare floxuridine diacetate solid lipid nanoparticles (FUDRASLN) so as to improve the treatment efficacy and reduce the side effects of flox

2、uridine (FUDR). METHODS: FUDR was esterified with acetic anhydride in the presence of pyridine and 4dimethylaminopyridine. The structure of expected compound, floxuridine diacetate (FUDRA)，was identified by proton nuclear magnetic resonance. The stability of FUDRA in mouse serum and tissue homogenat

3、es and octanolbuffer partition coeffient of FUDRA were investigated by reversed phase high performance liquid chromatography (RPHPLC). FUDRA was used to prepare FUDRASLN by dry membrane technique. Transmission electron microscopy was employed to study the shape and particle diameter distribution of

4、FUDRASLN. Drug loading and entrapment efficiency were also determined by RPHPLC. RESULTS: FUDRA was more stable in weak acid solution than in base solution, hydrolyzed fast in serum and tissue homogenates, especially in liver homogenate. The partition coefficient of FUDRA was 58.13. The diameter dis

5、tribution of FUDRASLN was （20853） nm, drug loading was 7.63% and entrapment efficiency was 94.21%. CONCLUSION: The lipophilicity of FUDR is dramatically increased after esterification with acetic anhydride. FUDRASLN has a high entrapment efficiency and a good distribution in size.【Keywords】 floxurid

6、ine; solid lipid nanoparticles; targeted drug delivery system【摘要】 目的：為了提高氟尿苷（FUDR）的療效，降低其毒副作用而制備氟尿苷二乙酸酯固體脂質(zhì)納米粒（FUDRASLN）. 方法：在吡啶和4二甲氨基吡啶存在時(shí)，F(xiàn)UDR與乙酸酐反應(yīng)，制備氟尿苷二乙酸酯，并測(cè)定其核磁共振氫譜.RPHPLC測(cè)定其在正辛醇和磷酸鹽緩沖液中的分配系數(shù)及不同pH緩沖液和組織勻漿中的穩(wěn)定性.采用薄膜分散法制備FUDRASLN；透射電鏡研究其形態(tài)、粒徑及粒徑分布；RPHPLC測(cè)定載藥量、包封率. 結(jié)果：制備成的FUDRA在弱酸性溶液中較穩(wěn)定，在弱堿性溶液中

7、水解較快；在血清和組織勻漿中易水解，在肝勻漿中水解最快；FUDRA分配系數(shù)為58.13. FUDRASLN粒徑為（20853）nm，載藥量為7.63，包封率為94.21. 結(jié)論: FUDR轉(zhuǎn)化成FUDRA后親脂性大大增加；FUDRASLN包封率較高，粒徑分布較均勻.【關(guān)鍵詞】 氟尿苷；固體脂質(zhì)納米粒；靶向給藥系統(tǒng)0引言氟尿苷(floxuridine, FUDR)是5氟尿嘧啶（5FU）的脫氧核苷衍生物，是有效的抗代謝類抗消化道腫瘤新藥，主要用于肝癌治療. 為了增加其肝靶向性，我們制備了氟尿苷固體脂質(zhì)納米粒（FUDRSLN），但FUDR的脂溶性較小，制備固體脂質(zhì)納米粒（solid lipid na

8、noparticles, SLN）比較困難，故將FUDR酯化，合成了氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)，以大豆磷脂為藥物載體，制備FUDRASLN，期望藥物靜注后可濃集于肝臟，達(dá)到提高療效，降低毒副作用的目的.1材料和方法1.1材料RE52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；UV265型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津）；INOVA400超導(dǎo)核磁共振儀（美國Varian）；LC10Avp高效液相色譜儀（日本島津）；色譜柱：Kromasil C18柱，5 m，4.6 mm150.0 mm；KQ250型超聲波發(fā)生器(江蘇昆山淀山湖檢測(cè)儀器廠)，BP190S電子天平(德國賽多利斯)，XW80A漩渦混合器（江蘇海

9、門市麒麟醫(yī)用儀器廠）；JEM2000Ex型透射電子顯微鏡（日本電子）；TG16W微量高速離心機(jī)（湖南儀器儀表總廠光華儀器廠）；Sephadex G50葡聚糖凝膠（華美生物工程公司）. 藥品和試劑：FUDR（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)041202，純度99.2）；乙酸酐（開封化學(xué)試劑總廠，批號(hào)001022）；大豆磷脂（注射用，上海太偉藥業(yè)有限公司，批號(hào)040716）. 其他藥品和試劑均為分析純. 昆明種小鼠5只，體質(zhì)量(202) g, 由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.1.2方法1.2.1FUDRA的合成及結(jié)構(gòu)鑒定FUDR 0.25 g，加入干燥的二氯甲烷30 mL中，依次加入乙酸酐0.31

10、g，吡啶3 mL，催化量4二甲氨基吡啶. 反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢? h，反應(yīng)結(jié)束后加入250 mL乙酸乙酯，依次用稀HCl，稀NaHCO3和H2O洗滌，加入適量無水Na2SO4干燥2 h，過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去大部分乙酸乙酯，加入石油醚使產(chǎn)物結(jié)晶析出，抽濾，干燥. 合成路線如圖1所示. 進(jìn)行核磁共振氫譜(1HNMR)鑒定.1.2.2FUDRA穩(wěn)定性考察反相高效液相色譜法(RPHPLC)測(cè)定FUDRA的含量. 流動(dòng)相甲醇水(3575)；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長：268 nm；保留時(shí)間：(5.50.1) min；溫度：25. 配制FUDRA系列濃度標(biāo)準(zhǔn)液，分別進(jìn)樣20 L，以峰面積（A）對(duì)濃

11、度（c）進(jìn)行線性回歸，在0.5100.0 mg/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=-454.22+33317c，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，P0.05(n=5). 高、中、低三種濃度的平均回收率為102.4% (RSD=2.21%). 精密吸取FUDRA(8.75 mg/L)甲醇液1 mL，加到9 mL 37水浴預(yù)熱的pH分別為4.5,6.8, 7.4,7.8的緩沖液中,混漩振蕩1 min后,置入37水浴中,于不同時(shí)間點(diǎn)取樣20 L進(jìn)樣，測(cè)定殘留FUDRA濃度. 以濃度的自然對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間進(jìn)行線性回歸，求反應(yīng)速率常數(shù)和FUDRA水解半衰期. 為評(píng)價(jià)FUDRA在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為FUDR的速度，進(jìn)行了F

12、UDRA在小鼠血清及不同組織勻漿中的水解動(dòng)力學(xué)研究. 小鼠眼眶取血后處死，迅速取出肝、腎、肺組織. 血漿離心10 min（14 000 g），取上清液0.5 mL加pH 6.8的緩沖液4.0 mL；肝、腎、肺組織稱質(zhì)量，加五倍量pH 6.8的緩沖液,勻漿，離心10 min（14 000 g），取上清液1.0 mL，加pH 6.8的緩沖液4.0 mL，混勻. 向37水浴中預(yù)熱的血清及組織勻漿稀釋液中加入FUDRA貯備液（87 mg/L）各1.0 mL，漩渦混合1 min，于不同時(shí)間取樣200 L，加甲醇500 L，混合1 min，離心5 min（14 000 g），取上清液20 L進(jìn)樣，測(cè)定殘留藥物濃度. 以濃度的自然對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間進(jìn)行線性回歸，求FUDRA水解速率常數(shù)和半衰期.1.2.3FUDRA分配系數(shù)(P)的測(cè)定精密量取FUDRA的正辛醇溶液（84 mg/L） 5 mL，加入用正辛醇飽和過的磷酸鹽緩沖液（pH 6.8） 5 mL, 混合5 min,HPLC法測(cè)定兩相FUDRA濃度；用正辛醇飽和過的磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）配制FUDR溶液（120 mg/L），精密量取該液5 mL，加入正辛醇5 mL, 混合5 min,RPHPLC法測(cè)定兩相中FUDR濃度.