淋巴細(xì)胞貼壁試驗(yàn)診斷風(fēng)濕性心臟病意義的探討

1、    淋巴細(xì)胞貼壁試驗(yàn)診斷風(fēng)濕性心臟病意義的探討        【摘要】目的為尋找新的特異性和敏感性的指標(biāo)，以探討風(fēng)濕熱的活動性，從而提高風(fēng)濕熱和風(fēng)心病的診療水平。方法用A組乙型溶血鏈球菌特異性菌膜抗原和1%植物血凝素(PHA)作為刺激物，分別測定38例健康對照組，30例風(fēng)濕性心臟病風(fēng)濕活動組，24例風(fēng)濕性心臟病靜止組的外周血淋巴細(xì)胞貼壁抑制百分率(Lymphocyte adherence inhibition percent, LAIP)和促凝血活性(Procoagula

2、nt activity, PCA)。結(jié)果風(fēng)心病活動組IAIP(34.47%±4.56%)顯著高于風(fēng)心靜止組(13.56%±3.31%)和健康對照組(12.50%±3.73%)，而后二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。風(fēng)心活動組、風(fēng)心靜止組、健康對照組的淋巴細(xì)胞貼壁抑制指數(shù)同PCA相關(guān)系數(shù)分別為0.859 4、0.843 1、0.828 7，存在著正相關(guān)性，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異。PCA陽性率略高于LAIP，但是二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論LAIP在判斷風(fēng)濕活動方面有較大價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】鏈球菌風(fēng)濕性心臟病淋巴細(xì)胞貼壁抑制 Leucocyte adherence inhibition assa

3、y in the diagnosis of rheumatic carditisZhang Hanwei, Yu Buyun, Gu Jieruo, et al. Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510630 【Abstract】ObjectiveTo improve the diagnosis and treatment of rheumatic fever and probe for specific and sensitive methods for de

4、tecting the activity of rheumatic fever. MethodA specific antigen from group A streptococcal cell membrane and 1% PHA used as a stimulant to test the peripheral blood lymphocyte adherence inhibition percent (LAIP) and procoagulant activity (PCA) in 30 cases of active rheumatic carditis, 24 cases of

5、inactive rheumatic carditis and 38 cases of normal controls. ResultsLALP of active rheumatic carditis groups are much higher than those of normal controls and inactive rheumatic carditis groups (P0.05). There was no statistical difference between inactive rheumatic carditis groups and normal control

6、s groups. It was found that a positive relationship between LAIP and PCA and no statistical difference of positive rate. ConclusionLAIP is of important significance in the diagnosis of rheumatic carditis.【Key words】Streptococcus Rheumatic Carditis風(fēng)濕熱(RF)和風(fēng)濕性心臟病(RHD)是A組乙型溶血型鏈球菌(GAS)咽喉部感染后引起自身免疫性疾病，RH

7、D是其常見后果。雖然，近二十年來發(fā)病率有明顯下降的趨勢。但是在80年代后期，歐美等西方發(fā)達(dá)國家再度出現(xiàn)新的地區(qū)性流行1，2。廣東、海南、四川、湖南和北方某些省份仍是高發(fā)地區(qū)3。學(xué)齡兒童(518歲)，初發(fā)RF發(fā)病率為16/10萬。估計(jì)我國每年新增RF病例達(dá)到200萬人，風(fēng)心病年患率1%，RHD手術(shù)費(fèi)用達(dá)億元以上，成為社會和家庭的沉重負(fù)擔(dān)，尤其近年來，不典型癥狀逐年增多，使風(fēng)心病發(fā)病更隱匿，所以尋找新的特異性和敏感性的免疫指標(biāo)，以探討風(fēng)濕熱的活動性尤為有意義。資料與方法1.病例選擇與分組風(fēng)濕性心臟病活動組，30例，男11例，女19例，平均年齡(32.14±12.03)歲，診斷根據(jù)1992

8、年Jones修訂標(biāo)準(zhǔn)，且在臨床上發(fā)現(xiàn)有新的雜音性質(zhì)的改變或超聲心動明顯的瓣膜病征象，并排除其他引起上述瓣膜改變的病因。風(fēng)濕性心臟病靜止組：共24例，男9例，女15例，平均年齡(34.25±10.56)歲，符合Jones標(biāo)準(zhǔn)，即臨床有心臟雜音，超聲心動顯示瓣膜狹窄或關(guān)閉不全表現(xiàn)為治療半年以上且臨床和實(shí)驗(yàn)室無風(fēng)濕活動的門診隨訪患者。正常對照組：38例，男24例，女13例，年齡(31.34±5.43)歲。來自本院健康體檢者與病例組比較性別、年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.A組溶血性鏈球菌菌膜抗原制備(Freimer法)63.檢測方法取樣本抗凝血、淋巴細(xì)胞分離液分離白細(xì)胞，Hanks洗滌后兩

9、次，用含10%小牛血清的1640液稀釋成等濃度，等量分為三份，其中分別加入A組乙型溶血性鏈球菌特異性菌膜抗原，1%植物血凝素和1640空白對照，37 1小時(shí)后，混勻取5L加入細(xì)胞計(jì)數(shù)板，洗去未貼壁細(xì)胞，鏡檢記數(shù)，按下公式計(jì)算淋巴細(xì)胞抑制百分率。淋巴細(xì)胞抑制4.對照檢查項(xiàng)目紅細(xì)胞沉降率(ESR，魏氏法)，C反應(yīng)蛋白(CRP，單向擴(kuò)散)，循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC，PEG-6000比濁法)，抗鏈球菌溶血素“O”(ASO，乳膠凝膠法)，上述各檢查項(xiàng)目均與PCA試驗(yàn)同時(shí)取血樣本。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理在本研究中，對單因素多個樣本均數(shù)比較，則先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若各組方差齊用F檢驗(yàn)，若各組方差不齊用F檢驗(yàn)，兩組陽性

10、率的比較用卡方檢驗(yàn)，以P0.05顯著差異。結(jié)果1.風(fēng)濕性心臟病活動組LAIP顯著增高風(fēng)濕性心臟病活動組和健康對照組相比較，風(fēng)濕性心臟病活動組外周血淋巴細(xì)胞貼壁抑制百分率顯著增高，而風(fēng)濕性心臟病靜止組和健康對照組比較，二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表1。表1風(fēng)濕性心臟病各組LAIP同健康對照組比較組別例數(shù)LAIPP健康對照組3812.50%±3.73%風(fēng)心活動組3034.47%±4.56%0.01風(fēng)心靜止組2413.56%±3.31%0.052.在特異性菌膜抗原刺激下，風(fēng)濕性心臟病活動組LAIP顯著增高，而在非特異性抗原PHA刺激下，風(fēng)心病活動組、風(fēng)心病靜止組和健康對照組無統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)差異，見表2。 表2在菌膜抗原刺激下各組LAIP的比較組別風(fēng)心活動組P風(fēng)心靜止組P正常對照組P特異性菌膜抗原34.47%±5.83%7.16%±1.92%5.98%±3.03%植物血凝素8.95%±2.52%0.016.23%±1.61%0.057.51%±3.16%0.053.LAIP同PCA相關(guān)性的比較。在特異性細(xì)菌膜抗原刺激下，風(fēng)濕性心臟病活動組、風(fēng)濕性心臟病靜止組和健康對照組的PCA值與其LAIP值存在正相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)分別為0.859?4、0.843?1、0.828?7。在植物血凝素刺激下，各組PCA值與其LAIP值也

12、存在正相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)分別為0.878?7、0.898?0、0.740?1。4.LAIP同PCA陽性率的比較。本組研究PCA陽性率為78.17%，LAIP陽性率為77.78%，PCA陽性率高LAIP陽性率，但二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.LAIP陽性率與其他非特異實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的比較LAIP在反映風(fēng)濕活動性方面較ESR、CRP敏感；在反映免疫狀態(tài)指標(biāo)CIC陽性率高；在反映鏈球菌感染及鏈球菌免疫反應(yīng)方面，較ASO優(yōu)。以上比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表3。 表3PCA陽性率與其他非特異實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的比較項(xiàng)目檢測例數(shù)陽性數(shù)(n)陽性率(%)PPCA544277.78ESR543259.250.05CIC52305

13、7.690.05CRP491020.040.05ASO502444.440.056.LAIP的特異度LAIP正常例數(shù)(真陰性)為36例，LAIP增高例數(shù)(假陽性)為6例，應(yīng)用診斷性四格表檢測的LAIP特異性(用特異度表示)。討論風(fēng)濕熱的預(yù)后主要取決于心臟是否受累以及受累的嚴(yán)重程度，由于風(fēng)濕熱和風(fēng)濕性心臟病風(fēng)濕活動發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚，因而國內(nèi)外尚缺乏早期特異診斷方法。風(fēng)濕熱的診斷歷來沿用修訂的Jones標(biāo)準(zhǔn)4，但是，近年來由于不典型及輕型病例的逐漸增多，按此標(biāo)準(zhǔn)會產(chǎn)生較高的誤診和漏診，約占病例42%70%5。因此提高早期診斷水平對于風(fēng)濕性心臟病診療具有重要意義。余步云等應(yīng)用已致敏淋巴細(xì)胞，再次

14、接觸特異性抗原刺激，其表面可以出現(xiàn)凝血酶樣物質(zhì)，可以加速凝血的原理，率先在國內(nèi)建立了外周血淋巴細(xì)胞促凝血活性(PCA)試驗(yàn)，用于RF和RHD風(fēng)濕活動的早期診斷，不失為該領(lǐng)域重要發(fā)現(xiàn)6。但是PCA試驗(yàn)需要一定的設(shè)備和條件，操作過程較復(fù)雜，耗費(fèi)時(shí)間長，在基層醫(yī)療單位廣泛推廣有一定難度。淋巴細(xì)胞貼壁抑制試驗(yàn)是經(jīng)典淋巴細(xì)胞功能檢測方法，其原理為人體外周血淋巴細(xì)胞具有粘附玻璃或塑料表面的性能，在體外實(shí)驗(yàn)條件下，已被特異性抗原致敏的淋巴細(xì)胞，再次受特異性抗原刺激后，可產(chǎn)生淋巴細(xì)胞粘附抑制因子，使白細(xì)胞喪失粘附玻璃壁的能力。此方法簡易可行，重復(fù)性好，多年以來一直用于許多疾病的研究，如腫瘤、結(jié)核、麻風(fēng)等傳染病

15、患者及器官移植的檢測，所采用的刺激物有腫瘤細(xì)胞、結(jié)核菌素，以及抗原抗體免疫復(fù)合物等。本研究采用特異性菌膜抗原作為刺激物，應(yīng)用LAIP用于風(fēng)濕熱和風(fēng)濕性心臟病風(fēng)濕活動的診斷，國內(nèi)外尚未見報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，在特異性菌膜抗原刺激下，風(fēng)心活動組淋巴細(xì)胞貼壁抑制指數(shù)顯著增高于風(fēng)心靜止組和健康對照組，而風(fēng)心靜止組和健康對照組無顯差異。說明淋巴細(xì)胞貼壁抑制指數(shù)在風(fēng)心病活動判別上具有明顯意義。在非特異性抗原(PHA)刺激下，風(fēng)心活動組、風(fēng)心靜止組、健康對照無明顯差異，說明淋巴細(xì)胞貼壁抑制試驗(yàn)在診斷RF和RHD風(fēng)心活動中，作為刺激物的菌膜抗原具有特異性。風(fēng)心活動組、風(fēng)心靜止組、健康對照組的淋巴細(xì)胞貼壁抑制指

16、數(shù)同PCA相關(guān)系數(shù)分別為0.854 9、0.843 1、0.828 7，存在著正相關(guān)性，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異。PCA陽性率略高于LAIP，但是二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此LAIP可望為PCA試驗(yàn)提供一種新的方法。本研究結(jié)果證實(shí)，LAIP陽性率為78.78%，高于其他非特異實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，有利于減少漏診；LALP有較高等特異度(85.71%)，有利于減少誤診。此外，淋巴細(xì)胞貼壁抑制試驗(yàn)要求設(shè)備少，整個檢驗(yàn)在四個小時(shí)內(nèi)完成，提高了檢驗(yàn)效率，更利于基層普及和推廣。所以淋巴細(xì)胞貼壁抑制試驗(yàn)在風(fēng)濕性心臟病風(fēng)濕活動判別上很可能有較大實(shí)用意義，值得作進(jìn)一步深入的研究。中山醫(yī)科大學(xué)青年基金資助項(xiàng)目作者單位：張漢偉（5106

17、30廣州市中山醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院風(fēng)濕科）余步云（510630廣州市中山醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院風(fēng)濕科）古潔若（510630廣州市中山醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院風(fēng)濕科）陳國慶（510630廣州市中山醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院風(fēng)濕科）參考文獻(xiàn)1，Zang will km, et al. Acute rheumatic fever in western pennsylvania: a persistent problem Into 1990 s. J. Pediatr. 1991,118:5615632，Burge. DJ, et al. Acute rheumatic fever. Cardiovasculin. 1993,23:3233，饒栩栩，黃震東，岑潤超. 我國風(fēng)濕性心臟病的流行現(xiàn)狀. 中華心血管病雜志，1998，26(2)：981004，Hoffmann s: Incidence and diagnosis of acute rhematic