地貧基因檢測在臨床診斷中的應(yīng)用

1、地中海貧血基因檢測的臨床應(yīng)用地中海貧血基因檢測的臨床應(yīng)用 王飛雁王飛雁廣東陽春苦難家庭廣東陽春苦難家庭 四個孩子三個地四個孩子三個地貧貧地中海貧血地中海貧血地中海貧血，又稱海洋性貧血。地貧是全球分布最廣、累計人群最多的一種單基因遺傳病， 全球約有億地貧基因攜帶者，我國常見以南各省為地貧高發(fā)區(qū)。地貧是導(dǎo)致出生缺陷高發(fā)，圍產(chǎn)兒和嬰兒死亡的主要原因之一。地中海貧血遺傳模式地中海貧血遺傳模式 地中海貧血地中海貧血 地中海貧血的共同特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，致使血紅蛋白的組成成分改變。 地中海貧血分為-地中海貧血和-地中海貧血。重型重型-地貧地貧又

2、稱Hb Barts Hb Barts 水腫胎兒綜合癥水腫胎兒綜合癥 ，胎兒常于30-40周時流產(chǎn)、死胎或娩出后半小時內(nèi)死亡。重型重型-地貧地貧胎兒出生時與正常胎兒無異，到3-6個月時就會逐漸出現(xiàn)嚴(yán)重貧血，如果不治療，一般5歲左右死亡。中間型地貧中間型地貧患兒需經(jīng)常輸血，生存質(zhì)量明顯下降。目前地貧治療上尚無有效根治尚無有效根治辦法，患兒家庭背負(fù)著極大的精神壓力和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。地貧的危害性地貧的危害性廣東為地貧的高發(fā)區(qū)廣東為地貧的高發(fā)區(qū) 地區(qū)地區(qū)攜帶率攜帶率(%)(%) 地貧地貧 地貧地貧 廣東廣東 8.53 2.54 廣西廣西 14.95 6.78 四川四川 1.92 2.18 臺灣臺灣 4.20

3、1.10 香港香港 5.02 3.41Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5. 廣東省人群中廣東省人群中 地貧的攜帶者頻率地貧的攜帶者頻率 基因變異基因變異等位基因數(shù)等位基因數(shù)頻率頻率(%)(%) 地貧染色體地貧染色體4788.53 (- SEA) 缺失缺失2324.14 (- 3.7) 缺失缺失1743.10 (- 4.2) 缺失缺失530.95 (- CS) 突變突變100.18 (-THAI) 缺失缺失20.04 (- QS) 突變突變20.04 (-11.1)

4、 缺失缺失10.02 1CD118 (+TCA)10.02 - -gene 缺失缺失10.02 未知突變未知突變20.04 基因變異基因變異等位基因數(shù)等位基因數(shù)頻率頻率(%)(%) 地貧染色體地貧染色體1982.54 CDs 41-42 (-CTTT)720.92 IVS-2-654 (CT)490.63 28 (AG)330.42 CD 26 (GA)100.13 CD 17 (AT)80.10 CDs 71-72 (+A)70.09 CD 43 (GT)70.09 -29 (AG)40.05 CDs 27-28 (+A)40.05 -gene deletion10.01 未知突變未知突變3

5、0.04廣東省人群中廣東省人群中 地貧的攜帶者頻率地貧的攜帶者頻率 第一道防線第一道防線-婚前檢查、孕前檢查、產(chǎn)前篩查婚前檢查、孕前檢查、產(chǎn)前篩查 了解自己是否為地貧基因攜帶者。新婚青年要主動到當(dāng)?shù)蒯t(yī)療保健機(jī)構(gòu)進(jìn)行婚前、孕前健康檢查；孕婦在懷孕3個月前要進(jìn)行首次產(chǎn)前檢查。 第二道防線第二道防線-產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷 診斷自己是否懷上地貧胎兒。婚前檢查、孕前檢查，以及產(chǎn)前篩查和診斷是婚前檢查、孕前檢查，以及產(chǎn)前篩查和診斷是 地貧防控的重要手段！地貧防控的重要手段！婚前檢查、孕前檢查，以及產(chǎn)前篩查和診斷婚前檢查、孕前檢查，以及產(chǎn)前篩查和診斷是地貧防控的重要手段！是地貧防控的重要手段！“對攜帶同型地貧基

6、因夫婦每次懷孕的胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷，發(fā)現(xiàn)為重度地貧胎兒時及時干預(yù)，是目前國際上避免重度地貧患兒出生的最好辦法?！?-廣東省婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心主任尹愛華 這一措施在地貧高發(fā)的地中海沿岸國家、東南亞的泰國、新加坡，我國香港、澳門、臺灣地區(qū)和廣西普遍采用，已取得良好效果。例如在中國香港地區(qū)已基本消滅了重度地貧患兒出生。 地貧篩查的方法主要有血常規(guī)測定、血紅蛋白電泳等傳地貧篩查的方法主要有血常規(guī)測定、血紅蛋白電泳等傳統(tǒng)方法統(tǒng)方法，這些方法雖操作簡單，但不能對地貧進(jìn)行確診，屬于初步篩查方法，輕型攜帶者易漏檢，可能造成重型地貧兒的出生。 地貧基因檢測地貧基因檢測能明確地貧基因突變或缺失類型，并對地貧患者

7、進(jìn)行基因確診，還可以檢出輕型攜帶者，有助于減少和防止重型地貧兒的出生。常見地貧篩查及診斷方法比較常見地貧篩查及診斷方法比較亞能生物地中海貧血基因檢測亞能生物地中海貧血基因檢測整體解決方案整體解決方案.-地貧基因檢測地貧基因檢測 - -地中海貧血地中海貧血l-地中海貧血（簡稱-地貧）是一種由于-珠蛋白基因突變導(dǎo)致肽鏈表達(dá)失衡而產(chǎn)生的單基因遺傳血液病。l多由-珠蛋白基因的缺失突變所致。l中國地區(qū)常見的3種缺失型 -地貧主要由 -SEA、-、 -缺失引起。- -地貧基因缺失示意圖地貧基因缺失示意圖-SEA 2 1211- -地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型Normal (/) 正常正常 靜止

8、型靜止型-單一單一基因缺失或喪失功能基因缺失或喪失功能 臨床一般無癥狀，血液學(xué)檢查一般無異樣- -地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型 o Thal trait( /-SEA)( - / - )血紅蛋白血紅蛋白H病病-3個個基因缺失或喪失功能基因缺失或喪失功能 肝脾腫大，中度貧血。小細(xì)胞，低色素，HbH含量較高，易發(fā)生溶血，有些病例需不定期輸血，癥重者甚至需切除脾臟。 標(biāo)準(zhǔn)型標(biāo)準(zhǔn)型-2個個基因缺失或喪失功能基因缺失或喪失功能 臨床無癥狀，血液學(xué)檢查出現(xiàn)輕微貧血，紅細(xì)胞大小不均一，平均紅細(xì)胞體積(MCV) 及平均血紅蛋白含量(MCH)明顯偏低。Hb H disease(- /-SEA)(-

9、/-SEA)- -地貧的基因型與表現(xiàn)型地貧的基因型與表現(xiàn)型Hb Barts Hydrops(-SEA/-SEA)Hb Barts Hb Barts 水腫胎兒綜合癥水腫胎兒綜合癥 l4個基因缺失或喪失功能l胎兒常于30-40周時流產(chǎn)、死胎或娩出后半小時內(nèi)死亡，肝脾腫大，腹水，胸水。l由于胎兒無法合成亞基，臍血血紅蛋白（ Hb Barts ，4）含量高。非缺失型非缺失型-地貧地貧n 概念：概念： 基因發(fā)生點(diǎn)突變或少數(shù)幾個堿基的缺失。n 中國常見的非缺失型突變：中國常見的非缺失型突變：Hb CS Hb CS 2 CD 142 TAACAA (Gln)Hb QS Hb QS 2 CD 125 CTGC

10、CG (LeuPro)Hb WS Hb WS 2 CD 122 CACCAG (HisGlnn 特點(diǎn)特點(diǎn)： 常發(fā)生于2基因，比缺失型導(dǎo)致更嚴(yán)重的珠蛋白鏈合成的減少。n根據(jù)-地貧基因缺失特點(diǎn)，利用多重GAP-PCR技術(shù)可同管檢測3種缺失型及正常共4種基因型。通過電泳條帶大小來判斷缺失情況。亞能生物亞能生物 - -地中海貧血基因檢測試劑盒地中海貧血基因檢測試劑盒 - -地中海貧血基因檢測操作流程地中海貧血基因檢測操作流程亞能生物亞能生物- -地貧基因檢測產(chǎn)品特點(diǎn)地貧基因檢測產(chǎn)品特點(diǎn)同時檢測3種-地貧缺失型： -、-和-SEA，覆蓋95%以上-地貧操作簡便：PCR+電泳，專用Makers，結(jié)果判讀直

11、觀簡便 - -地貧基因檢測臨床意義地貧基因檢測臨床意義n 對-地貧患者進(jìn)行基因確診。n 可廣泛用于-地貧的篩查，對-地貧基因缺陷攜帶者進(jìn)行鑒別，對于減少和防止重癥地貧兒的出生及優(yōu)生優(yōu)育具有重要的臨床意義。非缺失型非缺失型- -地中海貧血基因突變檢測試劑地中海貧血基因突變檢測試劑盒盒n 同時檢測 CS、 QS、 WS點(diǎn)突變Wild typeCSMWSMQSMn 臨床意義：臨床意義： 作為 -地中海貧血三種缺失型的補(bǔ)充，對懷疑 -地中海貧血有漏診的患者進(jìn)行 CS、 QS、 WS點(diǎn)突變的診斷，確定具體的基因突變類型. -地中海貧血基因檢測地中海貧血基因檢測 - -地中海貧血地中海貧血-地中海貧血是一

12、種由于-珠蛋白基因突變導(dǎo)致肽鏈合成減少或缺乏而產(chǎn)生的單基因遺傳血液病，多由-珠蛋白基因點(diǎn)突變所致。 在中國人群中常見的突變位點(diǎn)有CD41-42M， -28M， IVS-II-654M，CD71-72M等 -地貧常見突變位點(diǎn)及表型地貧常見突變位點(diǎn)及表型 -地貧基因型與表型的關(guān)系地貧基因型與表型的關(guān)系 -地貧表現(xiàn)型地貧表現(xiàn)型亞能生物亞能生物- -地中海貧血基因檢測試劑盒地中海貧血基因檢測試劑盒利用基因芯片技術(shù)可以同時檢測中國人群8個常見位點(diǎn)和9個少見位點(diǎn)共17個位點(diǎn)的19種 -地貧基因突變類型 - -地中海貧血基因診斷操作流程地中海貧血基因診斷操作流程- -地中海貧血基因診斷結(jié)果判讀地中海貧血基因診斷結(jié)果判讀41-42N654N28N71-72N17NEN31N27/28M41-42M654M28M71-72M17MEM3