探析新生兒肺炎克雷伯菌的耐藥性

1、探析新生兒肺炎克雷伯菌的耐藥性摘要： 目的 分析我院新生兒科病區(qū)產(chǎn)ESBLs AmpC酶的肺炎克雷伯 菌的耐藥情況，指導(dǎo)臨床合理用藥。方法按CLSI推薦的超廣譜B內(nèi)酰胺酶（ESBLs確證試驗(yàn),對肺炎克雷伯菌進(jìn)行ESBLs檢測,并用三維試驗(yàn)法、三維試驗(yàn) 抑制試驗(yàn)進(jìn)行AmpC酶檢測。結(jié)果160株肺炎克雷伯菌中,檢到產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌84株，陽性率高達(dá)% 71株耐頭抱西丁菌株檢到23株產(chǎn)Amp（酶,其中 單產(chǎn)AmpC# 5株,產(chǎn)Ampc+ESBL菌株18株。AmpC#陽性率為（23/160）。結(jié) 論分離自我院新生兒科的肺炎克雷伯菌對 B -內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥嚴(yán)重，主要以產(chǎn)ESBLs和（或）A

2、mpC酶為主。給臨床抗感染治療帶來很大困難,是院內(nèi)感 染的一大隱患。關(guān)鍵詞：超廣譜B -內(nèi)酰胺酶 AmpC酶 肺炎克雷伯菌 三維試驗(yàn) 三維抑制試驗(yàn)AmpC酶是繼ESBLs之后，臨床上出現(xiàn)的腸桿菌科細(xì)菌的又一重要耐藥機(jī) 制，肺炎克雷伯菌作為條件致病菌是新生兒感染性肺炎的常見病原菌，也是重要的院內(nèi)感染病原菌，在醫(yī)院感染分離率一直趨于首位。近年來，由于廣譜抗菌藥物 的廣泛大量應(yīng)用,導(dǎo)致這些細(xì)菌出現(xiàn)高產(chǎn) AmpC#菌株。近年來,編碼AmpC#的基 因已轉(zhuǎn)移到質(zhì)粒上，并在大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌中出現(xiàn)，易在不同菌種間橫 向播散。所以監(jiān)測和檢測這類細(xì)菌產(chǎn) ESBLs和 AmpC#的情況,對指導(dǎo)臨床合理使

3、用抗菌藥物以及預(yù)防和控制院內(nèi)感染的發(fā)生具有重要的意義。1 材料與方法材料菌株來源 肺炎克雷伯菌160株均分離自20XX年1月至20XX年12 月我院新生兒病區(qū)患兒呼吸道標(biāo)本。一次性培養(yǎng)皿與藥敏紙片一次性培養(yǎng)皿為鄭州博賽產(chǎn)品；藥敏紙片 為英國OXOID公司產(chǎn)品。試劑克拉維酸（中國藥品生物制品檢定所）;鄰氯西林（上海四藥有限公司）。質(zhì)控菌株ATCC25922, ATCC700603, 029, 029M。方法藥敏試驗(yàn)按CLSI推薦的K-B紙片法進(jìn)行測定,并按其制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀超廣譜B -內(nèi)酰胺酶（ESBLs）檢測 按CLSI推薦的確證試驗(yàn)測定ESBLs產(chǎn)Amp（酶菌株初篩 采用K-B法,按照CL

4、SI推薦的方法進(jìn)行,頭抱 西丁 （30卩g/片）抑菌環(huán)直徑w 17mm寸,提示對FOX中介或耐藥為疑產(chǎn)Amp（酶菌 株。B -內(nèi)酰胺酶粗提取物的制備 取50卩麥?zhǔn)蠁挝痪杭尤?2ml 胰蛋白胨肉湯中,35 C恒溫?fù)u床孵育6h,4000r/min,4 C離心20min,棄上清，將沉 淀物-70C反復(fù)凍融5次,加入pH的/L磷酸鹽緩沖液混勻,14000r/min,4 C離心 20min,取上清液即為酶粗提物，無菌試驗(yàn)后-20°C保存。三維試驗(yàn)對可疑菌株的酶提取物用頭抱西丁三維試驗(yàn)方法進(jìn)行AmpC酶確證。三維試驗(yàn)抑制試驗(yàn)在涂有ATCC25922菌液的M-H平皿中央貼1片30卩g頭抱曲松紙片

5、，垂直挖四個(gè)狹縫，分別加入40卩l(xiāng)的試驗(yàn)菌株酶粗提取物、 36卩l(xiāng)酶粗提取物+4卩l(xiāng) 2mmol/L鄰氯西林、36卩l(xiāng)酶粗提取物+4卩l(xiāng) 2mmol/L 克拉維酸、36卩l(xiāng)酶粗提取物+4卩l(xiāng) 2mmol/L克拉維酸+4卩l(xiāng) 2mmol/L鄰氯西林,35 C培養(yǎng)24h,擴(kuò)大生長區(qū)域消失為酶抑制實(shí)驗(yàn)陽性。2 結(jié)果160株肺炎克雷伯菌耐藥現(xiàn)象較為嚴(yán)重，對16種抗菌藥物中的13種 均出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中對青霉素類、一代至四代頭抱菌素的耐藥率均超過 60% ,經(jīng)ESBLs確證試驗(yàn)測定產(chǎn)ESBLs有 84株，陽性率高達(dá)%對加酶抑制劑的 B內(nèi)酰胺類復(fù)合制劑舒普深、特治星的敏感率僅為 % %，頭霉素類的頭

6、抱西丁敏 感率僅為，應(yīng)引起臨床重視。尚未出現(xiàn)對碳青酶烯類耐藥的肺炎克雷伯菌菌株。經(jīng)產(chǎn)AmpC#菌株初篩試驗(yàn)檢出可疑產(chǎn) AmpC#細(xì)菌71株，經(jīng)頭抱西丁 三維試驗(yàn)方法確證產(chǎn) AmpCB細(xì)菌5株。經(jīng)三維抑制試驗(yàn)確證單產(chǎn) AmpCB菌株5 株（與三維試驗(yàn)相符）,單產(chǎn)ESBLs菌株84株（與ESBLs紙片確證試驗(yàn)相符）。同時(shí) 產(chǎn)Ampc+ESBL菌株18株，即產(chǎn)超超廣譜B內(nèi)酰胺酶（SSBLs）,耐藥情況非常嚴(yán)重, 對B-內(nèi)酰胺類抗菌藥物（包括含酶抑制劑的復(fù)合制劑）全部耐藥,氨基糖苷類、 喹諾酮類耐藥率也有所提高，僅碳青酶烯類未出現(xiàn)耐藥。3 討論超廣譜B內(nèi)酰胺酶（ESBLs）屬于Bush分類2be亞組,

7、分子分類中屬于A 類酶,ESBLs是目前腸桿菌科細(xì)菌（尤其是肺炎克雷伯菌）對廣譜頭抱菌素產(chǎn)生耐 藥的最主要原因，它由質(zhì)粒介導(dǎo)，可使細(xì)菌對青霉素和一、二、三、四代頭抱菌素 以及單環(huán)菌素耐藥，但對頭霉素、碳青酶烯類及酶抑制劑（克拉維酸）敏感。Amp邙 內(nèi)酰胺酶是由革蘭氏陰性桿菌產(chǎn)生的主要由染色體介導(dǎo)的絲氨 酸頭抱菌素酶組成的一個(gè)酶家族,屬于Bush分類中的I組(C類),能水解三代頭 抱,不被B內(nèi)酰胺酶抑制劑克拉維酸所抑制。研究表明：B -內(nèi)酰胺類抗菌藥物頭 抱西丁和碳青酶烯抗菌藥物亞胺培南是強(qiáng)有力的AmpCB誘導(dǎo)劑。如果用頭抱西丁或頭抱西丁聯(lián)合第三代頭抱菌素治療含有ampC基因的腸桿菌科細(xì)菌如肺炎

8、克雷伯菌、大腸埃希菌，那么在治療過程中會因?yàn)锳mpC酶的大量產(chǎn)生而導(dǎo)致治療失 敗。理論上講,四代頭抱對產(chǎn)AmpC酶菌株敏感,但如果同時(shí)產(chǎn)ESBLs則四代頭抱 也將無效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，我院新生兒病區(qū)分離出的160株肺炎克雷伯菌耐藥情況 十分嚴(yán)重,僅對阿米卡星、亞胺培南、美羅培南尚未出現(xiàn)耐藥 ，其他16種抗菌藥 物均出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中對新生兒適用的 B -內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥嚴(yán)重 一代至四代頭抱菌素耐藥率均超過 60%,舒普深、特治星敏感率也僅有呀口%產(chǎn) 超超廣譜B內(nèi)酰胺酶(SSBLs)的肺炎克雷伯菌檢出率高達(dá) (18/160),針對這類 細(xì)菌臨床用藥唯有選用亞胺培南、美羅培南,抗菌藥物可選范圍之局限令人擔(dān)憂。由于臨床大量廣泛使用三代頭抱、亞胺培南、美羅培南，在抗菌藥物的選擇壓力下我院新生兒科已篩選出持續(xù)高產(chǎn)型AmpC酶菌株,一旦處理不當(dāng)，將持續(xù)在醫(yī)院環(huán)境內(nèi)擴(kuò)散。如果進(jìn)一步出現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)的 AmpC酶菌株,則對院內(nèi)