生物技術交底書模板

1、.技術交底書模板 - 生物類1. 發(fā)明創(chuàng)造名稱：應簡單明確地描述發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容，可按其技術特點、用途或技術和用途雙重命名，發(fā)明創(chuàng)造名稱不得超過25 個字，避免使用宣傳性、廣告性詞匯。一種快速鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的方法2背景技術及現(xiàn)有技術的缺陷和不足：背景技術：是對最接近的現(xiàn)有技術的說明，可分為大的背景技術和小的背景技術兩個方面進行介紹，大的背景技術主要指該技術領域的總體狀況，小的背景技術指與本發(fā)明改進的具體技術密切相關的技術狀況；背景技術的詳細程度，以不需要再去看文獻即可理解該技術密切相關的技術狀況，如果現(xiàn)有技術出自專利文獻、期刊、書籍，則提供出處?，F(xiàn)有技術的缺陷和不足：1. 客觀

2、評價現(xiàn)有技術的缺點，會帶來哪些問題，這些缺點是針對本發(fā)明的優(yōu)點來說的，本發(fā)明正是要解決這些問題和缺點；本發(fā)明無法解決的技術問題不必描述，本發(fā)明不能解決的缺點也不必寫；2. 如果找不出對比技術方案及其缺點，可用反推法，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)點來找出由對應的缺點，還可以從結構角度推導出現(xiàn)有先進產(chǎn)品的缺點；3. 缺點可以是代謝產(chǎn)物性能差、產(chǎn)量低、菌種穩(wěn)定性不高等類似問題；針對前面現(xiàn)有技術的所有缺點，逐一正面描述本發(fā)明所要解決的技術問題。近年來， 非結核分枝桿菌感染明顯增加，結核與非結核分枝桿菌在臨床上引起的疾病難以區(qū)別，最具代表性的結核分枝桿菌引起的結核病酷似非結核分枝桿菌肺病，但兩者對抗結核藥物敏感性不同

3、，故正確鑒定分枝桿菌在疾病診斷及治療中至關重要。傳統(tǒng)的生物學鑒定方法主要依據(jù)細菌生長速度、色素產(chǎn)生、對藥物耐受性、生化反應等，方法復雜、費時，在得到分離培養(yǎng)物后仍需24 周方能獲得結果，因此有必要建立一種快速診斷結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的方法，對結核病確證及臨床用藥具有重要的指導意義。目前鑒別結核分枝桿菌的分子生物方法有PCR， ELISA 、免疫;.膠體金等方法，以上各種方法雖然可能在臨床上提供較好的價值，但因需要昂貴的儀器設備、繁瑣的操作過程、靈敏度低等不同的原因未能在臨床上大規(guī)模推廣使用。環(huán)介導等溫基因擴增技術（Loop-Mediated Isothermal Amplificati

4、on ，以下簡稱 LAMP 法）是日本榮研化學株式會社于2000 年前后開發(fā)出的基因擴增技術，其具有快速簡便、操作準確、容易普及、安全可靠的優(yōu)點，目前尚未有將LAMP 法應用于快速鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌。3具體的技術方案描述：本部分所提供的內(nèi)容涉及專利申請文件中最重要的部分，越詳細越好。對于發(fā)明專利要求保護的主題是一個技術方案，因而在這部分應當闡述本發(fā)明要解決的技術問題（即發(fā)明目的）是通過什么樣的技術方案來實現(xiàn)的，不能只有原理和功能介紹，應當詳細描述本發(fā)明的各個發(fā)明改進點及相應的技術方案。技術方案應當通過清楚、完整地描述本發(fā)明的技術特征（如菌種名稱、微生物生物學特性、應用效果試驗方法

5、及證明數(shù)據(jù)等），使本專業(yè)技術領域中的普通技術人員不需通過創(chuàng)造性勞動能夠實施本發(fā)明為準。對于不同類型的發(fā)明，需要采用不同的描述方式來說明其技術方案。例如：（）涉及“微生物”發(fā)明的要求應當包含微生物名稱的描述：對于新菌株的情況，微生物的分類學名稱相應為種名+菌株名，種名采用國際標準命名法命名，菌株名由申請人自己命名，例如：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）Y-1 ；生物保藏情況體現(xiàn)：對于新的微生物，應當注明“菌株名+保藏單位簡稱+保藏號”，例如：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） Y-1 ，已于 1993 年 9 月 8 日保藏在中國典型培養(yǎng)物保

6、藏中心，其簡稱為CCTCC，保藏編號為No.M93049；微生物的生物學特性的記載：包括形態(tài)學特性、培養(yǎng)特性、生理特性和代謝特性等；制造微生物的方法：描述應當以本領域普通技術人員能夠制造為準，通常包括篩選、誘變、DNA 重組技術等；記載一種微生物的應用效果：必須在說明書中提供試驗證據(jù)來證實微生物的用途和實用效果。（）涉及重組DNA技術發(fā)明的要求涉及 DNA分子本身的發(fā)明 DNA分子的詳細結構（可以是堿基序列表示）、分子類型及來源等；制備過程，包括工藝及條件、收集純化步驟、鑒定方法等；功能和用途，證實這種功能和用途的生物學實驗。涉及載體的發(fā)明制備過程，包括起始載體、制備重組的方法步驟、所用酶、處

7、理條件等；最好描繪構建重組載;.體的過程的示意圖。涉及多肽本身的發(fā)明對多肽或蛋白質(zhì)的名稱、結構、制備方法和蛋白質(zhì)的功能進行描述。涉及轉化體及其制備方法的發(fā)明描述導入的基因或重組載體、宿主、導入方法、收集轉化體的方法及鑒定方法等。本發(fā)明的目的在于提供一組用于快速鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的特異性引物，及一種用環(huán)介導等溫基因擴增技術（ LAMP 技術）快速鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的方法。本鑒定方法方便快捷、價格低廉，適于推廣應用。為達到上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案如下：本發(fā)明根據(jù)結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌 16S RNA 的特異性設計 4 條特異性引物， 利用環(huán)介導等溫擴增技術

8、，在 60 65，等溫擴增 6090 分鐘，根據(jù)顯色劑顯示的顏色來區(qū)分結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌。用于快速鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的特異性引物，包括：內(nèi)引物 1： 5-TGGTCGTAGTAGGTCGATGGGGAGTCGA TCTGCACACAGCT -3（ SEQ ID No.1 ）；內(nèi)引物 2： 5- TGCGCGATGGCGAACTCAAGGCACCGTAAACACCGTAG -3（ SEQ ID No.2 ）；外引物 1： 5-TCATCGCCGATCATCAGG -3（ SEQ ID No.3 ）；外引物 2： 5-CGAGTTTGGTCA TCAGCCG- 3（ SEQ

9、 ID No.4 ）。一種快速鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的方法，具體包括如下步驟：（ 1）模板 DNA 的提?。?提取待檢樣品的 DNA ，所述待檢樣品是已鑒定為含有分枝桿菌的樣品或分離的分枝桿菌；（ 2）環(huán)介導等溫基因擴增反應：在 200l PCR 管配制反應體系： 引物混合液1l，反應液 12.5 l，DNA 聚合酶 0.51 l，模板 DNA 25 l ，用滅菌去離子水補齊到25l，然后加入20l 的密封液，將上述反應管于6365反應 6090min ；所述引物混合液含有上述的4 條特異性引物（SEQ ID No.14 ），其中，內(nèi)引物1 的濃度為48 pmol/l、內(nèi)引物2 的濃

10、度為48 pmol/l、外引物1 的濃度為1 pmol/l、外引物2 的濃度為1 pmol/l；所述反應液含有10mM dNTP 、10×ThermoPol 反應緩沖液、 150mM MgSO4 、 5mM Betaine ，四者的體積比為79： 5： 24： 911；;.（ 3）結果判斷：在上述反應管中加入 12l 顯色劑 SYBR GREEN ，混勻后觀察反應液的顏色，若呈現(xiàn)綠色則為結核分枝桿菌，橙色則為非結核分枝桿菌。所述反應液中， 10mM dNTP ：10×ThermoPol 反應緩沖液： 150mM MgSO4 ：5mM Betaine （體積比） =8 ： 5

11、： 3： 10。所述 DNA 聚合酶為Bst DNA 聚合酶，濃度為8U/ l。4本發(fā)明創(chuàng)造的優(yōu)點：針對上述“現(xiàn)有技術的缺陷和不足”并結合技術方案中的各個發(fā)明改進點作出具體說明，即以推理方式具體分析各個改進點如何帶來這些優(yōu)點，使得對優(yōu)點的說明做到有理有據(jù)；通過對發(fā)明的分析和理論說明相結合，或實驗數(shù)據(jù)說明，它可以是產(chǎn)率或療效的提高、能耗、原材料、工序的節(jié)省，操作、控制、使用的簡便，降低毒副作用，減少環(huán)境污染、代謝產(chǎn)物有藥用價值、產(chǎn)量高、菌種存活使用時間長等。本發(fā)明方法方便快捷，能在較短的時間內(nèi)鑒別結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌，且不需要昂貴的儀器設備；靈敏度高，最低可檢測出100 個菌 /ml；特

12、異性好，本發(fā)明根據(jù)16S RNA 基因序列設計 4 對引物，與目的基因的 6 個區(qū)域結合，具有較高的特異性。本發(fā)明對于結核分枝桿菌或非結核分枝桿菌感染的診斷與臨床用藥具有較高的參考價值，適于推廣應用。5具體實施方式及附圖：具體實施方式：（ 1）微生物：應給出微生物的獲取方式、篩選過程、生物學實驗方法、用途和效果的證明方法等；（ 2） DNA重組：源基因的獲取方法、重組制備方式、工藝條件、純化步驟、鑒定方法等。具體實施方式應與技術方案相一致，并且應當對權利要求書的技術特征給予詳細說明，以支持權利要求書（有多種實施方式時，提供多個實施例）；還應給出相關性能、效果表征的數(shù)據(jù)等。附圖：基因工程圖譜（包

13、括 HPLC圖譜、實驗曲線、基因重組、電泳圖譜等） ，并針對附圖進行說明。實施例環(huán)介導等溫基因擴增反應體系的準備：（ 1）反應液： 10mM dNTP 、10×ThermoPol 反應緩沖液、 150mM MgSO4 、 5mM Betaine ，四者的體積比為 8： 5： 3： 10；;.（ 2）引物液：包括 4pmol/ l 內(nèi)引物 1、 4pmol/ l 內(nèi)引物 2、 1 pmol/ l外引物 1、1 pmol/ l外引物2，四條引物分別為：內(nèi)引物 1：5 -TGGTCGTAGTAGGTCGATGGGGAGTCGATCTGCACACAGCT-3（SEQ IDNo.1 ）；內(nèi)引物

14、 2：5 -TGCGCGATGGCGAACTCAAGGCACCGTAAACACCGTAG-3（SEQ IDNo.2 ）；外引物 1：5 -TCATCGCCGATCATCAGG-3（SEQ IDNo.3 ）；外引物 2：5 -CGAGTTTGGTCATCAGCCG（-3SEQ IDNo.4）；（ 3）DNA聚合酶： Bst DNA聚合酶，濃度為 8U/l ；（ 4）顯色劑：熒光染料1× SYBR GreenI 。用上述反應體系按以下方法對結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌進行鑒定。本實施例的待檢樣品為已鑒定為分枝桿菌患者的痰液，當然，也可以為已鑒定為分枝桿菌患者的支氣管灌洗液及其它樣品，或者分離的分枝桿菌。1、模板 DNA提取：1）將 3ml 的痰標本置于室溫；2）在痰樣標本中加入2 倍痰樣體積的4%的 NaOH；3）每隔 2min 渦旋振蕩15s ，處理 15min，然后吸取1ml 加入帶旋蓋的離心管中；4）12000r/min離心 15min ，去上清液；5）加入 0.9%的 NaCl1ml ，洗滌， 12000r/min離心 15min，去上清液；6）加入 100l的純化水；7）100煮 20min，然后冰浴10min ；8）離心取上清液轉移至另一支離心管中作為模板DNA。2、環(huán)介導等溫基因擴增反應