用液相芯片技術(shù)定量測定人血清CEA、AFP和HBsAg 醫(yī)學(xué)論文

1、    用液相芯片技術(shù)定量測定人血清CEA、AFP和HBsAg 醫(yī)學(xué)論文              本文由中國論文范文收集整理。               作者：陳瑋， 李明， 吳英松， 李妙艷， 何蘊(yùn)韶【摘要】   【目的】 采用液相芯片技術(shù)同時(shí)定量測定人血清中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AF

2、P）和乙肝表面抗原（HBsAg），并對該 方法 進(jìn)行評價(jià)?！痉椒ā?制備抗體交聯(lián)微球及生物素標(biāo)記抗體，用雙抗體夾心法對臨床血清標(biāo)本進(jìn)行測定?！窘Y(jié)果】 同時(shí)檢測CEA、AFP和HBsAg時(shí)的線性范圍分別為0.032200 ng/mL、0.02255 U/mL、0.261 000 ng/mL，最低檢測限分別為8.90 pg/mL、0.013 U/mL、0.24 ng/mL，批內(nèi)變異系數(shù)（CV）< 9%，批間CV < 14%。檢測CEA、AFP、HBsAg的靈敏度分別為96.4、95.8、92，特異度分別為95.6、94.2、100，準(zhǔn)確度分別為96、95、96。其檢測結(jié)果與化學(xué)發(fā)光免疫

3、 分析 法（CLIA）或時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）之間呈顯著的等級相關(guān)關(guān)系。該方法僅需1 ?滋L標(biāo)本，3 h即可完成檢測?！窘Y(jié)論】 液相芯片技術(shù)具有可聯(lián)合檢測多項(xiàng)指標(biāo)、高通量、線性范圍廣、靈敏度高、重復(fù)性好、節(jié)省樣品和時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)，具有臨床 應(yīng)用 潛力。 【關(guān)鍵詞】   液相芯片； 微球懸浮陣列技術(shù)； Luminex； 腫瘤標(biāo)志物； 乙型肝炎表面抗原     Abstract: 【Objective】 To simultaneously quantify carcinoembryonic antigen (CEA), alpha fet

4、oprotein (AFP), and hepatitis B surface antigen (HBsAg) in human serum using multiplexed Luminex assay and evaluate the assay performance. 【Methods】 Biotinylated  detection  antibodies  and  microspheres  coupled  with capture antibodies were prepared. A sandwich immuno

5、assay was established to measure the three analytes in serum samples. 【Results】 Linear ranges were 0.032200 ng/mL, 0.02255 U/mL, 0.261 000 ng/mL, and detection limits were 8.90 pg/mL, 0.013 U/mL, 0.24 ng/mL for CEA, AFP, and HBsAg, respectively. The intra-and inter-assay coefficients of variation we

6、re less than 9% and 14% respectively. For CEA, AFP, and HBsAg, sensitivity were 96.4%, 95.8% and 92%, specificity were 95.6%, 94.2% and 100%, and accuracy were 96%, 95% and 96%, respectively. Significant Spearman rank correlations were found between the results obtained by Luminex assay and by chemi

7、luminescence immunoassay (CLIA) or time-resolved fluorescence immunoassay (TRFIA). Only 1 microliter of serum and 3 hours were needed for Luminex assay. 【Conclusion】 With the advantages of unique capability of multiplexing and high-throughput, good reproducibility, increased detection range and sens

8、itivity, Luminex assay would have a great potential in clinical application.    Key words: liqui chip; suspension bead array; Luminex; tumor markers; hepatitis B surface antigen          腫瘤標(biāo)志物對于腫瘤普查、診斷、分期、療效監(jiān)測及預(yù)后判斷等具有重要價(jià)值，臨床上常聯(lián)合檢測多種標(biāo)志物以提高腫瘤診斷的陽性

9、率和特異性，但 目前 常用的檢測手段如放射免疫測定、酶聯(lián)免疫測定、化學(xué)發(fā)光法等僅能單獨(dú)檢測。液相芯片是一種新型生物芯片技術(shù)平臺(tái)，它在不同熒光編碼的微球上進(jìn)行抗原-抗體及核酸雜交反應(yīng)，通過兩束激光分別檢測微球編碼和熒光信號(hào)以達(dá)到定性和定量分析目的。除了具有快速、靈敏、靈活、高通量等顯著特點(diǎn)外，液相芯片最大優(yōu)勢在于可同時(shí)對同一樣本中多達(dá)100種不同目的分子進(jìn)行分析。本 研究 應(yīng)用液相芯片技術(shù)利用雙抗體夾心免疫分析原理同時(shí)檢測了人血清中的癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和乙肝表面抗原（HBsAg），評價(jià)了該方法的線性范圍、最低檢測限、精密度、靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度等指標(biāo)，并對檢測結(jié)果與化學(xué)發(fā)光

10、免疫分析法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）和時(shí)間分辨熒光免疫分析法（time-resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）進(jìn)行了相關(guān)性分析。     1   材料與方法     1.1   材料和儀器    單克隆抗體購自芬蘭Medix公司和美國Fitzgerald公司，癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）抗原購自美國Biodesign公司，重組乙肝表面抗原（HBsAg）購自上海精睿生物

11、科技 有限公司。羧基化微球購自美國Luminex公司。牛血清白蛋白（BSA）購自美國Fitzgerald公司。2-嗎啉乙磺酸(MES)、N-羥基硫代琥珀酰亞胺（Sulfo-NHS）和生物素-N-羥基琥珀酰亞胺酯購自美國Sigma-Aldrich公司。碳二亞胺（EDC）購自美國Pierce公司。藻紅蛋白標(biāo)記的鏈霉親和素（SA-PE）購自美國Molecular Probes公司。帶濾膜離心管、MultiScreen MABVN 1.2 ?滋m濾板和真空抽濾裝置購自美國Millipore公司。Bio-Plex檢測系統(tǒng)購自美國Bio-Rad公司。100份正常血清標(biāo)本（健康體檢者）、100份CEA/AFP陰性和陽性血清標(biāo)本（采用Bayer全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測CEA和AFP）和100份HBsAg陰性和陽性血清標(biāo)本（采用Roche電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測）來自解放軍301 醫(yī)院 、南方醫(yī)院和廣州軍區(qū)總醫(yī)院。HBsAg時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒由廣州達(dá)瑞抗體工程有限公司提供。 關(guān)鍵詞:測定,技術(shù),定量,芯片,檢測,醫(yī)學(xué)論文,用液相芯片技