景天三七中總黃酮提取條件和含量分析

1、景天三七中總黃酮提取條件和含量分析     【摘要】  目的：研究不同提取溶劑對(duì)景天三七中總黃酮的含量影響及最佳提取條件下總黃酮的含量。方法：采用鹽酸?裁痙鄯ê痛姿崆躍疤烊?七中總黃酮進(jìn)行檢識(shí)，并用不同溶劑對(duì)景天三七中總黃酮進(jìn)行了提取，以分光光度法測定總黃酮含量，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，以10%Al(NO3)3?5%NaNO2為顯色劑，在508nm波長處進(jìn)行測定。結(jié)果：檢識(shí)試驗(yàn)證明景天三七中含有黃酮類物質(zhì)，且最佳提取溶劑為80%乙醇(P<0.05)。在此提取條件下，測得景天三七中總黃酮的含量為18.39mg?g-1，RSD為2.2%(n

2、=5)?？傸S酮測定線性范圍為15.2045.60g?mL-1(r=0.999 7)，平均回收率為95.74%，RSD為0.98%(n=6)。結(jié)論：景天三七中黃酮類物質(zhì)的最佳提取溶劑為80%乙醇。本法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定，適合于景天三七中總黃酮含量分析。 【關(guān)鍵詞】  景天三七;黃酮;分光光度法【ABSTRACT】 Objective：To study the extracting conditions and determination for total flavonoids in Se?dum Aizoon L. with different solvent. Metho

3、ds：To determine the flavonoids in Sedum Aizoon L. by HCl ? Mg and Pb(AC)2 reactions. Rutin was taken as standard，the colour?developing agent was the mixed solution of 10%Al(NO3)35%NaNO2.The total flavonoids in Sedum Aizoon L. were analyzed by spectrophotometry at 508nm,and series of extracting solve

4、nts were used to total flavonoids.Results：There were flavonoids in Sedum Aizoon L. and the best extracting solvent of all was 80% ethanol.Calibration curve was constructed in the range of 15.2045.60g?mL-1(r=0.999 7)for total flavonoids.The average recovery was 95.74% and RSD of the methods was 0.98%

5、(n=6).The average content of total flavonoids was 18.39mg?g-1 with 80% ethanol extracting.Conclusion：The best extracting solvent of all for total flavonoids in Sedum Aizoon L.was 80% ethanol.The method was accurate，reliable，reproducible and stable for total flavonoids in Sedum Aizoon L.【KEY WORDS】 S

6、edum Aizoon L.,Flavone,Spectrophotometry景天三七(Sedum Aizoon L.)為景天科景天屬植物，別名土三七、費(fèi)菜、血散、養(yǎng)心草，性平，味甘，微酸，無毒，有涼血止血，散瘀，消炎，安神，鎮(zhèn)痛等作用1,景天三七的廣泛用途越來越多地被人們所接受。研究表明，景天三七中含有沒食子酸等多種酚酸以及谷甾醇、多糖等成分2?5，但有關(guān)景天三七中黃酮類成分的研究較少。而黃酮類化合物具有抗腫瘤、抗癌、解熱、保肝、抗衰老等作用6。我們通過對(duì)景天三七中總黃酮的提取條件和含量進(jìn)行研究，對(duì)進(jìn)一步研究景天三七的藥用價(jià)值具有指導(dǎo)意義。采用水及不同濃度的乙醇溶液為提取溶劑，利用分光光法

7、測定總黃酮的含量，比較不同溶劑對(duì)景天三七中總黃酮提取效率的影響。1 材料與方法1.1 儀器721分光光度儀(上海)，A/D分析天平(1/10萬，日本)，萬分之一天平(上海)，電熱恒溫水槽(上海)。1.2 試藥野生景天三七(根)采自河北省張家口，由我校王德富老師鑒定。蘆丁對(duì)照品購自中國生物制品檢定所，其余試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為二次去離子水。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 景天三七中黃酮類化合物檢識(shí)取景天三七藥材的干燥粉末42.7g在沸水浴中進(jìn)行提取2h，對(duì)提取液中黃酮類物質(zhì)進(jìn)行檢識(shí)。本試驗(yàn)按文獻(xiàn)7采用兩種方法檢識(shí)。第一種方法為鹽酸?裁痙鄯從?向提取液中加少許鎂粉，振搖，然后滴加幾滴濃鹽酸，幾分鐘

8、后溶液中上升泡沫呈紅色;第二種方法向提取液中加醋酸鉛溶液，生成棕黃色沉淀。通過以上兩種方法可知景天三七中含有黃酮類物質(zhì)。1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制1.3.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取120干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品15.20mg，用95%乙醇溶解，定容至50.00mL，搖勻，得濃度為0.304 0mg?mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。1.3.2.2 吸收曲線的制作 取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.20mL于10mL比色管中，加水至3.00mL，加入5%亞硝酸鈉水溶液0.50mL，混勻，放置6min。加入10%硝酸鋁0.50mL，搖勻，放置6min后加入4%氫氧化鈉3.00mL，混勻，用蒸餾水定容至10.00mL

9、，搖勻，放置15min。以試劑作空白，在470530nm波長范圍內(nèi)測定吸光度8。以波長()為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)作圖，得吸收曲線。1.3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00mL，0.50mL，0.60mL，0.90mL，1.20mL，1.50mL，1.80mL于7只10mL比色管中，按照“1.3.2.2吸收曲線的制作”項(xiàng)下顯色，在最大吸收波長處測定各溶液的吸光度A值，以濃度C對(duì)吸光度A作圖，得回歸方程A=bC+a。1.3.3 供試液的制備取景天三七藥材干燥粉末18份，每份0.2g，均精密稱定，分為6組，各組分別加入水、無水乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇和6

10、0%乙醇各15mL，浸泡過夜。水提取條件為沸水浴，不同濃度乙醇液的提取溫度為水浴75，提取60min，冷卻后，吸取上清液。再加入各提取溶劑10mL，再次提取60min。合并兩次提取液，定容至25.00mL，搖勻，備用。1.3.4 樣品含量測定 分別精密吸取上述供試液2.00mL，按“1.3.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作”項(xiàng)下顯色和測定。同時(shí)精密吸取供試液2.00mL于10mL比色管中，不加顯色劑，其余同上，最后加蒸餾水稀釋至刻度，作為試樣空白。測得各供試液的吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量。2 結(jié)果2.1 樣品溶液中黃酮類化合物檢識(shí)通過“1.3.1樣品溶液中黃酮類化合物檢識(shí)”可以證明景天三七中含有黃

11、酮類成分。2.2 吸收曲線 從吸收曲線得出，樣品顯色后在508nm處有最大吸光度，故選擇此波長為測定波長。2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 按照“1.3.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作”項(xiàng)中的方法顯色操作，在波長508nm處測得各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A值，以濃度C對(duì)吸光度A進(jìn)行回歸，得回歸方程A= 0.011 9C-0.039 5，(C：g?mL-1)，r=0.999 7(n=5)。結(jié)果表明在15.2045.60 g? mL-1的范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好的線形關(guān)系。2.4 不同溶劑對(duì)景天三七中總黃酮提取的影響 按“1.3.4樣品含量測定”項(xiàng)下操作，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品含量。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，80%乙醇為溶劑、75水浴條件下

12、提取的總黃酮含量最高(t檢驗(yàn)，P<0.05)(表1)。表1 不同溶劑對(duì)景天三七總黃酮提取的影響2.5 樣品含量測定 以80%乙醇為溶劑，在75水浴條件下提取，得總黃酮平均含量為(18.39±0.40)mg?g-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.2%(n=5)(表2)。表2 樣品測定結(jié)果2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批藥材5份，按“1.3.3供試液的制備”項(xiàng)的方法提取，再按“1.3.4樣品含量測定”項(xiàng)下進(jìn)行分析，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算景天三七中總黃酮的含量，各含量的RSD% 為2.2%(n=5)。2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按 “1.3.4樣品含量測定”項(xiàng)下進(jìn)行操作，測定同一供試液在不同時(shí)間的吸光度。

13、結(jié)果表明，吸光度值在顯色后60min內(nèi)基本不變，因此測定應(yīng)控制在顯色60min內(nèi)完成。2.8 精密度試驗(yàn) 按“1.3.4樣品含量測定”項(xiàng)下操作，對(duì)其中一份樣品溶液，平行測定5次，代入回歸方程，計(jì)算景天三七中總黃酮含量，RSD為0.05%(n=5)。2.9 回收率試驗(yàn) 取已知總黃酮含量的景天三七樣品，加入適量蘆丁對(duì)照品，按“1.3.3供試液的制備”和“1.3.4樣品測定”項(xiàng)下進(jìn)行操作，經(jīng)計(jì)算得平均回收率為95.74%，RSD為0.98%(n=6)。3 討論3.1 我們通過鹽酸?裁痙鄯從?和醋酸鉛反應(yīng)，驗(yàn)證了景天三七中確含有黃酮類物質(zhì)。黃酮類化合物是一類在多種植物中廣泛分布的多酚化合物，其具有抗氧

14、化、清除自由基、抗腫瘤、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎免疫、抗衰老等藥理學(xué)作用9。3.2 采取水和不同濃度乙醇進(jìn)行提取，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，得出景天三七中黃酮類化合物最佳提取溶劑為80%乙醇(P<0.05)。在此提取條件下，測得景天三七中總黃酮的含量為18.39mg?g-1，RSD為2.2%(n=5)。3.3 關(guān)于景天三七的研究報(bào)道相對(duì)較少，而更多有關(guān)有效成分分析和藥理藥效等方面的工作，有待今后進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】  1 謝宗萬.中藥材品種論述?上冊M.第2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1989.79?80.2 付煜榮，張萬明，陳桂敏,等.景天三七中沒食子酸和總酚酸含量測定J.中成藥，2006,28(7)：1016?1018.3 國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站.植物藥有效成分手冊M.北京：人民衛(wèi)生出版社,1986.476.4 付煜榮，張紅芬，張小紅.野生型和栽培型土三七總酚酸的含量比較J.河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2008,25(5):22?24.5 付煜榮,王歡,章立波,等.土三七