康寧克通或干擾素局部注射對(duì)瘢痕PDGFBB基因表達(dá)影響

1、    康寧克通或干擾素局部注射對(duì)瘢痕 PDGF BB基因表達(dá)影響        【摘要】目的明確康寧克通和干擾素-2b對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的抑制是否通過(guò)PDGF途徑。方法對(duì)6例增生性瘢痕同一個(gè)體分區(qū)域同時(shí)局部注射康寧克通或干擾素-2b后3天及7天的PDGF BB mRNA原位表達(dá)進(jìn)行了觀察。結(jié)果康寧克通或干擾素-2b在局部注射后7天增生性瘢痕的PDGF BB mRNA表達(dá)強(qiáng)度比未注射區(qū)均明顯減少(P<0.01)，但局部注射后3天表達(dá)強(qiáng)度與未注射區(qū)

2、相比均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。增生性瘢痕的PDGF BB mRNA原位表達(dá)強(qiáng)度高于正常皮膚。結(jié)論激素及干擾素-2b治療瘢痕的機(jī)制之一是通過(guò)抑制PDGF基因表達(dá)，從而減少成纖維細(xì)胞的有絲分裂，使瘢痕的成纖細(xì)胞增殖受到抑制。【關(guān)鍵詞】增生性瘢痕PDGF BB基因原位表達(dá)康寧克通干擾素-2b Effects of intralesional injection of kenalog or interferon -2b on PDGF BB gene expression in situ of hypertrophic scarsXU Shaojun, BAO Weihan, YANG X

3、iaolin,et al.The Research Centre of Plastic Surgery,The Third Clinical School of Beijing Medical University,Beijing 100083【Abstract】ObjectiveThe study is to determine whether kenalog or interferon -2b inhibits fibroblast growth in hypertrophic scars through decreasing PDGF.MethodSix patients with hy

4、pertrophic scars received intralesional injection of kenalog or interferon -2b.On the 3rd and 7th day after injection,scar samples from each patient were collected and PDGF mRNA expressions in situ were studied.ResultsOn the 7th day after intralesional injection of kenalog or interferon -2b,expressi

5、ons of PDGF BB mRNAs decreased significantly (P<0.01).However,on the 3rd day the expressions of PDGF BB mRNAs of the intralesional-injected area and non-injected area were not significantly different (P>0.05).Gene expressions of PDGF BB in situ were higher in hypertrophic scars than in normal

6、skin.ConclusionThe mechanism of kenalog or interferon -2b in ameliorating hypertrophic scar is to reduce mitosis and prohibit proliferation of fibroblasts in hypertrophic scars by inhibiting PDGF gene expression.【Key words】Hypertrophic scarsPDGF BBmRNA expression in situKenalogInterferon -2b增生性瘢痕是由于

7、皮膚深層的損傷所致，以過(guò)多的膠原沉積為特征。其生成與成纖維細(xì)胞的增殖及皮膚創(chuàng)傷的持續(xù)過(guò)度修復(fù)有關(guān)。血小板源生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)被證實(shí)能促進(jìn)成纖維細(xì)胞的有絲分裂1，而成纖維細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞能形成和分泌PDGF。我們發(fā)現(xiàn)氫化可的松及干擾素-2b能抑制瘢痕疙瘩及正常皮膚的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)2。為探討激素及干擾素-2b對(duì)在體增生性瘢痕是否通過(guò)PDGF途徑對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞產(chǎn)生抑制，對(duì)6例增生性瘢痕局部注射康寧克通(醋酸去炎松)及干擾素-2b，然后對(duì)組織中細(xì)胞的PDGF基因原位表達(dá)情況進(jìn)行了研究。1材料與方法1.1材料1.1.1組織來(lái)

8、源：實(shí)驗(yàn)采用6例標(biāo)本取自北京醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院成形外科燒傷后增生性瘢痕病例，并從未使用過(guò)任何局部用藥。男5例，女1例。年齡748歲。病變部位為腋下、手臂、前胸及面頰。病程12年。1.1.2PDGF-BB cDNA探針，中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院。1.1.3康寧克通(醋酸去炎松)，德國(guó)西斯平(Astrapin)大藥廠。1.1.4干擾素-2b，美國(guó)Schering-Plough公司。1.2方法1.2.1組織取材前處理：對(duì)6例分別于術(shù)前7天及3天向每一增生性瘢痕內(nèi)同時(shí)分區(qū)段注射康寧克通(40mg/ml)或干擾素-2b(150萬(wàn)U/ml)，所有瘢痕直徑均在8cm以上，厚度1cm以上，注藥區(qū)段間間隔45

9、cm或以上，注藥量以瘢痕組織變白為止，深度小于1cm。每一患者于手術(shù)切除瘢痕時(shí)取注藥區(qū)(7、3天康寧克通及干擾素-2b)標(biāo)本4塊及未注藥區(qū)的標(biāo)本1塊，注藥區(qū)標(biāo)本為在該區(qū)中央切取，0.5cm×0.5cm×0.5cm大小，以保證所取標(biāo)本曾受注射。同時(shí)取4例大腿部正常皮膚。取材后置液氮保存。1.2.2cDNA探針的標(biāo)記：用地高辛隨機(jī)引物探針標(biāo)記及檢測(cè)試劑盒(Mannhein德國(guó))按說(shuō)明步驟標(biāo)記探針。1.2.3mRNA的原位雜交3：將液氮凍存的標(biāo)本切成810m的冰凍切片，經(jīng)處理后，42預(yù)雜交4h，然后去除預(yù)雜交液，加含標(biāo)記探針濃度為500ng/ml的雜交液，42雜交16h。1.2.

10、4雜交信號(hào)的檢測(cè)：用地高辛試劑盒按說(shuō)明步驟對(duì)雜交信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。1.2.5陰性對(duì)照：雜交前標(biāo)本加RNA酶消化RNA，加標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交。雜交液中加未標(biāo)記的cDNA探針進(jìn)行雜交。雜交時(shí)加標(biāo)記的cDNA探針，檢測(cè)時(shí)不加地高辛抗體。2結(jié)果光鏡下觀察，呈藍(lán)色、淺藍(lán)色或紫紅色為陽(yáng)性信號(hào)(1)，陰性對(duì)照組未見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)(2)。陽(yáng)性信號(hào)根據(jù)細(xì)胞及組織形態(tài)主要表達(dá)在成纖維細(xì)胞、炎性細(xì)胞及血管壁上。1PDGF原位雜交陽(yáng)性信號(hào)(×400)Fig 1Positive signals of PDGF gene expression in situ(×400）2陰性對(duì)照Fig 2Negative co

11、ntral信號(hào)的強(qiáng)弱根據(jù)以下方法進(jìn)行評(píng)估：用武漢產(chǎn)格式顯微測(cè)微尺在400×光鏡下數(shù)10個(gè)0.0052mm2面積中的陽(yáng)性信號(hào)，將其相加，作為1個(gè)0.052mm2中的陽(yáng)性信號(hào)數(shù)，每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)觀察10個(gè)0.052mm2面積的陽(yáng)性信號(hào)數(shù)，取平均值。每例標(biāo)本的陽(yáng)性信號(hào)均值反映了PDGF的mRNA的原位表達(dá)強(qiáng)度。6例增生性瘢痕注射及未注射康寧克通或干擾素-2b PDGF mRNA原位表達(dá)強(qiáng)度及注藥后與未注藥組作配對(duì)t檢驗(yàn)見(jiàn)表1。4例正常皮膚的陽(yáng)性信號(hào)只有極少量或沒(méi)有表達(dá)(06個(gè)陽(yáng)性信號(hào))。因此，從本實(shí)驗(yàn)可得到以下結(jié)果：康寧克通局部注射后3天，雖PDGF基因原位表達(dá)強(qiáng)度下降，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無(wú)顯著意

12、義。至注射后7天，PDGF基因表達(dá)被明顯抑制。干擾素-2b局部注射后3天，PDGF基因表達(dá)未受明顯抑制。注射后7天，PDGF基因表達(dá)被明顯抑制。增生性瘢痕的PDGF基因表達(dá)多于正常皮膚。表1瘢痕注藥區(qū)及未注藥區(qū)PDGF基因表達(dá)Tab 1PDGF mRNA expressions in situ of hypertrophic scarswith intralesional injection and without intralesional injection項(xiàng)目未注藥區(qū)注射康寧克通區(qū)注射干擾素區(qū)7天3天7天3天信號(hào)強(qiáng)度46.98±10.2727.87±3.2236.53

13、±5.3528.75±2.6939.77±3.51t值4.35022.21004.20671.6287P值<0.01>0.05<0.01>0.053討論 皮膚增生性瘢痕一般是皮膚創(chuàng)面持續(xù)過(guò)度修復(fù)的結(jié)果，其主要原因之一是成纖維細(xì)胞的過(guò)度增殖活化及遷移。而PDGF是激活成纖維細(xì)胞的一個(gè)重要因子4，它能促使成纖維細(xì)胞從G0/G1期進(jìn)入S期，從而使DNA合成，細(xì)胞增殖。同時(shí)PDGF的效應(yīng)可通過(guò)自分泌和旁分泌等局部作用完成，局部能分泌PDGF的細(xì)胞多少及分泌的量決定局部PDGF的濃度5。PDGF可分為AA、BB和AB 3類(lèi)，有學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PDGF

14、-BB對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞有絲分裂的刺激是正常皮膚的2倍，正常皮膚成纖維細(xì)胞對(duì)PDGF AB和BB刺激產(chǎn)生的化學(xué)趨化性反應(yīng)較強(qiáng)6。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示PDGF增多在增生性瘢痕的形成中是重要因素之一，PDGF的增高促使成纖維細(xì)胞增殖及趨化，而增殖的成纖維細(xì)胞又不斷分泌PDGF，如此形成惡性循環(huán)而使瘢痕不斷增生。激素治療瘢痕已有40余年的歷史，對(duì)瘢痕疙瘩及正常皮膚的成纖維細(xì)胞能產(chǎn)生抑制作用2，主要是使DNA含量減少，但激素通過(guò)什么途徑使DNA合成受到抑制，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示通過(guò)抑制PDGF的mRNA表達(dá)可以阻止PDGF的產(chǎn)生，無(wú)疑是其中的一條重要途徑，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這種對(duì)PDGF基因表達(dá)的抑制不是即刻產(chǎn)生而需長(zhǎng)

15、達(dá)數(shù)日，其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。干擾素-2b亦能抑制瘢痕疙瘩及正常皮膚的成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。干擾素-2b屬于細(xì)胞因子，有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示干擾素-2b能抑制PDGF的基因表達(dá)，且這種抑制作用亦需長(zhǎng)達(dá)數(shù)日，干擾素-2b對(duì)PDGF的抑制是直接作用還是需依賴(lài)其它的生長(zhǎng)、細(xì)胞因子或因素目前還不明確。本課題受邱武才基金贊助作者單位：北京醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院成形外科研究中心100083參考文獻(xiàn)1Kohler N,Linpton A.Platelets as a source of fibroblast growth-promoting activity. Exp Cell Res,1974,87

16、:297-301.2徐少駿，鮑衛(wèi)漢，王志剛.激素和干擾素對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)影響研究.中華醫(yī)學(xué)美容雜志，1997，3：4-6.3盧圣棟主編.現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京：高等教育出版社，1993：229-239.4Pierce GF,Mustoe TA,Altrock BW,et al.Role of platelet-derived growth factor in wound healing.J Cell Bio Chem,1991,45:319-326.5Ross R,Raines EW,Browen-Pope,et al.The biology of platelet-derived growth factor