青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮含量的測定

1、青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮含量的測定        【摘要】     目的測定青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮的含量。方法采用分光光度法，以蘆丁為對照品，并利用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色方法，對青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中的總黃酮含量進(jìn)行測定。結(jié)果在最大吸收波長510 nm處蘆丁測定的線性方程是A=12.737C0.003 5，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6 (n=7) , 測得方法的平均回收率為99.2 %（n=6），RSD=1.05% 。結(jié)論該方

2、法的測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠、快速、重復(fù)性好。     【關(guān)鍵詞】  錦雞兒屬 總黃酮 分光光度法    Determination  of the Total Flavonoid Content in  the plant of Caragana Fabr. from Different Areas in Qinghai ProvinceSONG Ping, ZHAO Mingde, YIN HaiqingDepartment of Chemistry, Qinghai Institute

3、of Nationalities，Xining 810007, ChinaAbstract：ObjectiveTo determine the total flavonoid content of Caragana Fabr. plant from different areas in Qinghai province. MethodsWith rutin as standard samples, spectrophotometry  method and the colour method of sodium nitritealuminium nitratesodium hydro

4、xide were used to determine the total flavonoid content in the plant of Caragana Fabr. from different areas in Qinghai province.ResultsThe calibration curve of rutin at 510nm was  A=12.737C0.003 5, r=0.999 6 (n=7) , and the average recovery was 99.2 % (n=6) with RSD of 1.05% .ConclusionThis

5、0; method  is  reliable, accurate,quick and  reproducible.Key words：Caragana Fabr.；  Total flavonoids；  Spectrophotometry豆科（Legu minosae）錦雞兒屬Caragana Fabr.植物，為落葉灌木，全世界約有一百多種，主要分布于亞洲和歐洲的干旱和半干旱地區(qū)，是溫帶亞洲的代表屬之一。我國錦雞兒屬植物有62種，9變種12變型，主要產(chǎn)于西北、華北、東北、西南等干旱地區(qū)和荒漠地帶；青海產(chǎn)20種，3變種和1變型1,2。該屬植物

6、藥用部位為其根、根皮和花，根和花的藥用作用主要是祛風(fēng)止痛、活血散瘀、補氣益腎、滋陰健脾等，治療頭暈腰酸、婦女氣虛白帶、耳鳴眼花、肺虛久咳、小兒疳積、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。近年來臨床研究報道，該屬植物對抗炎、治療高血壓病也有明顯效果，而且還具有較強的抗癌及抗病毒的活性38。由于該屬植物資源豐富、分布廣泛，而且具有較強的藥理活性，但目前研究的品種還是較少，因此，為全面利用該屬植物資源并且充分開發(fā)其藥用價值，給合理選取該屬植物用藥品種提供可靠的參考依據(jù)，本文建立了錦雞兒屬植物中總黃酮含量的分析方法，并首次對青海省幾種錦雞兒屬植物中的總黃酮含量進(jìn)行了測定。1  器材1.1  儀器與試

7、劑722型可見分光光度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）； 恒溫水浴鍋（金壇恒豐儀器有限公司）；分析天平(上海良平精密儀器儀表有限公司)；常用玻璃儀器等。對照品蘆丁 (中國藥品生物品檢定所) ，實驗中試劑均為分析純。1.2 樣品采集2007-08在青海省境內(nèi)采集錦雞兒屬植物，由青海省藏藥研究所多杰研究員鑒定。將采集藥材的根莖部分去除雜質(zhì)、切斷，陰干，粉碎后過80目篩作為試驗藥材。2 方法2.1 蘆丁對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品0.025 0 g，75%乙醇溶解并定容至100 ml容量瓶中稀釋至刻度，即得蘆丁對照品儲備液，使用時稀釋成所需濃度即可。2.2 錦雞兒屬植物中總黃酮提取方法的確定準(zhǔn)確

8、稱取粉碎過篩后的錦雞兒屬植物樣品10 g于燒瓶中，加入100 ml石油醚回流40 min進(jìn)行脫脂，棄去濾液，再加入100 ml 75%的乙醇，回流提取30 min共3次，棄去濾渣，合并濾液后進(jìn)行減壓濃縮，用75%乙醇定容至250 ml量瓶中，即得藥材中總黃酮的提取物911。3 結(jié)果3.1 最大吸收波長的確定取蘆丁對照品溶液4 ml采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色方法，在470560 nm波長范圍內(nèi)測定溶液的吸光度，結(jié)果得出該溶液在510 nm處有最大吸光度值，由此可以選擇510 nm作為實驗的檢測波長。3.2 實驗測定條件的選擇3.2.1 氫氧化鈉溶液用量的選擇精密吸取蘆丁對照品

9、溶液2 ml各4份, 分別置于25 ml容量瓶中, 各加5%亞硝酸鈉溶液1.0 ml，再加10%硝酸鋁1.0 ml，然后分別加入10% 氫氧化鈉5,10，15，20 ml，再用75%乙醇溶液稀釋至刻度, 搖勻，分別在510 nm處測定其吸光度（見表1）。由此選擇氫氧化鈉溶液的用量為10% NaOH 10 ml。表1  不同氫氧化鈉用量時蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度（略）3.2.2 硝酸鋁溶液用量的選擇在裝有蘆丁對照品溶液的4個25 ml容量瓶中, 各加5%亞硝酸鈉溶液1.0 ml，再分別加入10%硝酸鋁溶液0.5，1.0，1.5，2.0 ml，然后分別加入10%氫氧化鈉10 ml，定容, 分

10、別在510 nm處測定其吸光度，結(jié)果見表2。由此選擇硝酸鋁溶液加入量為1.5 ml最佳。表2  不同硝酸鋁用量時蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度（略）3.2.3 反應(yīng)溫度的選擇精密吸取蘆丁對照品溶液2 ml，加1.0 ml 5%亞硝酸鈉溶液, 1.5 ml 10%硝酸鋁溶液, 10%氫氧化鈉10 ml，分別在室溫、20,30,40時測定溶液吸光度值。實驗結(jié)果見表3。由此可知, 溫度對實驗測定沒有太大的影響, 所以可選擇室溫下對樣品進(jìn)行測定。表3  不同溫度下蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度（略）3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取蘆丁對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.

11、0，8.0 ml分別置于50 ml容量瓶中，各加1.0 ml 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻放置5 min，加1.5 ml 10%硝酸鋁溶液，搖勻放置5 min，再加10%的氫氧化鈉溶液10 ml，然后用75%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻放置10 min后，以試劑空白為參比，分別在510 nm處測定其吸光度。以蘆丁濃度C (g/ml) 為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，其線性方程為：A=12.737C0.003 5，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6 (n=7)。3.4 精密度實驗取濃度為0.025 0 mg/ml的蘆丁對照品溶液, 在“3.2”項選定的實驗條件下連續(xù)6次測定其吸光度A值, 計算得吸光度值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

12、RSD=0.99% (n=6) ，表明儀器精密度良好。3.5 重復(fù)性實驗精密稱取鬼箭錦雞兒樣品10 g，共6份，按“2.2”項下方法操作制備供試品溶液，然后在“3.2”項選定的實驗條件下測定其吸光度A值, 計算得吸光度值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.03%(n=6), 實驗結(jié)果表明本方法的重復(fù)性滿足要求。3.6 穩(wěn)定性實驗精密稱取鬼箭錦雞兒樣品10 g，按“2.2”、“3.2”項下方法操作，然后分別在2，4，6，8，10 h時測定其吸光度A值, 結(jié)果表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。3.7 回收率實驗精密稱取6份已知含量的鬼箭錦雞兒樣品10 g , 依次加入一定量蘆丁對照品溶液，按“2.2”、“3.2

13、”項下方法操作，測得其平均回收率為99.2 %（n=6），RSD=1.05 %。3.8 藥材中總黃酮含量的測定稱取各種錦雞兒屬樣品按“2.2”項下方法制備供試品溶液，取試樣離心，除去懸浮雜質(zhì)，準(zhǔn)確吸取上層清液1 ml 4份, 分別置于50 ml容量瓶中, 其中1份用75%的乙醇定容至刻度, 作為參比溶液。 其余3份按“3.2”項下實驗條件分別在波長510 nm處測定其吸光度A值。結(jié)果見表4。經(jīng)計算后可得出青海地區(qū)幾種錦雞兒植物中總黃酮的含量。表4  青海幾種錦雞屬植物中總黃酮含量的測定結(jié)果（略）4 討論實驗表明，經(jīng)過優(yōu)化選擇在波長510 nm處錦雞兒屬植物中總黃酮的測定條件是在5%的

14、亞硝酸鈉溶液1.0 ml, 10%的硝酸鋁溶液1.5 ml, 10%的氫氧化鈉溶液10 ml下為最佳。另外由于本實驗利用分光光度法測定的是錦雞兒屬植物中所有黃酮苷和苷元的總含量，加之采用的是堿性介質(zhì)中加鋁鹽顯色的方法, 從而也使得樣品中總黃酮的測定含量比較高和準(zhǔn)確可靠。 通過分析檢測發(fā)現(xiàn)青海省錦雞兒屬樣品中總黃酮含量各不相同，其原因可能是由于品種不同、采集時間、地點的不同而引起的；另外不同海拔地區(qū)以及不同氣候特點等原因也可能對實驗結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。    錦雞兒屬植物在我國的許多地區(qū)都有廣泛分布，資源豐富，適應(yīng)能力強，由于其有根瘤，能提高土壤肥力，綠化

15、荒山，保持水土，防風(fēng)固沙。因此，根據(jù)本文的分析測定結(jié)果，不僅可為選擇好的錦雞兒屬品種進(jìn)行種植、保護(hù)生態(tài)環(huán)境提供一定的參考依據(jù)，而且還可為有針對性的充分發(fā)揮該屬植物的藥用價值起到積極的促進(jìn)作用。    【參考文獻(xiàn)】  1中國科學(xué)院西北高原生物研究所青海植物志編輯委員會. 青海植物志M. 西寧：青海人民出版社，1999：173.2牛西午. 檸條研究論文集C. 太原： 山西科學(xué)技術(shù)出版社，2003：163.3劉紅霞，林文翰，楊峻山，等. 錦雞兒屬植物化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展J. 中國藥學(xué)雜志，2004，39(5)：327.4中科院西北高原生物研究所 . 藏藥志(修訂版)M. 西寧：青海人民出版社，1991：297.5中華本草編委會. 中華本草藏藥卷M. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：343.6中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志M. 北京：科學(xué)出版社，1993，42（1）：49.7樸惠順，金光洙. 錦雞兒屬植物研究進(jìn)展J.時珍國醫(yī)國藥，2005，