蒙藥阿給生藥及炭藥中總黃酮的含量測定(一)

1、蒙藥阿給生藥及炭藥中總黃酮的含量測定(一)    作者：張婉，唐麗，謝坤，崔箭【摘要】 目的對蒙藥阿給生藥及炭藥中的黃酮類成分進行初步的定性、定量分析。方法采用顯色反應進行定性檢識，并以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮含量。結果 阿給生藥及炭藥均含有黃酮類成分，但兩者所含主要黃酮類成分的類型有所差異；生藥與炭藥的總黃酮含量分別為4.78%，2.26%，生藥總黃酮含量約為炭藥的2倍。結論炮制對阿給藥材中黃酮類成分類型及總黃酮含量有一定的影響。分光光度法簡便靈敏，重現(xiàn)性良好，適用于阿給總黃酮的含量測定。 【關鍵詞】 蒙藥阿給； 總黃酮； 定性檢識；

2、 含量測定Abstract：ObjectiveTo identify and determine the total flavonoids in raw and charred Agei. MethodsThe species of flavonoids in samples were identified by color reactions, and the contents of total flavonoids were measured through UV spectroscopy using rutin as control. ResultsThe main species of

3、 flavonoids in raw and charred Agei were different, and the average contents of total flavonoids in raw and charred Agei were 4.78% and 2.26% respectively. ConclusionDrug-processing had some effect on the species and the content of total flavonoids in Agei. Spectrophotometry was an easy operated, ac

4、curated, reproducible method for content determination of total flavoniods.Key words： Mongolian drug Agi; Total flavonoids; Qualitative identification; Content determination 阿給為菊科蒿屬植物冷蒿Artemisia frigida Willd. (Compositae)的小灌木，又名小白蒿、菟毛蒿，具有蒿類的芳香氣味，是蒙古族常用的藥用植物，蒙藥名阿給。蒙醫(yī)藥大師占布拉道爾吉編著的無誤蒙藥鑒中有其藥用記載。阿給味苦，性燥、

5、淡、糙、鈍、涼，有止血、消腫、消“奇哈”之功效13，尤其是其炒炭炮制品止血效果顯著，療效在幾百年的應用中得到了證實。通過預試驗發(fā)現(xiàn)，黃酮類物質是阿給的主要化學成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃酮類成分具有抗菌消炎、抗氧化、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等多種生理活性。但迄今未見阿給炒炭前后黃酮類成分類型及總黃酮含量的文獻報道。本實驗通過化學顯色反應對阿給炒炭后黃酮類化學成分進行了定性檢識，并采用紫外分光光度法測定了總黃酮的含量，為合理地開發(fā)利用這一寶貴的民族藥物提供參考。1 儀器與材料1.1 儀器UV-4802H型紫外可見分光光度計（上海尤尼科儀器有限公司）；AL104型分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）

6、；旋轉蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）；6202型高速粉碎機（北京環(huán)亞天元機械技術有限公司）；索氏提取器（北京博美玻璃儀器廠）。1.2 材料蒙藥阿給（冷蒿）購自內蒙古藥材采購供應公司，內蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院蒙藥藥房鑒定，炭藥由北京普生霖藥業(yè)有限公司按文獻方法4代為炮制。蘆丁標準品由北京藥品生物制品檢定所提供，純度為99.2%，其他試劑均為AR級，由北京化學試劑公司提供。2 方法與結果2.1 樣品液的制備精密稱取阿給生藥和炭藥各1.000 g，分別置索氏提取器中，加250 ml 70%乙醇，熱回流提取2 h，完成虹吸5次，提取液定量轉移至250 ml容量瓶中，用70%的乙醇定容，待測。2.2

7、黃酮類成分的定性分析2.2.1 方法采用顯色反應對阿給生藥及炭藥中的黃酮類成分進行定性分析，檢識方法如下5：鹽酸+鎂粉實驗：取供試液1 ml于試管中，加入少許鎂粉，再加45滴濃鹽酸，水浴2 min顯色（同時做空白對照）。乙酸鎂實驗：用玻璃棒蘸取供試液涂于濾紙上，吹干，噴1%乙酸鎂的甲醇溶液，加熱干燥，在紫外燈下觀察。氫氧化鈉實驗：取供試液1 ml于試管中，加入4%氫氧化鈉溶液5滴，觀察現(xiàn)象。硝酸鋁實驗：用玻璃棒蘸取供試液涂于濾紙上，吹干，噴灑1%硝酸鋁溶液，觀察，再置紫外燈下觀察。濃硫酸實驗：取供試液1 ml于試管中，加入濃硫酸數滴，振蕩混勻，觀察現(xiàn)象。2.2.2 結果顯色反應結果見表1。表1

8、 阿給生藥及炭藥中黃酮類成分的定性檢識結果（略）*示有熒光定性分析結果表明：阿給生藥及炭藥均含有黃酮類成分，但兩者所含黃酮類成分的類型有所差異，生藥以黃酮、黃酮醇、查耳酮、異黃酮為主，通過炒炭炮制后，黃酮、黃酮醇類成分減少，而主要以查耳酮、異黃酮為主。2.3 總黃酮的含量測定6 以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定阿給生藥及炭藥中的總黃酮含量。2.3.1 蘆丁標準儲備液的配制精密稱取120 減壓干燥至恒重的蘆丁標準品10 mg，置于100 ml容量瓶中，加適量70%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，得0.1 mg·ml-1的蘆丁標準儲備液。2.3.2 最大吸收波長的選擇分別量取2.0 m

9、l蘆丁標準儲備液和樣品液置于3支10 ml試管中，加入3 ml 70%乙醇, 搖勻后加入5%亞硝酸鈉0.3 ml，搖勻，放置6 min，加入10%硝酸鋁溶液0.3 ml，搖勻，放置6 min，再加入4%氫氧化鈉溶液1 ml，搖勻，放置15 min后，以相應的試劑做空白對照，在分光光度計上進行全波長掃描，比較標準品和樣品的掃描曲線，確定以510 nm為最大吸收波長來進行阿給總黃酮含量的測定。2.3.3 標準曲線的繪制精密量取蘆丁標準儲備液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分別置于10 ml試管中，加70%乙醇補足5 ml，按“2.3.1”項所述的方法進行顯色，以溶劑為空白對照

10、，在紫外可見分光光度計上于510 nm波長處測定吸光度。結果見表2。表2 蘆丁標準品濃度與吸光度（略）以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標繪制標準曲線，用最小二乘法做直線回歸，得回歸方程A=10.942C+0.001 9，R2=0.999 6。結果表明蘆丁在0.0150.076 mg·ml-1濃度范圍內具有良好的線性關系見圖1。2.3.4 精密度實驗取同一供試品溶液按上述方法在波長510 nm處，以試劑空白為參比，重復測定5次，計算得RSD=0.40%（n=5），結果表明儀器的精密度良好。2.3.5 穩(wěn)定性實驗對同一供試品溶液，每間隔15 min測定吸光度，考察其在1 h之內的

11、穩(wěn)定性，計算得RSD=2.51%。結果顯示，隨著顯色時間的延長，所測得的總黃酮含量呈緩慢下降趨勢，但在1 h內基本保持穩(wěn)定，可滿足測定要求。2.3.6 重復性實驗取同種阿給藥材粗粉，按“2.2”項下方法平行制備5份樣液，進行含量測定，計算得RSD=1.40%（n=5）。結果表明，本實驗方法的重復性較好。圖1 蘆丁標準曲線（略）2.3.7 加標回收實驗精密量取適量阿給提取液（生藥2 ml，炭藥3 ml ）各4份，分別置于10 ml試管中，按下表精密加入一定體積的 0.1 mg·ml-1的蘆丁標準儲備液，再加70%乙醇補足體積5 ml，照前述方法進行含量測定，代入標準曲線回歸方程計算回收

12、率，結果見表3。2.3.8 樣品總黃酮含量的測定精密量取適量體積（V）的阿給提取液（生藥2 ml，炭藥3 ml）各5份，分別置于10 ml試管中，按標準曲線測定方法進行含量測定，根據回歸方程及回收率計算出藥材中總黃酮的含量，結果見表4。表3 回收率實驗結果（略）回收率P（）測得量-原有量加入量×100表4 阿給生藥及炭藥中的總黃酮含量（略）3 小結本實驗首次對蒙藥阿給炒炭前后的黃酮類成分類型及總黃酮含量進行了分析。顯色反應結果表明，阿給生藥及炭藥均含有黃酮類成分，但兩者所含黃酮類成分類型有所差異，生藥中以黃酮、黃酮醇為主，而炭藥中以查耳酮和異黃酮為主。以蘆丁為標準品，檢測波長為510

13、 nm，采用分光光度法測得阿給生藥及炭藥中總黃酮含量分別為4.78%和2.26%，生藥的總黃酮含量約為炭藥的2倍。實驗數據重現(xiàn)性好，加標回收率高，相對偏差小，該法適用于阿給藥材中總黃酮含量的測定。阿給中黃酮類成分含量豐富，但通過炮制后，黃酮、黃酮醇類成分減少，總黃酮含量明顯降低，這與炮制過程中某些黃酮類成分受熱分解有關，該結果對阿給藥材的利用具有重要的指導意義阿給資源豐富，具有止血、涼血、祛瘀的功效，極具開發(fā)潛力。因此，對蒙藥阿給及其炮制品中的黃酮類成分進行定性與定量分析將為該民族藥材的有效利用提供一定的參考依據。【參考文獻】1 布日額, 阿拉騰圖亞, 包金泉, 等. 蒙藥阿給的生藥學研究J. 中國民族醫(yī)學雜志, 1998, 4(增刊): 53.2 布日額, 吳秋實. 蒙藥阿給的民族植物學研究J.中藥材，2001，24（6）：394.3 崔 箭, 唐 麗, 藍 蓉，等.蒙藥阿