糞大腸桿菌群測定方法

1、水質(zhì) 糞大腸菌群的測定糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分，主要來自糞便。在44.5溫度下能生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群稱為糞大腸菌群。用提高培養(yǎng)溫度的方法，造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群生長的條件，使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群，從而更準(zhǔn)確地反映出水質(zhì)受糞便污染的情況。糞大腸菌群的測定可以用多管發(fā)酵法和濾膜法。 第一篇 多管發(fā)酵法1. 適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水及廢水中糞大腸菌群的測定。 2. 原理 多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)（most probable number）簡稱MPN來表示試驗(yàn)結(jié)果的。實(shí)際上它是根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，估計(jì)水體中的大腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法。如果從

2、理論上考慮，并且進(jìn)行大量的重復(fù)檢定，可以發(fā)現(xiàn)這種估計(jì)有大于實(shí)際數(shù)字的傾向。不過只要每一稀釋度試管重復(fù)數(shù)目增加，這種差異便會減少，對于細(xì)菌含量的估計(jì)值，大部分取決于那些既顯示陽性又顯示陰性的稀釋度。因此在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，水樣檢驗(yàn)所要求重復(fù)的數(shù)目，要根據(jù)所要求數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度而定。 3. 培養(yǎng)基和試劑 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有注明外，均為符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純化學(xué)試劑；實(shí)驗(yàn)用水為新制備的去離子水。 3.1單倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液： 成分： 蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 乳糖 5g 氯化鈉 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸餾水 1000mL 制法：將蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾

3、水中，調(diào)節(jié)pH為7.27.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混勻，分裝于含有倒置的小玻璃管的試管中，于高壓蒸汽滅菌器中，在115滅菌20min，貯存于暗處備用。 3.2 三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：按上述配方比例三倍（除蒸餾水外），配成三倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，制法同上。 3.3 EC培養(yǎng)液： 成分： 胰胨 20g 乳糖 5g 膽鹽三號 1.5g 磷酸氫二鉀（K2HPO4） 4g 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 1.5g 氯化鈉 5g 蒸餾水 1000mL 制法：將上述成分加熱溶解，然后分裝于含有玻璃倒管的試管中。置高壓蒸汽滅菌器中，115滅菌20min。滅菌后pH應(yīng)為6.9。 3.4 培

4、養(yǎng)基的存放 在密封瓶中的脫水培養(yǎng)基成品要存放在大氣濕度低、溫度低于30的暗處，存放時應(yīng)避免陽光直接照射，并且要避免雜菌侵入和液體蒸發(fā)。當(dāng)培養(yǎng)液顏色變化，或體積變化明顯時廢棄不用。 4. 步驟 4.1 水樣接種量 將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度確定水樣接種量。每個樣品至少用三個不同的水樣量接種。同一接種水樣量要有五管。 相對未受污染的水樣接種量為10mL、1mL、0.1mL。受污染水樣接種量根據(jù)污染程度接種1mL、0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水樣量可參考下表1。 表1 接種用水量參考表 接種量(mL）水樣種類 檢測方法 100 50 10 1

5、 0.1 10-2 10-3 10-4 10-5 井水 多管發(fā)酵法 × × × 河水、塘水 多管發(fā)酵法 × × × 湖水、塘水 多管發(fā)酵法 × × × 城市原污水 多管發(fā)酵法 × × × 如接種體積為10mL，則試管內(nèi)應(yīng)裝有三倍濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液5mL；如接種量為1mL或少于 1mL，則可接種于普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10mL中。 4.2 初發(fā)酵試驗(yàn) 將水樣分別接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中。在37±0.5下培養(yǎng)24h±2h。產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗(yàn)陽性。如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性。 4.3 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 輕微振蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽性結(jié)果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)或滅菌棒將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中。在44.5±0.5溫度下培養(yǎng)24h±2h（水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)基液面）。接種后所有發(fā)酵管必須在30min內(nèi)放進(jìn)水浴中。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽性。 5 結(jié)果的計(jì)算 根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所出現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目，從表2或表3中查得每升水樣中的糞大腸菌群。接種水樣為100mL2份、10mL10